【摘要】：B淋巴細(xì)胞是機(jī)體重要的免疫活性細(xì)胞，在機(jī)體免疫應(yīng)答中，B細(xì)胞接受抗原或其它因素的刺激后，發(fā)生活化、增殖及分化，產(chǎn)生應(yīng)答效應(yīng)。因此，B細(xì)胞的活化是B細(xì)胞行使其功能的重要前提。眾多研究表明，B細(xì)胞由靜止向活化狀態(tài)轉(zhuǎn)變的過(guò)程，伴隨著一系列基因表達(dá)的變化，其中某些基因的表達(dá)水平上升，有些基因的表達(dá)卻下降，正是這些差異表達(dá)基因的產(chǎn)物之間的相互作用，導(dǎo)致靜止的B細(xì)胞進(jìn)入活化狀態(tài)。然而，迄今為止我們對(duì)此過(guò)程中的的基因調(diào)控機(jī)制還所知甚少。分離與B細(xì)胞活化相關(guān)的基因，闡明基因在B細(xì)胞活化過(guò)程中的功能，有助于對(duì)B細(xì)胞發(fā)育、成熟和分化等生理過(guò)程的了解以及對(duì)與B細(xì)胞源性的免疫系統(tǒng)失常所引起疾病(如B淋巴細(xì)胞源性的白血病、自身免疫疾病和B淋巴細(xì)胞瘤等)的發(fā)病機(jī)制的分析奠定了基礎(chǔ)。因此，B細(xì)胞活化相關(guān)基因的研究一直是分子免疫學(xué)的研究熱點(diǎn)之一。 為了克隆B細(xì)胞活化相關(guān)的基因，我們?cè)谇捌诠ぷ鲬?yīng)用差異顯示反轉(zhuǎn)錄PCR(DDRT-PCR)方法，比較人扁桃體靜止B細(xì)胞和活化B細(xì)胞中的基因表達(dá)差異，獲得了62條差異顯示帶(expressed sequence tag，EST)的基礎(chǔ)上，本研究采用了以下研究策略和路線，以尋找與這些EST所對(duì)應(yīng)的基因。首先，采用Northern雜交的方法來(lái)去除所獲得的假陽(yáng)性EST；其次，一方面，運(yùn)用活化B細(xì)胞中高表達(dá)的EST篩選人活化B細(xì)胞的cDNA文庫(kù)以期獲得與之相對(duì)應(yīng)的全長(zhǎng)基因。另一方面，利用生物信息學(xué)知識(shí)，綜合EST拼接、cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)和RT-PCR等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，克隆與
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類(lèi)號(hào)】：R392;Q78
【圖文】：

A.negtiveeont:·01B.FIM:389C.FIM:907圖ZB細(xì)胞活化程度的檢測(cè)FigureDeteetiontheaetivationofBeellbyFACSA:negativeeontro1B:0hrC:48hreseen。eintensitymean(FIM)refertotheexpressionint。nsityofHLAllmomantonsilBeells

總RNA中沒(méi)有明顯的蛋白質(zhì)及鹽離子的污染。經(jīng)1%甲醛瓊脂糖凝膠電泳顯示，所提取總RNA28S和185兩條帶型清晰，表明所提取的組織總RNA完整性較好，無(wú)明顯降解(圖4)l2洲5州乙000八

本文編號(hào)：2726021