【摘要】： 毛細管電泳是一種強大的分析技術(shù),從分析小分子到生物大分子都具有很高的效率。它具有高分離效率,高分辨率,快速,易自動化等優(yōu)點,毛細管電泳在化學(xué),生物技術(shù),環(huán)境等方面得到了極大的應(yīng)用。 毛細管電泳不僅是一種有效的分離工具而且在酶的研究和藥物開發(fā)方面也是一個有效的平臺。在眾多的毛細管電泳技術(shù)中,電泳媒介微分析技術(shù)(EMMA)在酶抑制劑篩選,酶動力學(xué)研究等方面是一個十分有效的工具。這種篩選通過使用二極管陣列檢測器接合多通道毛細管電泳能實現(xiàn)高通量。毛細管中固定酶制作微反應(yīng)器和微流控芯片在酶研究、蛋白組學(xué)、診斷學(xué)等方面也是一個的十分有希望的微型化的方法。 高血壓是最常見的心血管疾病之一,嚴重威脅著人類的健康。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)能將血管緊張素I轉(zhuǎn)換為有高活性的血管緊張素II,引起血壓升高。在抗高血壓藥物中,血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)是一類常見的有效的藥物,如卡托普利,賴諾普利。但合成ACEI類降壓藥物的使用常伴隨著多種不良反應(yīng)。近年來,大量研究發(fā)現(xiàn)ACEI廣泛存在于天然產(chǎn)物中,天然產(chǎn)物中的ACEI與合成ACEI相比有安全性高、降壓持久、無副作用等優(yōu)點。從中草藥和食品中間篩選沒有副作用的新抗高血壓藥引起了廣大學(xué)者的興趣。為此本學(xué)位論文主要做了以下工作：1、利用毛細管電泳技術(shù),結(jié)合酶微反應(yīng)器從中草藥和食品中間篩選沒有副作用的篩選ACEI。將ACE直接固定在整體基質(zhì)上,制成了酶微反應(yīng)器,結(jié)合毛細管電泳在線分離,篩選ACEI.制備了將酶直接共價固定于整體基質(zhì)的ACE微反應(yīng)器,考查卡托普利,賴諾普利,和各種中草藥提取物的抑制作用,從中草藥中篩選出沒有副作用的新抗高血壓藥。通過篩選發(fā)現(xiàn)山楂,決明子,槐米等水提物有一定的抑制效果,分別得出了其抑制率。 2、毛細管電泳分析肽和蛋白質(zhì)時,由于肽和蛋白質(zhì)的表面的不均一性,肽和蛋白質(zhì)特別是堿性蛋白／肽易于被毛細管壁吸附,使結(jié)果到了一個不能接受的水平。針對這種情況,本文建立了高效毛細管電泳快速分離IgG等蛋白質(zhì)及肽的方法。用化學(xué)共價改性毛細管成功抑制了堿性蛋白及肽在空白毛細管上的吸附,實現(xiàn)了毛細管電泳對蛋白樣品的高效的分離、得到了較高的蛋白回收率、良好的重現(xiàn)性。較非共價包覆毛細管有穩(wěn)定性高,更寬的pH范圍等優(yōu)點。 3、建立簡單、快速測定冬蟲夏草和人工蛹蟲草子實體中蟲草素、腺嘌呤、鳥嘌呤、尿嘧啶、次黃嘌呤、腺苷、鳥苷、尿苷、次黃苷9種核苷及堿基成分的高效毛細管區(qū)帶電泳法,比較天然冬蟲夏草與人工蛹蟲草子實體中核苷類化合物的含量。采用未涂層彈性石英毛細管,以硼砂-硼酸溶液作為緩沖體系,分離電壓20 kv,溫度20℃,檢測波長258 nm,進樣量為3445 Pa,進樣5 s。在優(yōu)化的實驗條件下,冬蟲夏草及人工蛹蟲草子實體中9種核苷類在15 min內(nèi)達到基線分離；得出人工蛹蟲草子實體與天然蟲草有相似的核苷類成分,但在含量上有較大差異的結(jié)論。新建的方法操作簡便,實驗消耗低,高效而快速,可以成為冬蟲夏草及代用產(chǎn)品中核苷類物質(zhì)檢測的一種簡便、價廉、有效的分析方法。
【圖文】：

注入上述制備好的整體基質(zhì)中，孵化1h后，用 50mM磷酸鹽緩沖液 (PH8.0)沖洗smin，得到了ACE酶微反應(yīng)器。將其安裝在毛細管電泳上，進行活性測試和抑制劑篩選。其原理如圖2一4所示。+21飛ACE一NH，圖2一4固定血管緊張素轉(zhuǎn)換酶示意圖2.2.5固定ACE的活性測試毛細管內(nèi)裝有 50mM磷酸鹽緩沖液印 H8.0)，底物溶液.用20

學(xué)位論文圖2一6未預(yù)處理毛細管內(nèi)壁與整體柱床掃描電鏡圖2.3.2整體柱成分的優(yōu)化為了得到穩(wěn)定的多孔結(jié)構(gòu)，整體柱成分十分重要。改變和影響孔結(jié)構(gòu)的有致孔劑，單體，交聯(lián)劑的種類和含量。表2一1整體柱的組成成分及其性質(zhì) TheeomPositionofPolymixtureMeanBETSurfaeeHEMA250卜LbuffercontainingPDA20mgo燈D(NH4)2504 10%APSPores 30pLnln 20mg1omg10協(xié) L196.763ArCa 114m飛 SizeDs，我們考察了聚合溶液的最佳組成，，如表2一1所示。所制備的整體柱的形態(tài)從掃描電鏡圖可以看出有較狹窄的骨架結(jié)構(gòu)直徑約為一
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R341

【參考文獻】

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本文編號：2707674