【摘要】：抵抗素(Resistin)是一個(gè)哺乳動(dòng)物中應(yīng)答于營養(yǎng)與能量變化的激素,在動(dòng)物饑餓或禁食的情況下表達(dá)量下調(diào),在飽食或高熱量食物飼喂的情況下上調(diào)表達(dá)。研究人員于2001年首次在小鼠脂肪細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)并克隆了抵抗素,并認(rèn)為這個(gè)新發(fā)現(xiàn)的因子是聯(lián)系哺乳動(dòng)物肥胖與二型糖尿病的紐帶。后續(xù)的研究表明人抵抗素可以引起胰島素靶細(xì)胞如肝細(xì)胞的胰島素抵抗,并廣泛參與到人類與炎癥相關(guān)的各種疾病中。 Sir2(Silent information regulator2)是酵母中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)應(yīng)答于熱量限制(Calorie restriction)并在熱量限制中介導(dǎo)酵母生命延長的一個(gè)基因,當(dāng)在酵母中超表達(dá)sir2后,即便不進(jìn)行熱量限制酵母的壽命也能得到延長。它在哺乳動(dòng)物中有7個(gè)同源基因(Sirtuins family),分別被命名為SIRT1-SIRT7,研究最多的是SIRT1。與酵母中同源基因一樣,SIRT1也是一個(gè)應(yīng)答于熱量限制的基因,在動(dòng)物饑餓或禁食的情況下表達(dá)量上調(diào),在飽食或高脂飲食飼喂的情況下被下調(diào)表達(dá)。用SIRT1的激活劑SRT1720飼喂高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠可以顯著的延長這些肥胖小鼠的壽命,反映了SIRT1在保護(hù)機(jī)體應(yīng)對年齡相關(guān)疾病中的重要作用。 鑒于Resistin與SIRT1在應(yīng)答于營養(yǎng)與能量變化時(shí)呈現(xiàn)出的相反的表達(dá)模式,以及它們在胰島素抵抗和炎癥中所起到的相反的作用,本研究以肝細(xì)胞為模型,采用熒光定量PCR、western blot、免疫共沉淀、鄰位連接分析、染色質(zhì)免疫共沉淀、ELIAS與細(xì)胞衰老染色等技術(shù)系統(tǒng)地研究了Resistin對SIRT1表達(dá)與功能的影響,得到以下結(jié)果： 在人肝癌細(xì)胞系HepG2中,抵抗素重組蛋白以劑量依賴的形式下調(diào)SIRT1的mRNA與蛋白表達(dá)水平,并且下調(diào)SIRT1的重要輔助蛋白Nampt,以及2個(gè)SIRT1相互作用蛋白PGC-1α和PPARα的表達(dá)。同時(shí),抵抗素處理減弱了SIRT1與PGC-1α和PPARα的相互作用程度,并下調(diào)了SIRT1-PGC-1α-PPARα轉(zhuǎn)錄復(fù)合物靶基因FGF21與CPT-1α的表達(dá)。表明抵抗素至少通過削弱SIRT1與其相互作用蛋白間的互作來損傷SIRT1的功能。 在小鼠原代肝細(xì)胞中,抵抗素重組蛋白顯著下調(diào)SIRT1mRNA與蛋白的表達(dá)。并顯著上調(diào)SIRT1負(fù)調(diào)控靶基因Farp2與Pisd的表達(dá)；抵抗素處理引起了SIRT1對其靶基因Farp2啟動(dòng)子結(jié)合能力的減弱。同時(shí),抵抗素處理引起了SIRT1與其靶DNA序列(主要衛(wèi)星重復(fù)序列)結(jié)合能力減弱。60周齡與10周齡小鼠相比,內(nèi)臟脂肪組織抵抗素mRNA水平有顯著上調(diào),血清中抵抗素蛋白水平有上升趨勢。抵抗素至少通過減弱SIRT1與其相互作用DNA的互作來損傷SIRT1的功能。 72h抵抗素處理顯著增加小鼠原代肝細(xì)胞衰老相關(guān)p-半乳糖苷酶染色陽性率,SIRT1激活劑白藜蘆醇與煙酰胺單核苷酸可以消除由抵抗素造成的細(xì)胞衰老相關(guān)p-半乳糖苷酶染色陽性率上升。 在小鼠巨噬細(xì)胞系A(chǔ)na-1中,高濃度葡萄糖與棕櫚酸處理可以顯著上調(diào)抵抗素mRNA表達(dá)水平。高濃度葡萄糖與棕櫚酸處理Ana-1與U937細(xì)胞后,收集得到的條件培養(yǎng)基處理小鼠原代肝細(xì)胞與人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞,與未經(jīng)高糖與脂肪酸處理的巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基相比,可以顯著下調(diào)小鼠原代肝細(xì)胞與人HepG2細(xì)胞SIRT1mRNA的表達(dá)水平。 綜上,抵抗素降低肝細(xì)胞中SIRT1mRNA與蛋白質(zhì)的表達(dá)水平,降低SIRT1與其重要相互作用蛋白的相互作用程度,削弱SIRT1與其靶DNA序列的結(jié)合,影響SIRT1靶基因的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Zhi-Xia Dong;Lin Su;Joanne Brymora;Claire Bird;Qing Xie;Jacob George;Jian-Hua Wang;;Resistin mediates the hepatic stellate cell phenotype[J];World Journal of Gastroenterology;2013年28期

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本文編號：2704323