【摘要】：目的 多糖結(jié)合體在粘膜表面起著一系列生物調(diào)節(jié)功能,例如有絲分裂后表皮細(xì)胞的分化和粘膜表層濕態(tài)的維持。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖谴_認(rèn)在正常人和于眼病人中眼表結(jié)膜總的基因表達(dá)差異。 方法 通過(guò)細(xì)胞印記學(xué)方法得到研究對(duì)象的結(jié)膜表層細(xì)胞,分離,擴(kuò)增細(xì)胞的RNA,然后于特異性設(shè)計(jì)的多糖基因芯片雜交。再對(duì)雜交后的密度值用ANOVA軟件分析。所分析后的表達(dá)結(jié)果用實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)行確定。免疫熒光檢測(cè)Notch受體和配體后用共聚焦顯微鏡確認(rèn)。 結(jié)果 通過(guò)基因芯片分析,眼表結(jié)膜有424個(gè)多糖相關(guān)基因。半乳糖凝集素,糖基轉(zhuǎn)移酶,黏液素,Notch型號(hào)通路相關(guān)分子,蛋白聚糖位于最高表達(dá)組。在干眼病人中,46個(gè)多糖基因明顯的有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的表達(dá)下調(diào),其中有5個(gè)分子是屬于Notch信號(hào)通路的,4分子屬于個(gè)Wnt信號(hào)通路的,3個(gè)硫酸肝素轉(zhuǎn)移酶。僅僅有干擾素誘導(dǎo)的跨膜蛋白1上調(diào)。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR,我們發(fā)現(xiàn)Notch信號(hào)通路中Notch1,Notch3,Jaggedl的表達(dá)率在干眼病人中只有正常病人的0.43,0.56和0.50。共聚焦顯微鏡顯示Notch1, Notch3, Jagged1分子在整個(gè)結(jié)膜組織中從表層到基底層都有表達(dá),而Notch2和Delta1只在結(jié)膜表層有表達(dá)。 結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)揭示了在正常人眼和干眼病人表面糖基因的表達(dá)圖譜和差異；Notch信號(hào)通路在干眼病人眼表的表達(dá)下調(diào)也許是干眼的發(fā)病機(jī)理之一。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：2718144