【摘要】：目的：通過(guò)應(yīng)用3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)在肝纖維化動(dòng)物模型中調(diào)節(jié)自噬(autophagy)水平,觀察自噬水平的改變對(duì)肝纖維化的影響,并探討以自噬信號(hào)通路作為肝纖維化治療的新靶點(diǎn)的可行性及為肝纖維化的治療提供可能新的途徑。 方法：1.70只Balb/C小鼠隨機(jī)分為3組,模型組及3-MA組腹腔注射20%CCl4橄欖油溶液,劑量為2ml/kg,正常對(duì)照組腹腔注射等量的橄欖油2ml/kg,同時(shí)3-MA干預(yù)組腹腔注射3-MA,劑量為15μg/g,共8w,每周2次；2.第八周時(shí)采取眼眶靜脈血檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)酶、總膽紅素；3.透射電子顯微鏡觀察雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小體或自噬溶酶體；4.免疫組化檢測(cè)：微管相關(guān)蛋白1輕鏈和a-平滑肌肌動(dòng)蛋白；5.肝臟標(biāo)本切片行HE和Masson染色,并在光學(xué)顯微鏡下觀察纖維化程度和膠原纖維分布。 結(jié)果：1.三組間ALT、AST、TBIL檢測(cè)結(jié)果組間比較,模型組最高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；2.透射電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)正常對(duì)照組線粒體無(wú)明顯空泡化,胞內(nèi)無(wú)自噬小體。模型組細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)明顯的線粒體空泡化,大量的雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小體,3-MA干預(yù)組空泡化的線粒體和白噬小體數(shù)目均較少；3.模型組及3-MA干預(yù)組LC3-Ⅱ明顯高于空白對(duì)照組,且模型組較3-MA組高,三組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；4.α-SMA的表達(dá)在模型組及3-MA組明顯高于空白對(duì)照組,且模型組較3-MA組高,三組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；5.HE染色發(fā)現(xiàn)模型組肝纖維化程度較3-MA組重;6. Masson染色分析各組纖維組織平均光密度及總面積,發(fā)現(xiàn)三組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),且模型組最高。 結(jié)論：1.在CCL4所誘導(dǎo)的肝纖維化模型中存在自噬現(xiàn)象,細(xì)胞自噬參與肝纖維化的形成。2.細(xì)胞自噬抑制劑3-MA對(duì)肝纖維化有顯著抑制肝纖維化進(jìn)展的作用。3.3-MA能通過(guò)降低自噬水平來(lái)進(jìn)而抑制肝星狀細(xì)胞活化達(dá)到抑制CCl4所誘導(dǎo)的肝纖維化進(jìn)展的目的,提示其在預(yù)防肝纖維化性治療纖維化方面具有巨大的前景。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R575.2;R-332
【圖文】：

碩士學(xué)位論文 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果纖維化計(jì)分按照王泰齡等改進(jìn)的Chevallier法[23](表3-4及圖3-21) 表3-4肝纖維化程度計(jì)分標(biāo)準(zhǔn) 計(jì)分 中央靜脈周 匯管區(qū) 纖維間隔 賣(mài)周（L) ^ 數(shù)量（N) 寬度（W) 0 無(wú) 無(wú) 無(wú)-1 局限、少數(shù) 擴(kuò)大無(wú)隔 <6/cm 細(xì)2 彌漫、多數(shù) 擴(kuò)大有隔 >6cm 疏松、寬3 - 肝硬化 肝硬化 致密、寬_4 - - - S2/3 活檢面積計(jì)分：L+P+2(N*W)14

性細(xì)胞浸潤(rùn)及壞死有所改善，藍(lán)色的膠原纖維主要分布于血管周?chē)诩?xì)胞間質(zhì)中也可見(jiàn)少量的藍(lán)色條紋，纖維間隔形成較少且細(xì)，見(jiàn)圖3-22至圖3-24。W_圖3-22正常對(duì)照組（250 X) 圖3-23模型組（250 X)W圖 3-24 3-MA 干預(yù)組（250 X)3.6.2膠原纖維平均光密度及總面積分析表如下應(yīng)用圖片分析軟件Image Pro Plus 6計(jì)算平均光密度值和纖維總面積 表3-5各組膠原纖維半定量分析（？土S) 組別 平均光密度 纖維總面積（uitf)正常對(duì)照組 0.2534±0.0593 45557.0±10825.3模型組 0.4761*0.0427* 204021.2士55153.1*3-MA 組 0.3458±0.02935*# 112301.9±33730.8*#注：*與正常對(duì)照組比較，P<0. 05;#與模型組比較，p〈0. 05Masson染色從膠原纖維定性及半定量的兩方面來(lái)分析肝纖維化的形成，masson對(duì)早期肝纖維化診斷具有特殊意義，能更?

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 馬桂芳;丁風(fēng)云;李惠芬;;肝纖維化動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年17期

2 王娟;時(shí)迎娣;楊懷義;;乙肝病毒感染對(duì)細(xì)胞基本自噬的影響[J];微生物學(xué)報(bào);2010年12期

3 劉立新;石永強(qiáng);;藥物所致肝纖維化動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥物與臨床;2009年09期

4 馮業(yè)霜;馬紅;賈繼東;;過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ與肝星狀細(xì)胞在肝纖維化中的關(guān)系[J];中華肝臟病雜志;2006年10期

5 李旭,孟瑩,蔡紹曦,楊希山,張藝軍,吳平生;血管緊張素Ⅱ和醛固酮對(duì)肝星狀細(xì)胞細(xì)胞外通路調(diào)控的體外研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2005年26期

6 鄭敏,陳峰,蔡衛(wèi)民,劉榮華;日本血吸蟲(chóng)病肝纖維化小鼠肝星狀細(xì)胞差異表達(dá)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建和篩選[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2005年04期

7 Hye Kyung Kim;Taik-Hoon Yang;Hong-Yon Cho;;Antifi brotic effects of green tea on in vitro and in vivo models of liver fibrosis[J];World Journal of Gastroenterology;2009年41期

8 毛一雷;陳蓉蓉;楊華瑜;張景春;張熠丹;馬健會(huì);桑新亭;盧欣;鐘守先;黃潔夫;;自噬現(xiàn)象在肝纖維化和肝切除時(shí)的表現(xiàn)形式[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2008年04期

9 季光;王磊;柳濤;鄭培永;邢練軍;;酒精性肝纖維化大鼠肝星狀細(xì)胞及肝細(xì)胞凋亡和清肝活血方調(diào)控機(jī)制研究[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志;2007年05期

10 張幸;李風(fēng)華;劉平;劉佳;王爽;;人工蟲(chóng)草菌絲及其組分對(duì)肝纖維化大鼠膽汁酸代謝的影響及其機(jī)制研究[J];中國(guó)中藥雜志;2013年22期

本文編號(hào)：2731583