本文關(guān)鍵詞：Notch信號(hào)通路在富集卵巢生殖干細(xì)胞的卵巢上皮組織和卵巢生殖干細(xì)胞的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過探索Notch信號(hào)通路相關(guān)分子在新生、成年和衰老等不同年齡段小鼠卵巢組織及卵巢生殖干細(xì)胞中的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化,闡明Notch信號(hào)通路在調(diào)控卵巢生殖干細(xì)胞增殖、分化和衰老中的作用，為解決卵巢功能早衰及相關(guān)疾病的防治問題提供理論依據(jù)。 方法：1.用免疫組織化學(xué)、Real-time PCR方法檢測(cè)生殖細(xì)胞標(biāo)志物MVH和Notch信號(hào)通路分子Notch1，Jagged1，Hes1，Hes5在3日齡，2月齡，20月齡小鼠卵巢上皮中的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化。 2.用免疫熒光雙標(biāo)組織化學(xué)法檢測(cè)生殖細(xì)胞標(biāo)志物MVH和Notch信號(hào)分子Notch1，Jagged1，Hes1在3日齡，2月齡，20月齡小鼠卵巢上皮中的共表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化。 3.以STO細(xì)胞做飼養(yǎng)層，用兩步酶消化法取3日齡小鼠卵巢分離獲得單個(gè)卵巢生殖干細(xì)胞使用添加了LIF、EGF、bFGF等不同細(xì)胞生長(zhǎng)因子的干細(xì)胞培養(yǎng)液在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)。 4.用免疫熒光細(xì)胞雙標(biāo)記法檢測(cè)3日齡小鼠卵巢生殖細(xì)胞標(biāo)志物MVH和Notch信號(hào)分子Notch1的共表達(dá)。 結(jié)果：1.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：MVH，Notch1，Jagged1和Hes1蛋白在卵巢上皮組織中有表達(dá)，其表達(dá)水平于3日齡最高，2月齡次之，20月齡表達(dá)水平最弱。 2.Real-time PCR結(jié)果顯示：MVH，Oct-4，Notch1，Hes1和Hes5mRNA在卵巢組織中有表達(dá)，其表達(dá)水平于3日齡最高，2月齡次之，20月齡表達(dá)水平最弱甚至幾乎沒有。 3.免疫熒光雙標(biāo)組織化學(xué)法顯示：小鼠卵巢生殖細(xì)胞標(biāo)志物MVH和Notch信號(hào)分子Notch1,Jagged1和Hes1在卵巢上皮有共表達(dá)，MVH/Notch1，MVH/Jagged1，MVH/Hes1共表達(dá)強(qiáng)度在3日齡卵巢上皮呈強(qiáng)陽(yáng)性熒光表達(dá)，2月齡卵巢上皮呈陽(yáng)性表達(dá)且弱于3日齡，20月齡卵巢上皮幾乎沒有表達(dá)。 4.用兩步酶消化法分離卵巢組織得到的細(xì)胞，經(jīng)RT-PCR反應(yīng)檢測(cè)到生殖細(xì)胞標(biāo)志物MVH，早期生殖細(xì)胞標(biāo)志物Fragilis，，多能干細(xì)胞標(biāo)志物Oct-4的陽(yáng)性表達(dá)，而卵母細(xì)胞標(biāo)志物Zp3未見明顯表達(dá)。推測(cè)分離出的細(xì)胞為未分化的生殖干細(xì)胞。 5.免疫熒光細(xì)胞雙標(biāo)記法顯示：生殖細(xì)胞標(biāo)志物MVH和Notch通路受體Notch1共表達(dá)于卵巢生殖干細(xì)胞。 結(jié)論：富集卵巢生殖干細(xì)胞的卵巢上皮組織中存在Notch信號(hào)通路相關(guān)分子Notch1,Jagged1,Hes1,Hes5mRNA和蛋白表達(dá)，并且其表達(dá)水平均隨著小鼠生殖年齡的增加而減弱；卵巢上皮組織中存在MVH/Notch1，MVH/Jagged1，MVH/Hes1的共表達(dá)，共表達(dá)水平亦隨著小鼠生殖年齡的增加而減弱；卵巢生殖干細(xì)胞中亦存在MVH/Notch1的共表達(dá)。表明，Notch信號(hào)通路可能與卵巢生殖干細(xì)胞的增殖、分化和衰老有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：卵巢生殖干細(xì)胞 Notch信號(hào)分子 表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R339.22
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 中英文縮略詞表11-12
• 第1章 引言12-15
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法15-24
• 2.1 材料15-17
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 2.1.2 主要試劑15-16
• 2.1.3 主要儀器16
• 2.1.4 主要的試劑配制16-17
• 2.2 方法17-24
• 2.2.1 免疫組織化學(xué)法體內(nèi)定位小鼠卵巢生殖細(xì)胞標(biāo)志物 MVH 和 Notch信號(hào)分子表達(dá)17-18
• 2.2.2 Real-time PCR 檢測(cè)小鼠卵巢生殖細(xì)胞標(biāo)志物和 Notch 信號(hào)分子表達(dá)18-20
• 2.2.3 免疫熒光雙標(biāo)記組織化學(xué)法20-21
• 2.2.4 小鼠卵巢生殖干細(xì)胞的飼養(yǎng)層制備21-22
• 2.2.5 小鼠卵巢生殖干細(xì)胞的體外分離22-23
• 2.2.6 細(xì)胞雙標(biāo)記免疫熒光法23
• 2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23-24
• 第3章 結(jié)果24-38
• 3.1 免疫組化方法檢測(cè)生殖細(xì)胞標(biāo)志物和 Notch 信號(hào)分子在小鼠卵巢上皮組織中的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化24-26
• 3.1.1 免疫組化方法檢測(cè)生殖細(xì)胞標(biāo)志物 MVH 在小鼠卵巢上皮組織中的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化24-25
• 3.1.2 免疫組化方法檢測(cè) Notch 信號(hào)分子在小鼠卵巢上皮組織中的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化25-26
• 3.2 Real-time PCR 檢測(cè)生殖細(xì)胞標(biāo)志物在小鼠卵巢組織中的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化26-27
• 3.2.1 Real-time PCR 檢測(cè) MVH，Oct-4 在小鼠卵巢組織中的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化26-27
• 3.3 Real-timePCR 檢測(cè) Notch 信號(hào)分子在小鼠卵巢組織中的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化27-30
• 3.3.1 Real-time PCR 檢測(cè) Notch1 在小鼠卵巢組織中的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化27-28
• 3.3.2 Real-time PCR 檢測(cè) Hes1 在小鼠卵巢組織中的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化28-29
• 3.3.3 Real-time PCR 檢測(cè) Hes1 在小鼠卵巢組織中的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化29-30
• 3.4 免疫熒光雙標(biāo)記檢測(cè)卵巢生殖細(xì)胞標(biāo)志物 MVH 和 Notch 信號(hào)分子在小鼠卵巢上皮組織共表達(dá)30-35
• 3.4.1 免疫熒光雙標(biāo)記檢測(cè)卵巢生殖細(xì)胞標(biāo)志物 MVH 和 Notch1 在小鼠卵巢上皮組織共表達(dá)30-32
• 3.4.2 免疫熒光雙標(biāo)記檢測(cè)卵巢生殖細(xì)胞標(biāo)志物 MVH 和 Jagged1 在小鼠卵巢上皮組織共表達(dá)32-33
• 3.4.3 免疫熒光雙標(biāo)記檢測(cè)卵巢生殖細(xì)胞標(biāo)志物 MVH 和 Hes1 在小鼠卵巢上皮組織共表達(dá)33-35
• 3.5 卵巢生殖干細(xì)胞的體外培養(yǎng)與鑒定35-37
• 3.5.1 卵巢生殖干細(xì)胞的體外培養(yǎng)35-36
• 3.5.2 卵巢生殖干細(xì)胞標(biāo)志基因的檢測(cè)36-37
• 3.6 細(xì)胞雙標(biāo)記免疫熒光檢測(cè)卵巢生殖干細(xì)胞和 Notch 信號(hào)分子的共表達(dá)37-38
• 第4章 討論38-42
• 4.1 小鼠卵巢組織上皮生殖細(xì)胞和 Notch 信號(hào)分子的表達(dá)及變化38-39
• 4.2 原代卵巢生殖干細(xì)胞的分離培養(yǎng)39-40
• 4.3 原代卵巢生殖干細(xì)胞的鑒定40
• 4.4 雙標(biāo)記免疫熒光檢測(cè)卵巢生殖細(xì)胞標(biāo)志物和 Notch 信號(hào)分子的共表達(dá)的生殖細(xì)胞40-42
• 第5章 結(jié)論與展望42-43
• 5.1 結(jié)論42
• 5.2 展望42-43
• 致謝43-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果47-48
• 綜述48-55
• 參考文獻(xiàn)54-55

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 白楊;葉哲偉;曾甫清;;大鼠睪丸中c-kit的表達(dá)特點(diǎn)與精原干細(xì)胞的分化[J];中華男科學(xué)雜志;2007年01期

2 金波;劉洋;岳占碰;李子義;張學(xué)明;;精原干細(xì)胞自我更新和分化的調(diào)控[J];生命科學(xué);2011年03期

3 李霞云;侯玲玲;王開功;關(guān)偉軍;馬月輝;;精原干細(xì)胞研究進(jìn)展[J];畜牧與獸醫(yī);2011年06期

  本文關(guān)鍵詞：Notch信號(hào)通路在富集卵巢生殖干細(xì)胞的卵巢上皮組織和卵巢生殖干細(xì)胞的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：273190