【摘要】： 第一部分：馬尾神經(jīng)受壓大鼠馬尾與脊髓圓錐神經(jīng)細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化 目的：通過對大鼠馬尾受壓后其形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化及脊髓圓錐神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化的觀察，證實馬尾受壓可導(dǎo)致脊髓圓錐神經(jīng)元的損害，尋找馬尾綜合征的可能病因機制。 方法：SD大鼠66只，雄性，300—350克，分術(shù)后30min、2h、4h、8h、1d、3d、1w、2w、3w取材，及假手術(shù)組與正常對照組共11組。 動物模型的制作：參照Kawakami等的方法，用質(zhì)量濃度為0.4％的硫賁妥鈉(7mg／kg)腹腔注射麻醉，剪去術(shù)區(qū)被毛，75％酒精消毒，無菌手術(shù)暴露L_5節(jié)段棘突與椎板，蚊式血管鉗咬除L_5棘突與椎板，暴露硬膜，于硬膜椎板間隙向椎管頭端塞入一條1×2×10mm~3的硅酮片。待動物蘇醒后，均為出現(xiàn)截癱，按改良Tarlov法(Salzman評分標準)測定神經(jīng)功能。 浙江大學(xué)博士畢業(yè)生論文 飛 取材動物在各時相點先行改良Tarlov法神經(jīng)功能評分后麻醉，經(jīng) 左心室置主動脈插管，剪破右心耳，以0.9%生理鹽水灌注，待右心耳流出 透明液體后，改用4%的多聚甲醛灌流15一20分鐘，待大鼠尸體僵硬后， 完整取下T7以下的脊髓與馬尾。切取52一53節(jié)段脊髓與受壓節(jié)段馬尾(L.)。 HE染色切片標本制作:取出的脊髓于馬尾組織做石蠟切片，片厚 IOum，每塊組識隨機取連續(xù)切片多張，取一套行HE染色。 電鏡標本制作:選造模術(shù)后3天、1周、2用、3周及假手術(shù)組大鼠各 一只，按上述取材法取出脊髓與馬尾，將取出的脊髓在解剖顯微鏡下矢狀 切成兩半，取馬尾的其中一束神經(jīng)纖維切成Zlnln長度。2.5%戊二醛15ml 進行預(yù)固定，2小時后用緩沖液充分漂洗，再用1%餓酸溶液作后固定。固 定過程溫度保持在4℃。用乙醇系列脫水。用環(huán)氧樹脂618包埋液逐步取 飛代脫水劑。超薄切片100A。用醋酸鈾和構(gòu)株酸鉛進行染色。 結(jié)果:壓迫組術(shù)后即出現(xiàn)雙后肢全癱或不全癱，，改良Tarlov評分均 為O一2級，3w后除個別恢復(fù)為3級外，后肢運動功能無恢復(fù)。HE染色結(jié)果: 造模術(shù)后30min一ld，馬尾后方神經(jīng)束膜與神經(jīng)束間小血管關(guān)閉或狹窄變 形，前方正常。造模術(shù)后3d，小血管重新開放，神經(jīng)纖維髓鞘退變，神經(jīng)纖 維間水腫，可見炎性細胞浸潤。術(shù)后lw馬尾后方直接受壓處神經(jīng)纖維變性， 結(jié)構(gòu)不清，纖維組織內(nèi)有肉芽組織形成，馬尾腹側(cè)神經(jīng)纖維變性，髓鞘變 粗，神經(jīng)內(nèi)小血管擴張、毛細血管增生，受壓脊膜增生。Zw一3w時，上述 變化更為嚴重。馬尾受壓后sh時，個別骸髓神經(jīng)細胞過染，細胞核結(jié)構(gòu)仍 正常;ld后，骸髓前角細胞中的較多細胞出現(xiàn)結(jié)構(gòu)變異，著色異常，細 胞核濃聚，細胞皺縮。電鏡觀察結(jié)果:造模術(shù)后3d:髓鞘染色不均勻，邊 緣粗糙，髓鞘內(nèi)裂隙增多。雪旺氏細胞胞核可見異染色質(zhì)邊聚，胞質(zhì)內(nèi)小 泡與溶酶體增多。造模術(shù)后1一3w上述變化進一步加重。壓迫組脊髓前角 神經(jīng)元表現(xiàn):造模術(shù)后3d起，神經(jīng)細胞胞核仍為圓形或橢圓形，但明顯深 染，核周出現(xiàn)異染色質(zhì)，線粒體腫脹，少數(shù)線粒體見外膜溶解破裂。胞內(nèi) 出現(xiàn)較多的胞質(zhì)小泡。術(shù)后1，:胞核明顯深染，異染色質(zhì)增多邊聚，出現(xiàn) 胞核扭曲固縮，線粒體腫脹明顯，峭稀少，有的斷裂。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)斷裂、 浙江大學(xué)博士畢業(yè)生論文 脫顆粒，胞質(zhì)內(nèi)見大量小泡。周圍髓鞘松散解體。術(shù)后2w、3w組表現(xiàn)與術(shù) 后1w組相似。 結(jié)論:1.馬尾受壓后可導(dǎo)致脊髓圓錐神經(jīng)元的形態(tài)與結(jié)構(gòu)的改變。 2.神經(jīng)元的損傷可能是造成臨床上馬尾神經(jīng)綜合癥減壓術(shù)后，神經(jīng)功能恢 復(fù)差的原因之一。 第二部分馬尾神經(jīng)受壓對脊髓圓錐神經(jīng)元凋亡的影響 目的:采用原位末端脫氧核糖酶轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)dUTP標記(TUNEL)技術(shù)， 對馬尾神經(jīng)受壓的大鼠脊髓圓錐進行檢測，，以明確神經(jīng)細胞在馬尾神經(jīng)受 壓后凋亡速度是否變化以及凋亡細胞數(shù)量與時相的關(guān)系。 方法:TUNEL染色操作步驟按說明書進行，結(jié)果判定:細胞核中有棕 黃色顆粒者為陽性細胞，即凋亡的細胞。測脊髓橫截面面積。統(tǒng)計學(xué)處理: 每張切片的陽性細胞數(shù)除以脊髓橫切面的面積即為單位面積的陽性細胞 數(shù)，所得數(shù)據(jù)經(jīng) SPSSn.5軟件處理，以X士S表示，統(tǒng)計學(xué)方法采用單因 素方差分析。 結(jié)果:TUNEL染色陽性細胞計數(shù)結(jié)果為:陰性對照:0.28士0.34，假 手術(shù)組:0.53士0.52，術(shù)后3Omin:0.60士0.47，術(shù)后Zh:0.83士0.54， 術(shù)后4h:1.17土0.55，術(shù)后sh:4.05士0.95，術(shù)后ld:9.22士4.65，術(shù)后 3d:10.30士2.65，術(shù)后lw:6.23士1.96，術(shù)后Zw:5.64士1.71，術(shù)后3w: 5.09士1.58。與對照組相比，術(shù)后8h起陽性細胞增加，術(shù)后3d為高峰，至 術(shù)后3w，仍顯著高于對照組。 結(jié)論:馬尾神經(jīng)受壓可導(dǎo)致脊髓圓錐神經(jīng)元調(diào)亡數(shù)量的明顯增加。受 壓后8h增加，3d達高峰，3w時仍擒于正常。晚期凋亡不能逆轉(zhuǎn)，這可能是 CES逾期手術(shù)效果不理想的重要原因之一。本實驗的結(jié)果提示馬尾受壓后 8h前減壓應(yīng)有良好療效，8h后解壓的療效需由后續(xù)的實驗證實。 浙江大學(xué)博士畢業(yè)生論文 、 ) 第三部分大鼠馬尾神經(jīng)受壓后脊髓圓錐神經(jīng)元熱休克蛋白70表達 的變化
【圖文】：

動物模型的椎管橫斷面

動物模型的椎管縱切面
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R361

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本文編號：2704308