本文關(guān)鍵詞：硫氧還蛋白1調(diào)節(jié)甲基苯丙胺誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和MHC II表達(dá)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：艾滋病(即獲得性免疫缺陷綜合癥,acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)是由艾滋病病毒(human immunodeficiency virus, HIV)引起的全身免疫系統(tǒng)嚴(yán)重?fù)p害的傳染性疾病。由于艾滋病感染人群具有一定的特殊性、隱匿性,健康防護(hù)意識(shí)淡薄,以及民眾對(duì)艾滋病的社會(huì)歧視和回避進(jìn)一步加大了防控難度,導(dǎo)致艾滋病感染人數(shù)持續(xù)上升。艾滋病的主要傳播途徑為性傳播以及靜脈注射吸毒感染,因此,在吸毒群體中,被檢測(cè)出HIV抗體陽(yáng)性率一直居高不下。 甲基苯丙胺(methamphetamine, MA)屬于苯丙胺類興奮劑,又稱去氧麻黃素,俗稱“冰毒”。它具有藥物依賴性(主要是精神依賴性)、中樞神經(jīng)興奮、致幻、食欲抑制和擬交感效應(yīng)等藥理、毒理學(xué)特性,是聯(lián)合國(guó)精神藥品公約管制的精神活性物質(zhì)。近年來(lái)以MA為代表的苯丙胺類興奮劑在國(guó)際上迅速泛濫,已成為感染和傳播HIV病毒的高危因素。 細(xì)胞自噬(autophagy)是依賴溶酶體途徑對(duì)胞質(zhì)蛋白和細(xì)胞器進(jìn)行降解的過(guò)程,在進(jìn)化上具有高度的保守性,廣泛存在于酵母、線蟲(chóng)、果蠅和高級(jí)脊椎動(dòng)物的細(xì)胞中。自噬在生物體生長(zhǎng)發(fā)育、細(xì)胞分化及對(duì)環(huán)境應(yīng)激的應(yīng)答方面起重要作用。在胞內(nèi)感染細(xì)菌和病毒感染宿主細(xì)胞的過(guò)程中,自噬一方面能夠促進(jìn)感染細(xì)胞對(duì)病原體的清除；另一方面,胞內(nèi)感染病原體通過(guò)某些機(jī)制逃避細(xì)胞的自噬作用,與感染病菌和病毒的致病機(jī)制有關(guān)。自噬發(fā)生過(guò)程中,LC3(microtubule-associated protein1light chain3,自噬蛋白Atg8在哺乳動(dòng)物中的同源物)不斷被募集到自噬前體上,對(duì)自噬前體的延伸起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。同時(shí),P62蛋白(sequestosome-1)對(duì)降解底物的識(shí)別和包裹也起重要的作用。 主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex, MHC)是由一群緊密連鎖的基因群組成,定位于動(dòng)物或人染色體的特定區(qū)域,呈高度多態(tài)性。其編碼的分子表達(dá)于不同的細(xì)胞表面,參與抗原遞呈,調(diào)節(jié)細(xì)胞間相互識(shí)別及誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。MHC分為三大類,MHCⅡ位于抗原提呈細(xì)胞(antigen presenting cell, APC)上,能夠?qū)⒓?xì)胞外來(lái)抗原利用MHCⅡ提呈給輔助T細(xì)胞,啟動(dòng)免疫反應(yīng)。 硫氧還蛋白(thioredoxin, Trx)是一類廣泛表達(dá)于各種生物組織細(xì)胞的小分子蛋白質(zhì),在調(diào)節(jié)機(jī)體的氧化還原反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。同時(shí),還具有轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、抗凋亡、免疫調(diào)節(jié)等生物學(xué)功能,且與腫瘤等多種人類疾病密切相關(guān),具有重要的研究?jī)r(jià)值。硫氧還蛋白有許多家族,其中硫氧還蛋白1(thioredoxin-1, Trx-1)研究較多。 本論文用甲基苯丙胺(Methamphetamine, METH)刺激人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株(Acute T cell leukemia cell line, Jurkat)構(gòu)建吸毒應(yīng)激細(xì)胞模型,研究硫氧還蛋白與細(xì)胞自噬相互作用的分子機(jī)理,探究MHCⅡ在吸毒后免疫應(yīng)答中表達(dá)機(jī)理,進(jìn)一步明確甲基苯丙胺所致免疫損害的分子機(jī)理,為恢復(fù)或提高吸毒人員免疫力提供新的理論基礎(chǔ),也為艾滋病的預(yù)防提供新的思路。 主要的研究結(jié)果如下：甲基苯丙胺(Methamphetamine, METH)劑量依賴性的降低了Jurkat細(xì)胞的活力。同時(shí),METH短時(shí)程、長(zhǎng)時(shí)程刺激Jurkat細(xì)胞后,檢測(cè)Trx-1、LC3Ⅱ、P62的變化。實(shí)驗(yàn)表明,METH不僅能夠時(shí)間依賴性的降低Trx-1的表達(dá),而且LC3II同時(shí)也呈現(xiàn)時(shí)間依賴性的遞增、P62則呈現(xiàn)相反性的遞減。這就表明METH的確誘導(dǎo)了Jurkat細(xì)胞的自噬發(fā)生,而且自噬與Trx-1的表達(dá)具有關(guān)聯(lián)性。在對(duì)照組和高表達(dá)的hTrx-1轉(zhuǎn)基因小鼠中,用METH刺激小鼠后,進(jìn)一步檢測(cè)Trx-1、LC3Ⅱ、MHCⅡ的變化。研究表明,Trx-1、LC3Ⅱ的變化情況與細(xì)胞水平一致,驗(yàn)證了細(xì)胞自噬在METH作用小鼠后發(fā)生。轉(zhuǎn)基因組小鼠Trx-1表達(dá)無(wú)下降,而轉(zhuǎn)基因組的LC3Ⅱ、MHCⅡ表達(dá)與非轉(zhuǎn)基因組相比,顯著恢復(fù)。這就表明hTrx-1能夠增強(qiáng)LC3Ⅱ和MHCⅡ的表達(dá),因此,MHCⅡ的高表達(dá)可能增強(qiáng)吸毒人員免疫力的作用。 總結(jié)：Trx-1在METH所致的自噬和MHCII的表達(dá)中起重要作用,硫氧還蛋白將可能成為治療METH所致免疫損傷的重要靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞自噬 甲基苯丙胺 主要組織相容性復(fù)合體 硫氧還蛋白1
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-17
• 第一章 緒論17-31
• 1.1 艾滋病17-19
• 1.1.1 艾滋病簡(jiǎn)介17
• 1.1.2 艾滋病傳播途徑17-18
• 1.1.3 免疫細(xì)胞在HIV感染初期的表現(xiàn)18-19
• 1.1.4 我國(guó)艾滋病現(xiàn)狀19
• 1.2 細(xì)胞自噬19-24
• 1.2.1 細(xì)胞自噬的分類20
• 1.2.2 自噬發(fā)生的過(guò)程及調(diào)控20-23
• 1.2.3 自噬與免疫23-24
• 1.3 硫氧還蛋白24-28
• 1.3.1 硫氧還蛋白簡(jiǎn)介24
• 1.3.2 硫氧還蛋白結(jié)構(gòu)和分類24-25
• 1.3.3 硫氧還蛋白的生物學(xué)功能25-28
• 1.4 細(xì)胞自噬與抗原提呈28-30
• 1.5 本論文研究的意義30-31
• 第二章 甲基苯丙胺能夠誘導(dǎo)細(xì)胞自噬31-54
• 2.1 引言31
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方案31-32
• 2.3 實(shí)驗(yàn)材料和方法32-45
• 2.3.1 Jurkat細(xì)胞32-33
• 2.3.2 實(shí)驗(yàn)藥物33
• 2.3.3 實(shí)驗(yàn)試劑33-35
• 2.3.4 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備35-37
• 2.3.5 試劑配方37-39
• 2.3.6 實(shí)驗(yàn)方法39-44
• 2.3.7 MTT 實(shí)驗(yàn)44-45
• 2.4 結(jié)果與分析45-53
• 2.4.1 METH影響Jurkat細(xì)胞的存活45-46
• 2.4.2 METH誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞自噬46-51
• 2.4.3 自噬抑制劑CQ能夠降低METH引發(fā)的Jurkat細(xì)胞自噬51-53
• 2.5 討論53-54
• 第三章 METH對(duì)C57BL/6小鼠脾臟和骨髓的影響54-65
• 3.1 引言54-55
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方案55-56
• 3.3 實(shí)驗(yàn)材料和方法56-58
• 3.3.1 實(shí)驗(yàn)的主要試劑和來(lái)源56
• 3.3.2 實(shí)驗(yàn)小鼠56
• 3.3.3 實(shí)驗(yàn)方法56-58
• 3.3.3.1 組織RNA的提取56-57
• 3.3.3.2 Trx-1和β-actin的基因引物及探針序列57
• 3.3.3.3 骨髓細(xì)胞的抽提57-58
• 3.3.3.4 組織蛋白的提取58
• 3.4 結(jié)果與分析58-64
• 3.4.1 甲基苯丙胺對(duì)C57BL/6小鼠脾臟和骨髓內(nèi)Trx-1 mRNA水平和蛋白水平表達(dá)的影響58-60
• 3.4.2 甲基苯丙胺能夠誘發(fā)C57BL/6小鼠脾臟和骨髓細(xì)胞自噬60-62
• 3.4.3 甲基苯丙胺對(duì)C57BL/6小鼠脾臟和骨髓細(xì)胞中MHCII表達(dá)的影響62-64
• 3.5 討論64-65
• 第四章 甲基苯丙胺對(duì)高表達(dá)hTrx-1轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟和骨髓的影響65-74
• 4.1 實(shí)驗(yàn)方案65-66
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料和方法66-67
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)的主要試劑和來(lái)源66
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)小鼠66
• 4.2.3 實(shí)驗(yàn)方法66-67
• 4.2.3.1 骨髓細(xì)胞的抽提66-67
• 4.2.3.2 組織蛋白的提取67
• 4.3 結(jié)果與分析67-72
• 4.3.1 甲基苯丙胺對(duì)高表達(dá)hTrx-1轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟和骨髓內(nèi)鼠源Trx-1蛋白水平表達(dá)的影響68-69
• 4.3.2 甲基苯丙胺對(duì)高表達(dá)hTrx-1轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟和骨髓內(nèi)LC3蛋白水平表達(dá)的影響69-71
• 4.3.3 甲基苯丙胺對(duì)高表達(dá)hTrx-1轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟和骨髓內(nèi)MHCII蛋白水平表達(dá)的影響71-72
• 4.4 討論72-74
• 第五章 總結(jié)和展望74-76
• 致謝76-77
• 參考文獻(xiàn)77-83
• 附錄A83
• 附錄B83-85
• 綜述85-89
• 參考文獻(xiàn)87-89

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 亓佳;楊靜玉;王芳;吳春福;;甲基苯丙胺神經(jīng)毒性,成癮機(jī)制及其濫用防治研究進(jìn)展[J];沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年S1期

  本文關(guān)鍵詞：硫氧還蛋白1調(diào)節(jié)甲基苯丙胺誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和MHC II表達(dá)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：273138