【摘要】：由于病毒的高變異性,極易對(duì)抗病毒藥物產(chǎn)生耐受。如以宿主限制因子為靶點(diǎn)進(jìn)行新藥篩選,恢復(fù)其抗病毒功能,可減小由于藥物選擇壓力導(dǎo)致的病毒耐藥性。因此以宿主限制因子與病毒相互作用為靶點(diǎn)篩選新藥成為目前研究熱點(diǎn)之一。而深入了解宿主限制因子與病毒蛋白間的作用機(jī)制成為推動(dòng)這一研究發(fā)展的前提�；诖四康�,本文兩部分分別研究了宿主限制因子BST-2與甲型流感病毒(IAV)基質(zhì)蛋白2(M2)、APOBEC3G與HIV-1 Vif蛋白間的作用機(jī)制。第一部分研究了BST-2對(duì)IAV的影響。BST-2是定位于細(xì)胞膜脂筏區(qū)域的宿主限制因子,可以抑制多種包膜病毒的釋放。IAV也利用細(xì)胞膜脂筏區(qū)域完成出芽,BST-2可能對(duì)流感病毒的釋放也有具有抑制作用�；谶@一設(shè)想,我們分別研究了BST-2對(duì)IAV釋放的影響。研究發(fā)現(xiàn),BST-2對(duì)于流感病毒的釋放具有抑制作用。BST-2可以下調(diào)IAV M2蛋白的表達(dá),推測(cè)BST-2可能通過(guò)抑制M2蛋白的生物學(xué)功能,影響病毒顆粒的出芽。通過(guò)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),BST-2可能是利用非泛素依賴的蛋白酶體途徑下調(diào)M2蛋白的表達(dá)。同時(shí),對(duì)BST-2與M2蛋白相互結(jié)合與降解所必需的結(jié)構(gòu)域進(jìn)行了研究。我們還發(fā)現(xiàn)牛源BST-2同樣可以抑制IAV顆粒釋放,與人源BST-2相似的是,牛源BST-2也有可能通過(guò)干擾M2蛋白的生物學(xué)功能,影響病毒顆粒的釋放。第二部分研究了APOBEC3G與Vif作用機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)以同源建模和比較建模的方法,分別構(gòu)建了APOBEC3G二聚體和APOBEC3G-Vif復(fù)合物的蛋白結(jié)構(gòu)模型。發(fā)現(xiàn)APOBEC3G的124-127位氨基酸殘基既參與了APOBEC3G二聚體的形成,同時(shí)也參與到了與Vif的相互作用。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),Vif可以打開細(xì)胞內(nèi)APOBEC3G的二聚體,提示了Vif降解APOBEC3G的底物可能是單體。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明,APOBEC3G形成二聚體以及與Vif相互結(jié)合均是通過(guò)其N末端形完成的。通過(guò)對(duì)APOBEC3G124-127位氨基酸殘基進(jìn)行突變,發(fā)現(xiàn)任一氨基酸殘基的改變都會(huì)對(duì)APOBEC3G在細(xì)胞中的分布產(chǎn)生影響,并且氨基酸殘基突變也可以影響APOBEC3G二聚體的形成；但這四個(gè)單獨(dú)的氨基酸殘基突變均可以被Vif降解,并且不影響其與Vif的結(jié)合。針對(duì)這四個(gè)氨基酸殘基進(jìn)行的多點(diǎn)突變發(fā)現(xiàn),兩個(gè)以上氨基酸殘基的改變會(huì)更加顯著的影響APOBEC3G二聚體的形成,也會(huì)影響Vif對(duì)其降解,但是依舊不影響與Vif的結(jié)合。結(jié)果表明APOBEC3G二聚體的形成以及與Vif的相互作用均涉及到多個(gè)氨基酸的共同作用,并且APOBEC3G與Vif結(jié)合所需的區(qū)域與APOBEC3G被Vif降解所需的區(qū)域可能并不相同。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R373

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1 翟從R，

本文編號(hào)：2704697