發(fā)布時(shí)間：2020-06-21 00:56

【摘要】：1.TLR9通路對(duì)樹突狀細(xì)胞表面CD40表達(dá)的調(diào)控機(jī)制研究樹突狀細(xì)胞(dendritic cells, DCs)是目前所知體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞,在啟動(dòng)和協(xié)調(diào)天然免疫和獲得性免疫中發(fā)揮重要作用。微生物來源的刺激物如CpG可以刺激DCs使其表面異常地高表達(dá)CD40,進(jìn)而參與多種疾病的發(fā)生,尤其是自身免疫性疾病和炎癥性疾病。由于CD40和DCs都在這些疾病中的發(fā)揮重要作用,所以研究CpG誘導(dǎo)的DCs表面CD40表達(dá)的機(jī)制尤為重要。本研究中,我們發(fā)現(xiàn)B類CpG可以有效地誘導(dǎo)小鼠骨髓來源DCs上CD40的表達(dá)。基于這一發(fā)現(xiàn),我們繼續(xù)對(duì)這類CpG誘導(dǎo)DCs表面CD40表達(dá)的分子機(jī)制進(jìn)行了研究。通過使用特異性抑制劑,我們證明MAPKs家族中的JNK和p38 MAPK(而不是ERK)和轉(zhuǎn)錄因子NF-κB參與了由CpG誘導(dǎo)的DCs表面CD40的表達(dá)。另外,通過RNA干擾技術(shù),我們發(fā)現(xiàn)IRF8是調(diào)控CD40表達(dá)的重要的轉(zhuǎn)錄因子,它不僅能夠影響誘導(dǎo)型CD40的表達(dá),還能影響組成型CD40的表達(dá)。通過上調(diào)miRNA-146a可以通過靶向作用于TLR9通路的接頭蛋白TRAF6和IRAKI來負(fù)調(diào)控CD40的表達(dá)。綜上,我們的研究闡明了CpG誘導(dǎo)CD40表達(dá)和DCs成熟的分子機(jī)制。2.小分子化合物Chaetoglobosin F通過TLR9信號(hào)通路調(diào)控樹突狀細(xì)胞的免疫功能細(xì)胞松弛素F (Chaetoglobosin F, Cha F)是球毛殼菌IFB-E019固體培養(yǎng)物的乙酸乙酯提取物,是一種新型的小分子化合物。DCs是功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞,所以成為調(diào)控過度免疫反應(yīng)的靶細(xì)胞。DCs中的TLR9對(duì)CpG-DNA的識(shí)別是自身免疫性疾病發(fā)生的重要環(huán)節(jié),然而Cha F對(duì)CpG誘導(dǎo)的DCs的成熟和免疫調(diào)節(jié)功能尚未有人研究。本文研究了小分子化合物ChaF對(duì)小鼠骨髓來源DCs的作用,我們發(fā)現(xiàn)Cha F可以抑制由CpG誘導(dǎo)的DCs的成熟和功能,主要表現(xiàn)在：抑制其表面分子(CD40, CD80, CD86, MHC-II和CCR7)的表達(dá)；降低細(xì)胞因子和趨化因子(IL12和CXCL-10)的產(chǎn)生；抑制DCs活化T細(xì)胞增殖的能力；降低DCs的趨化能力。另外,Cha F可以抑制MAPKs家族中JNK和p38MAPK(而不是ERK)的活化,還可以抑制轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和STAT的活化及核轉(zhuǎn)入。有趣的是,我們證明Cha F還可以抑制CpG誘導(dǎo)的TLR9的表達(dá)。綜上,我們的研究證明Cha F具有新穎的免疫藥理學(xué)功能,尤其是對(duì)CpG活化的DCs, Cha F的這種免疫抑制特性可能會(huì)為DCs相關(guān)的自身免疫性和／或炎癥性疾病提供有用的理論依據(jù)和應(yīng)用價(jià)值。3.一種新型的小分子化合物FC-99調(diào)控TLRs誘導(dǎo)的DCs的活化并能緩解MRL/lpr小鼠的狼瘡樣綜合征TLR3、TLR4和TLR9都組成型地表達(dá)于小鼠的mDCs,這三條TLRs信號(hào)通路的活化參與了自身免疫性疾病,如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)的病理過程。因此,調(diào)控TLRs信號(hào)通路可以成為調(diào)控DCs過度活化的有效手段,進(jìn)而調(diào)控炎癥性自身免疫性疾病。本研究中,我們基于DCs對(duì)一種新型的小分子化合物FC-99的抗炎活性(由TLR3, TLR4和TLR9誘導(dǎo)的)進(jìn)行了研究。我們的研究首次發(fā)現(xiàn)：FC-99可以有效地抑制由TLR3配體poly I:C, TLR4配體LPS和TLR9配體CpG誘導(dǎo)的DCs的成熟。主要表現(xiàn)在：FC-99可以下調(diào)由TLR3, TLR4和TLR9的活化誘導(dǎo)的CD40和MHC-Ⅱ的表達(dá)；抑制炎癥性細(xì)胞因子(如IL-6,IL-12和IFN-p)和炎癥性趨化因子(CXCL-10)的產(chǎn)生；FC-99還可以抑制NF-κB的活化并能上調(diào)Tnfaip3的表達(dá),Tnfaip3是TLR3, TLR4和TLR9通路重要的負(fù)調(diào)控基因。這些結(jié)果表明：FC-99調(diào)控TLR3, TLR4和TLR9誘導(dǎo)的DCs的成熟的機(jī)制包括影響了NF-κB的活化和Tnfaip3的的轉(zhuǎn)錄。MRL/lpr小鼠是一種模擬人的SLE疾病的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,我們用這種小鼠驗(yàn)證FC-99的體內(nèi)治療效果。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明：FC-99的治療可以緩解狼瘡樣小鼠的疾病進(jìn)程,包括細(xì)胞因子的產(chǎn)生、自身抗體水平和大大改善了腎臟功能等。我們證明：和發(fā)病小鼠相比,FC-99治療后可以下調(diào)模型小鼠的腹股溝淋巴結(jié)(ILN)、腸系膜淋巴結(jié)(MLN)和脾臟中mDCs的比例和CD40的表達(dá),說明FC-99的抗炎和免疫抑制功能可能和它調(diào)控DCs的成熟和功能相關(guān)。有趣的是,和發(fā)病小鼠相比,FC-99的處理可以顯著抑制IκB-a的過度活化并提高PBMCs中Tnfaip3的表達(dá),跟我們的體外結(jié)果一致。綜上,FC-99的治療可以緩解MRL/lpr小鼠的狼瘡樣綜合征,因此,FC-99有望成為治療人的SLE的有效藥物。
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392

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