本文關(guān)鍵詞：Notch信號通路在富集卵巢生殖干細胞的卵巢上皮組織和卵巢生殖干細胞的表達及動態(tài)變化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過探索Notch信號通路相關(guān)分子在新生、成年和衰老等不同年齡段小鼠卵巢組織及卵巢生殖干細胞中的表達及動態(tài)變化,闡明Notch信號通路在調(diào)控卵巢生殖干細胞增殖、分化和衰老中的作用，為解決卵巢功能早衰及相關(guān)疾病的防治問題提供理論依據(jù)。 方法：1.用免疫組織化學(xué)、Real-time PCR方法檢測生殖細胞標志物MVH和Notch信號通路分子Notch1，Jagged1，Hes1，Hes5在3日齡，2月齡，20月齡小鼠卵巢上皮中的表達及動態(tài)變化。 2.用免疫熒光雙標組織化學(xué)法檢測生殖細胞標志物MVH和Notch信號分子Notch1，Jagged1，Hes1在3日齡，2月齡，20月齡小鼠卵巢上皮中的共表達及動態(tài)變化。 3.以STO細胞做飼養(yǎng)層，用兩步酶消化法取3日齡小鼠卵巢分離獲得單個卵巢生殖干細胞使用添加了LIF、EGF、bFGF等不同細胞生長因子的干細胞培養(yǎng)液在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)。 4.用免疫熒光細胞雙標記法檢測3日齡小鼠卵巢生殖細胞標志物MVH和Notch信號分子Notch1的共表達。 結(jié)果：1.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：MVH，Notch1，Jagged1和Hes1蛋白在卵巢上皮組織中有表達，其表達水平于3日齡最高，2月齡次之，20月齡表達水平最弱。 2.Real-time PCR結(jié)果顯示：MVH，Oct-4，Notch1，Hes1和Hes5mRNA在卵巢組織中有表達，其表達水平于3日齡最高，2月齡次之，20月齡表達水平最弱甚至幾乎沒有。 3.免疫熒光雙標組織化學(xué)法顯示：小鼠卵巢生殖細胞標志物MVH和Notch信號分子Notch1,Jagged1和Hes1在卵巢上皮有共表達，MVH/Notch1，MVH/Jagged1，MVH/Hes1共表達強度在3日齡卵巢上皮呈強陽性熒光表達，2月齡卵巢上皮呈陽性表達且弱于3日齡，20月齡卵巢上皮幾乎沒有表達。 4.用兩步酶消化法分離卵巢組織得到的細胞，經(jīng)RT-PCR反應(yīng)檢測到生殖細胞標志物MVH，早期生殖細胞標志物Fragilis，，多能干細胞標志物Oct-4的陽性表達，而卵母細胞標志物Zp3未見明顯表達。推測分離出的細胞為未分化的生殖干細胞。 5.免疫熒光細胞雙標記法顯示：生殖細胞標志物MVH和Notch通路受體Notch1共表達于卵巢生殖干細胞。 結(jié)論：富集卵巢生殖干細胞的卵巢上皮組織中存在Notch信號通路相關(guān)分子Notch1,Jagged1,Hes1,Hes5mRNA和蛋白表達，并且其表達水平均隨著小鼠生殖年齡的增加而減弱；卵巢上皮組織中存在MVH/Notch1，MVH/Jagged1，MVH/Hes1的共表達，共表達水平亦隨著小鼠生殖年齡的增加而減弱；卵巢生殖干細胞中亦存在MVH/Notch1的共表達。表明，Notch信號通路可能與卵巢生殖干細胞的增殖、分化和衰老有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：卵巢生殖干細胞 Notch信號分子 表達及動態(tài)變化
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R339.22
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 中英文縮略詞表11-12
• 第1章 引言12-15
• 第2章 實驗材料與方法15-24
• 2.1 材料15-17
• 2.1.1 實驗動物15
• 2.1.2 主要試劑15-16
• 2.1.3 主要儀器16
• 2.1.4 主要的試劑配制16-17
• 2.2 方法17-24
• 2.2.1 免疫組織化學(xué)法體內(nèi)定位小鼠卵巢生殖細胞標志物 MVH 和 Notch信號分子表達17-18
• 2.2.2 Real-time PCR 檢測小鼠卵巢生殖細胞標志物和 Notch 信號分子表達18-20
• 2.2.3 免疫熒光雙標記組織化學(xué)法20-21
• 2.2.4 小鼠卵巢生殖干細胞的飼養(yǎng)層制備21-22
• 2.2.5 小鼠卵巢生殖干細胞的體外分離22-23
• 2.2.6 細胞雙標記免疫熒光法23
• 2.2.7 統(tǒng)計學(xué)分析23-24
• 第3章 結(jié)果24-38
• 3.1 免疫組化方法檢測生殖細胞標志物和 Notch 信號分子在小鼠卵巢上皮組織中的表達及動態(tài)變化24-26
• 3.1.1 免疫組化方法檢測生殖細胞標志物 MVH 在小鼠卵巢上皮組織中的表達及動態(tài)變化24-25
• 3.1.2 免疫組化方法檢測 Notch 信號分子在小鼠卵巢上皮組織中的表達及動態(tài)變化25-26
• 3.2 Real-time PCR 檢測生殖細胞標志物在小鼠卵巢組織中的表達及動態(tài)變化26-27
• 3.2.1 Real-time PCR 檢測 MVH，Oct-4 在小鼠卵巢組織中的表達及動態(tài)變化26-27
• 3.3 Real-timePCR 檢測 Notch 信號分子在小鼠卵巢組織中的表達及動態(tài)變化27-30
• 3.3.1 Real-time PCR 檢測 Notch1 在小鼠卵巢組織中的表達及動態(tài)變化27-28
• 3.3.2 Real-time PCR 檢測 Hes1 在小鼠卵巢組織中的表達及動態(tài)變化28-29
• 3.3.3 Real-time PCR 檢測 Hes1 在小鼠卵巢組織中的表達及動態(tài)變化29-30
• 3.4 免疫熒光雙標記檢測卵巢生殖細胞標志物 MVH 和 Notch 信號分子在小鼠卵巢上皮組織共表達30-35
• 3.4.1 免疫熒光雙標記檢測卵巢生殖細胞標志物 MVH 和 Notch1 在小鼠卵巢上皮組織共表達30-32
• 3.4.2 免疫熒光雙標記檢測卵巢生殖細胞標志物 MVH 和 Jagged1 在小鼠卵巢上皮組織共表達32-33
• 3.4.3 免疫熒光雙標記檢測卵巢生殖細胞標志物 MVH 和 Hes1 在小鼠卵巢上皮組織共表達33-35
• 3.5 卵巢生殖干細胞的體外培養(yǎng)與鑒定35-37
• 3.5.1 卵巢生殖干細胞的體外培養(yǎng)35-36
• 3.5.2 卵巢生殖干細胞標志基因的檢測36-37
• 3.6 細胞雙標記免疫熒光檢測卵巢生殖干細胞和 Notch 信號分子的共表達37-38
• 第4章 討論38-42
• 4.1 小鼠卵巢組織上皮生殖細胞和 Notch 信號分子的表達及變化38-39
• 4.2 原代卵巢生殖干細胞的分離培養(yǎng)39-40
• 4.3 原代卵巢生殖干細胞的鑒定40
• 4.4 雙標記免疫熒光檢測卵巢生殖細胞標志物和 Notch 信號分子的共表達的生殖細胞40-42
• 第5章 結(jié)論與展望42-43
• 5.1 結(jié)論42
• 5.2 展望42-43
• 致謝43-44
• 參考文獻44-47
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果47-48
• 綜述48-55
• 參考文獻54-55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 白楊;葉哲偉;曾甫清;;大鼠睪丸中c-kit的表達特點與精原干細胞的分化[J];中華男科學(xué)雜志;2007年01期

2 金波;劉洋;岳占碰;李子義;張學(xué)明;;精原干細胞自我更新和分化的調(diào)控[J];生命科學(xué);2011年03期

3 李霞云;侯玲玲;王開功;關(guān)偉軍;馬月輝;;精原干細胞研究進展[J];畜牧與獸醫(yī);2011年06期

  本文關(guān)鍵詞：Notch信號通路在富集卵巢生殖干細胞的卵巢上皮組織和卵巢生殖干細胞的表達及動態(tài)變化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：273190