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人B淋巴細胞活化相關基因的克隆及其功能初探

發(fā)布時間:2020-06-22 17:43
【摘要】:B淋巴細胞是機體重要的免疫活性細胞,在機體免疫應答中,B細胞接受抗原或其它因素的刺激后,發(fā)生活化、增殖及分化,產生應答效應。因此,B細胞的活化是B細胞行使其功能的重要前提。眾多研究表明,B細胞由靜止向活化狀態(tài)轉變的過程,伴隨著一系列基因表達的變化,其中某些基因的表達水平上升,有些基因的表達卻下降,正是這些差異表達基因的產物之間的相互作用,導致靜止的B細胞進入活化狀態(tài)。然而,迄今為止我們對此過程中的的基因調控機制還所知甚少。分離與B細胞活化相關的基因,闡明基因在B細胞活化過程中的功能,有助于對B細胞發(fā)育、成熟和分化等生理過程的了解以及對與B細胞源性的免疫系統(tǒng)失常所引起疾病(如B淋巴細胞源性的白血病、自身免疫疾病和B淋巴細胞瘤等)的發(fā)病機制的分析奠定了基礎。因此,B細胞活化相關基因的研究一直是分子免疫學的研究熱點之一。 為了克隆B細胞活化相關的基因,我們在前期工作應用差異顯示反轉錄PCR(DDRT-PCR)方法,比較人扁桃體靜止B細胞和活化B細胞中的基因表達差異,獲得了62條差異顯示帶(expressed sequence tag,EST)的基礎上,本研究采用了以下研究策略和路線,以尋找與這些EST所對應的基因。首先,采用Northern雜交的方法來去除所獲得的假陽性EST;其次,一方面,運用活化B細胞中高表達的EST篩選人活化B細胞的cDNA文庫以期獲得與之相對應的全長基因。另一方面,利用生物信息學知識,綜合EST拼接、cDNA末端快速擴增(RACE)和RT-PCR等實驗技術,克隆與
【學位授予單位】:中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】:博士
【學位授予年份】:2001
【分類號】:R392;Q78
【圖文】:

B細胞,程度


A.negtiveeont:·01B.FIM:389C.FIM:907圖ZB細胞活化程度的檢測FigureDeteetiontheaetivationofBeellbyFACSA:negativeeontro1B:0hrC:48hreseen。eintensitymean(FIM)refertotheexpressionint。nsityofHLAllmomantonsilBeells

甲醛,瓊脂糖凝膠電泳,差異顯示,Northern雜交


總RNA中沒有明顯的蛋白質及鹽離子的污染。經1%甲醛瓊脂糖凝膠電泳顯示,所提取總RNA28S和185兩條帶型清晰,表明所提取的組織總RNA完整性較好,無明顯降解(圖4)l2洲5州乙000八

本文編號:2726021

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