【摘要】：由于病毒的高變異性,極易對抗病毒藥物產(chǎn)生耐受。如以宿主限制因子為靶點進(jìn)行新藥篩選,恢復(fù)其抗病毒功能,可減小由于藥物選擇壓力導(dǎo)致的病毒耐藥性。因此以宿主限制因子與病毒相互作用為靶點篩選新藥成為目前研究熱點之一。而深入了解宿主限制因子與病毒蛋白間的作用機(jī)制成為推動這一研究發(fā)展的前提。基于此目的,本文兩部分分別研究了宿主限制因子BST-2與甲型流感病毒(IAV)基質(zhì)蛋白2(M2)、APOBEC3G與HIV-1 Vif蛋白間的作用機(jī)制。第一部分研究了BST-2對IAV的影響。BST-2是定位于細(xì)胞膜脂筏區(qū)域的宿主限制因子,可以抑制多種包膜病毒的釋放。IAV也利用細(xì)胞膜脂筏區(qū)域完成出芽,BST-2可能對流感病毒的釋放也有具有抑制作用�；谶@一設(shè)想,我們分別研究了BST-2對IAV釋放的影響。研究發(fā)現(xiàn),BST-2對于流感病毒的釋放具有抑制作用。BST-2可以下調(diào)IAV M2蛋白的表達(dá),推測BST-2可能通過抑制M2蛋白的生物學(xué)功能,影響病毒顆粒的出芽。通過進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),BST-2可能是利用非泛素依賴的蛋白酶體途徑下調(diào)M2蛋白的表達(dá)。同時,對BST-2與M2蛋白相互結(jié)合與降解所必需的結(jié)構(gòu)域進(jìn)行了研究。我們還發(fā)現(xiàn)牛源BST-2同樣可以抑制IAV顆粒釋放,與人源BST-2相似的是,牛源BST-2也有可能通過干擾M2蛋白的生物學(xué)功能,影響病毒顆粒的釋放。第二部分研究了APOBEC3G與Vif作用機(jī)制。本實驗以同源建模和比較建模的方法,分別構(gòu)建了APOBEC3G二聚體和APOBEC3G-Vif復(fù)合物的蛋白結(jié)構(gòu)模型。發(fā)現(xiàn)APOBEC3G的124-127位氨基酸殘基既參與了APOBEC3G二聚體的形成,同時也參與到了與Vif的相互作用。實驗發(fā)現(xiàn),Vif可以打開細(xì)胞內(nèi)APOBEC3G的二聚體,提示了Vif降解APOBEC3G的底物可能是單體。進(jìn)一步實驗證明,APOBEC3G形成二聚體以及與Vif相互結(jié)合均是通過其N末端形完成的。通過對APOBEC3G124-127位氨基酸殘基進(jìn)行突變,發(fā)現(xiàn)任一氨基酸殘基的改變都會對APOBEC3G在細(xì)胞中的分布產(chǎn)生影響,并且氨基酸殘基突變也可以影響APOBEC3G二聚體的形成；但這四個單獨(dú)的氨基酸殘基突變均可以被Vif降解,并且不影響其與Vif的結(jié)合。針對這四個氨基酸殘基進(jìn)行的多點突變發(fā)現(xiàn),兩個以上氨基酸殘基的改變會更加顯著的影響APOBEC3G二聚體的形成,也會影響Vif對其降解,但是依舊不影響與Vif的結(jié)合。結(jié)果表明APOBEC3G二聚體的形成以及與Vif的相互作用均涉及到多個氨基酸的共同作用,并且APOBEC3G與Vif結(jié)合所需的區(qū)域與APOBEC3G被Vif降解所需的區(qū)域可能并不相同。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R373

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本文編號：2704697