【摘要】：內(nèi)皮素-1(endothelin-1, ET-1)最初由豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液中分離得到的一種活性肽,是目前已知最強(qiáng)的縮血管活物質(zhì)。除內(nèi)皮細(xì)胞外,還發(fā)現(xiàn)角質(zhì)形成細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、白細(xì)胞、心肌細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞及一些腫瘤細(xì)胞也發(fā)現(xiàn)能分泌ET-1。ET-1通過(guò)兩種G蛋白耦聯(lián)的受體(G-protein-coupled receptor, GPCR),ETA和ETB受體發(fā)揮作用。ETA受體主要在血管內(nèi)皮、神經(jīng)元及肥大細(xì)胞發(fā)現(xiàn)有表達(dá),而ETB受體主要在角質(zhì)形成細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等表達(dá)。 辣椒素可引起新鮮分離的背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion, DRG)神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)向電流及細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度上升,ET-1可通過(guò)蛋白激酶C (protein kinaseC,PKC)途徑增強(qiáng)DRG神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣對(duì)辣椒素的反應(yīng),辣椒素引起的內(nèi)向電流也明顯增強(qiáng)。動(dòng)物局部應(yīng)用ET-1出現(xiàn)傷害性行為表現(xiàn),而人局部應(yīng)用ET-1出現(xiàn)疼痛,近年來(lái)發(fā)現(xiàn)人及動(dòng)物局部應(yīng)用ET-1也出現(xiàn)搔癢。 由同一種物質(zhì)同時(shí)引起疼痛和搔癢,機(jī)體如何處理疼痛和搔癢的信息仍不得而知。ET-1引起搔癢的分子機(jī)制尚不清楚,脊髓中的胃泌素釋放肽受體(Gastrin-releasing peptide receptor, GRPR)是搔癢感受分子,選擇性去除小鼠脊髓Ⅰ層表達(dá)GRPR的神經(jīng)元,動(dòng)物對(duì)所有測(cè)試的致癢劑(包含ET-1在內(nèi))均無(wú)反應(yīng),提示初級(jí)神經(jīng)元可能釋放不同的神經(jīng)遞質(zhì),激活脊髓中痛或者癢特異性感受神經(jīng)元,本文主要研究ET-1引起搔癢分子信號(hào)通路。 方法 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)選用雄性C57BL/6J小鼠,體重20-25g,由中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,本研究及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用與處理方法得到廣東醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物試驗(yàn)倫理委員會(huì)的書(shū)面同意,并按照規(guī)定遵守動(dòng)物福利及盡可能減少使用動(dòng)物的數(shù)量。 頸背部注射搔癢模型 小鼠于實(shí)驗(yàn)前一天頸背部皮膚剃毛,小鼠于實(shí)驗(yàn)前30min放置于透明的塑料盒子里預(yù)適應(yīng)。應(yīng)用30G針頭進(jìn)行頸背部皮內(nèi)注射,注射藥物后立即放入塑料盒子里面觀察,觀察小鼠用后肢搔抓注射部位次數(shù),小鼠完成從舉起后肢搔抓注射部位到放下后肢全過(guò)程為一次搔抓,觀察30min。 臉頰部注射行為學(xué)觀察 實(shí)驗(yàn)前一天小鼠臉頰部剃毛,實(shí)驗(yàn)前放置于透明的塑料盒子預(yù)適應(yīng)30min,小鼠從盒子里面取出后用微量注射器(將30G針頭與微量注射器相連)進(jìn)行臉頰部皮內(nèi)注射,注射容量為10μl。注射藥物后立即放入塑料籠子里面觀察,記錄30min內(nèi)動(dòng)物分別用前肢拂和后肢搔抓注射部位的次數(shù),用注射側(cè)前肢拂注射部位是疼痛相關(guān)的行為學(xué)表現(xiàn),用后肢搔抓注射部位是搔癢相關(guān)的行為學(xué)表現(xiàn)。 熱痛覺(jué)閾值 熱痛覺(jué)閾值測(cè)量實(shí)驗(yàn)前一天,小鼠在實(shí)驗(yàn)臺(tái)適應(yīng)1h,測(cè)定熱痛覺(jué)閾值時(shí),用熱輻射刺激儀照射小鼠足底緊貼玻璃板部位。記錄照射開(kāi)始至小鼠出現(xiàn)明顯逃避的時(shí)間,調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度,使注射藥物前逃避時(shí)間(paw withdraw time,PWT)為(8-12)s。為避免熱損傷,光照時(shí)間不超過(guò)20s。 去TRPV1神經(jīng)元小鼠制作 雄性新生小鼠于出生后第二天七氟醚麻醉后皮下注射辣椒素(50mg/kg),對(duì)照組注射同樣容量的溶劑(PBS含10%ethanol與10%Tween-80),動(dòng)物在SPF動(dòng)物房里面飼養(yǎng)6周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。新生期注射辣椒素能夠去除表達(dá)TRPV1神經(jīng)元,用角膜刺激實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證去除TRPV1神經(jīng)元的效果,用0.01%辣椒素20μl噴到小鼠眼睛上,小鼠會(huì)用前肢拂眼睛,記數(shù)1min內(nèi)用前肢拂眼睛的次數(shù),如1min內(nèi)用前肢拂眼睛的次數(shù)少于5次就認(rèn)為已經(jīng)成功去除TRPV1神經(jīng)元。 背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng) C57BL/6J小鼠用七氟醚麻醉后背部皮膚消毒,剪下脊柱后快速轉(zhuǎn)移至放置于冰上培養(yǎng)皿內(nèi),將脊柱泡在冷的L15內(nèi),無(wú)菌狀態(tài)下取出DRG,用0.25%膠原酶Ⅳ于37℃水浴振蕩1h,機(jī)械吹打后用低溫離心機(jī)在下離心(1000rpm)5min。培養(yǎng)液為含10%胎牛血清的Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM),加入青霉素G鈉鹽和硫酸鏈霉素各10μ g/ml,并且加入神經(jīng)生長(zhǎng)因子50ng/ml,細(xì)胞接種于多聚左旋賴氨酸包被的玻片或培養(yǎng)板上,置于37℃5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。 PKCε膜轉(zhuǎn)位 細(xì)胞接種于多聚左旋賴氨酸包被的直徑為10mm玻片上,用0.01M磷酸鹽緩沖液(phosphate-buffered saline, PBS)洗脫培養(yǎng)液后,加入PBS或ET-1后放入37℃及5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)60s后吸出上清,用4%PFA固定20min,漂洗后使用含10%的山羊血清室溫下作用1h,加入第一抗體,分別為兔來(lái)源抗PKCε抗體(1：500)及豚鼠來(lái)源的抗TRPV1抗體(1：3000),并加入0.2%Triton4℃下孵育16h,漂洗后加入結(jié)合有Alexa Fluor594抗兔IgG和結(jié)合有Alexa Fluor488抗豚鼠IgG的第二抗體孵育2h。用激光共焦顯微鏡(Zeiss, Germany)觀察PKCs膜轉(zhuǎn)位情況。 細(xì)胞內(nèi)cAMP檢測(cè) 細(xì)胞接種于多聚左旋賴氨酸包被的24孔培養(yǎng)板上,倒去培養(yǎng)液,用PBS沖洗后,加入含磷酸二酯酶抑制3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine, IBMX,2.5mM)的PBS(含0.1%葡萄糖)在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育10min,吸出培養(yǎng)液,加入含IBMX (2.5mM)及ET-1(10nM)的PBS(對(duì)照組只加入IBMX)繼續(xù)孵育60s,倒去培養(yǎng)液,每孔加入細(xì)胞裂解液250μ1(0.1M HC1,0.8%Triton X-100),室溫下放置10min,吸出后離心(10000rpm)2min取上清,上清100μl應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)測(cè)量標(biāo)本中cAMP水平,采用小鼠cAMP單克隆抗體ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)。用純化的山羊抗小鼠抗體IgG包被96孔板,制成固相抗體,在實(shí)驗(yàn)前20min準(zhǔn)備好所有試劑及酶聯(lián)板放置于室溫,往包被抗體的96孔板中依次加入cAMP標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、小鼠單克隆cAMP抗體、辣根過(guò)氧化物酶(horse-radish peroxidase, HRP)結(jié)合的cAMP,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后用底物四甲基聯(lián)苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine,TMB)顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的cGMP呈正相關(guān)。用在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度吸光度曲線測(cè)量樣品濃度。另取上清50μ l應(yīng)用二喹啉甲酸蛋白質(zhì)試劑盒(bicinchoninic acid protein assay kit, BCA protein assay kit)測(cè)量蛋白含量,測(cè)量562nm處吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度吸光度曲線計(jì)算樣品蛋白濃度。我們將細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度根據(jù)蛋白含量進(jìn)行校正比較,最終細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度單位表達(dá)為pmol/mg蛋白。 結(jié)果 1ET-1通過(guò)激活ETA受體引起搔癢 當(dāng)頸背部皮內(nèi)注射100μl濃度為10μM(總量為1000pmol)的ET-1時(shí)產(chǎn)生明顯的搔抓,30min內(nèi)小鼠用后肢抓注射部位的次數(shù)達(dá)到360次,依次稀釋10倍發(fā)現(xiàn)頸背部皮內(nèi)注射總量為1pmol(此時(shí)濃度僅為0.01μM)ET-1仍可引起明顯搔抓,當(dāng)注射總量為100pmol時(shí)30min內(nèi)引起搔抓187次,從ET-1引起搔癢的劑量反應(yīng)關(guān)系可以看到這一劑量(1μM,100μl)引起中等程度的搔抓次數(shù),我們以后的研究中除非特別說(shuō)明均采用這一劑量的ET-1(1μM,100μl)。 臉頰部注射ET-110μM(容量為10μl)可引起明顯后肢搔抓與前肢拂注射部位,注射ET-11μM引起明顯后肢搔抓,但前肢拂注射部位不明顯,而注射ET-10.1μM不能引起明顯的后肢搔抓與前肢拂注射部位。 特異性ETA受體拮抗劑BQ123及特異性ETB受體拮抗劑BQ788單獨(dú)頸背部皮內(nèi)注射時(shí)并不引起明顯的搔抓反應(yīng),BQ123100nmol與100pmol ET-1共同注射時(shí)可明顯抑制ET-1引起的搔抓,而B(niǎo)Q78830nmol與100pmol ET-1共同注射時(shí)可明顯增加ET-1引起的搔抓,說(shuō)明ET-1通過(guò)ETA受體引起搔癢,而ETB受體可能發(fā)揮止癢作用。 2PKC途徑介導(dǎo)ET-1引起的搔癢 雙吲哚亞酰胺I (Bisindolylmaleimide I, BIM)是蛋白激酶C (protein kinaseC,PKC)抑制劑,BIM2μg或10μg與ET-1共同注射均能明顯抑制ET-1引起的搔癢,說(shuō)明ET-1引起的搔癢和PKC途徑有關(guān)。培養(yǎng)的DRG神經(jīng)元用ET-1(10nM)處理后可見(jiàn)PKCε主要分布在細(xì)胞膜上,而未用ET-1處理的DRG神經(jīng)元可見(jiàn)PKCε主要分布在細(xì)胞漿內(nèi)。 巴豆醇-12-十四烷酸酯-13-乙酸酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)是常用的PKC激活劑,頸背部皮內(nèi)注射PMA1μM和10μM時(shí)(總量分別為100pmol與1000pmol)時(shí)引起搔癢,而注射10pmol時(shí)不引起明顯搔癢。 足底注射PMA與ET-1均能引起熱痛覺(jué)過(guò)敏,小鼠足底注射PMA100pmol/10μl一直出現(xiàn)抬足等行為,不能測(cè)量熱痛覺(jué)閾值,10pmol/10μl引起明顯的熱痛覺(jué)過(guò)敏,1pmol/10μl引起的熱痛覺(jué)過(guò)敏ET-1100pmol/10μl所引起的熱痛覺(jué)過(guò)敏相當(dāng),足底注射1μg BIM15min后可以完全抑制同一部位注射ET-1和PMA引起的熱痛覺(jué)過(guò)敏。 3cAMP-PKC途徑介導(dǎo)ET-1引起的搔癢 由磷酯酶C (phospholipase C, PLC)激活PKC是PKC激活的經(jīng)典通路,我們應(yīng)用PLC阻滯劑U73122觀察PLC通路的作用。頸背部注射U73122(10pmol,100μl)不引起明顯搔抓及其他異常表現(xiàn),但與預(yù)期結(jié)果相反,U73122(100pmol)與ET-1共同注射明顯增加ET-1引起的搔抓次數(shù)。提示可能由非經(jīng)典通路環(huán)單磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)激活PKC從而介導(dǎo)ET-1引起的搔癢。 ET-1(10nM)刺激培養(yǎng)的DRG神經(jīng)元60s后,應(yīng)用cAMP單克隆抗體ELISA法測(cè)量細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度的變化,ET-1處理神經(jīng)元后明顯增加細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度。直接應(yīng)用腺苷酸環(huán)化酶(Adenylyl cyclase, AC)抑制劑SQ22536對(duì)ET-1引起搔癢的作用。SQ22536與ET-1共同注射可劑量依賴性地抑制ET-1引起的搔癢。AC激活后引起細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度升高,cAMP濃度升高引起蛋白激酶A(protein kinase A, PKA)激活,PKA阻滯劑H89與ET-1共同皮內(nèi)注射對(duì)ET-1引起的搔癢無(wú)明顯作用。 為了排除U73122的非特異性作用,我們研究了更高濃度的U73122對(duì)ET-1及復(fù)合物48/80(compound48/80, C48/80)引起搔癢的影響。C48/80可刺激培養(yǎng)的肥大細(xì)胞脫顆粒釋放組胺,U73122(10μM)可明顯抑制肥大細(xì)胞的脫顆粒。C48/80皮內(nèi)注射可引起明顯的搔癢,與U73122(1000pmol)共同注射后引起的搔癢可明顯減輕,而U73122(1000pmol)仍然增加ET-1引起的搔癢。皮內(nèi)注射phosphatidylcholine specific phospholipase C(磷脂酰膽堿磷酯酶C, PC-PLC)抑制劑D609,15min再在同一部位注射ET-1或者C48/80,D609可抑制ET-1引起的搔癢,而D對(duì)C48/80引起的搔癢無(wú)明顯影響。 4TRPV1、H1R、TRP、TRPA1在ET-1引起搔癢中的作用 腹腔注射TRPV1拮抗劑辣椒平(4mg/kg)或者H1R拮抗劑美吡拉敏(mepyramine,40mg/kg)對(duì)ET-1引起的搔癢無(wú)明顯影響。新生期注射辣椒素后能去除TRPV1神經(jīng)元,ET-1在新生期注射辣椒素成年動(dòng)物不引起明顯搔癢,而對(duì)照組成年動(dòng)物對(duì)ET-1引起的搔癢反應(yīng)無(wú)明顯影響。非選擇性TRP抑制劑釕紅(ruthenium red, RR,5nmol)共同注射可增加ET-1引起的搔癢,但同樣劑量的RR抑制組胺引起的搔癢。TRPA1拮抗劑AP18(100nmol)共同注射可增加ET-1引起的搔癢,同樣劑量的AP18對(duì)組胺引起的搔癢無(wú)明顯作用。ET-1引起的疼痛可能與TRPA1有關(guān),RR與AP18增加ET-1引起的搔癢可能與其減少疼痛有關(guān)。在皮內(nèi)注射ET-1前15min皮下注射嗎啡(5mg/kg),嗎啡對(duì)ET-1引起的搔癢無(wú)明顯影響,提示ET-1引起的搔癢與疼痛無(wú)關(guān)。 5ETB受體的止癢作用 皮下注射納洛酮0.5mg/kg可明顯抑制15min后皮內(nèi)注射ET-1所引起的搔癢,而小劑量的納洛酮(2nmol)皮下注射對(duì)ET-1引起的搔癢無(wú)明顯影響,當(dāng)納洛酮與ET-1共同一起皮內(nèi)注射時(shí),兩種劑量的納洛酮(2nmol與0.5mg/kg)均明顯增加ET-1引起的搔癢,這種作用與納洛酮的全身作用無(wú)關(guān),因?yàn)槿響?yīng)用納洛酮的效果與此相反或者在小劑量的時(shí)候無(wú)明顯效果。 外周存在μ、κ、δ三種阿片類受體亞型,我們應(yīng)用選擇性亞型拮抗劑來(lái)觀察各亞型的作用,大劑量KOR拮抗劑Nor-BNI(超過(guò)15nmol/50μl時(shí))頸背部皮內(nèi)注射時(shí)可引起搔癢,而5nmol/50μl時(shí)不引起明顯搔癢,我們選擇了這一劑量進(jìn)行研究,其他的劑量參考以前的研究,MOR拮抗劑CTOP或DOR拮抗劑naltrindole一起注射對(duì)ET-1引起的搔癢無(wú)明顯影響,而Nor-BNI明顯增加ET-1引起的搔癢,可見(jiàn)外周KOR介導(dǎo)了ETB受體的止癢作用。 KOR激動(dòng)劑的抗傷害作用與一氧化氮有關(guān),一氧化氮合酶(nitric oxide synthase)有內(nèi)皮型(endothelia)、神經(jīng)型(neuronal)和誘導(dǎo)型(inducible)三種亞型,nNOS抑抑劑可拮抗KOR激動(dòng)劑的止痛作用。應(yīng)用非選擇性NOS抑制劑發(fā)現(xiàn)L-NAME(200nmol)明顯增加ET-1引起的搔癢,而D-NAME對(duì)ET-1引起的搔癢無(wú)明顯影響。NOS有三種亞型分別為內(nèi)皮型、神經(jīng)型、誘導(dǎo)型,應(yīng)用特異的選擇性亞型抑制劑與ET-1共同注射,eNOS抑制劑(L-NIO,200nmol)可明顯增加ET-1引起的搔癢,而誘導(dǎo)型iNOS抑制劑(AMT,5nmol)、神經(jīng)型nNOS亞型抑制劑(Nco-Propyl-L-arginine,20nmol)對(duì)ET-1引起的搔癢無(wú)明顯作用。由于神經(jīng)元中主要存在nNOS,角質(zhì)形成細(xì)胞中主要存在eNOS, eNOS抑制劑也能增加ET-1引起的搔癢說(shuō)明KOR激動(dòng)劑可能通過(guò)角質(zhì)形成細(xì)胞起作用。 結(jié)論 1ET-1通過(guò)ETA/AC/PKC途徑引起搔癢。 2由cAMP激活PKC是非經(jīng)典途徑,這個(gè)通路通過(guò)Epac(exchange proteins activated directly by cyclic AMP, cAMP直接激活的交換蛋白)激活下游PLC與PLD,在體內(nèi)與體外實(shí)驗(yàn)均發(fā)現(xiàn)從cAMP激活PKC離不開(kāi)PLC與PLD的作用,本研究中PLC抑制劑U73122與預(yù)期相反的作用,說(shuō)明ET-1引起搔癢的cAMP激活PKC通路與以前發(fā)現(xiàn)的通路不同,我們發(fā)現(xiàn)了一個(gè)全新的由cAMP激活PKC通路,該通路可能與PC-PLC通路有關(guān)。 3ETB受體發(fā)揮止癢作用,外周阿片類受體κ亞型通過(guò)eNOS介導(dǎo)這一止癢作用,角質(zhì)形成細(xì)胞釋放的NO也可能發(fā)揮止癢作用。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363

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4 王燕舞;孫永華;鄭先念;朱作言;;豆蔻�；母缓彼岬牡鞍准っ窩的底物(Marcks)在早期胚胎發(fā)育中的作用[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

5 胡源;杜林方;蔣佳宏;;擬南芥蛋白激酶STN7和STN8結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)與功能分析[A];第十次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2006年

6 黃翠萍;楊和平;;p38蛋白激酶對(duì)脂多糖誘導(dǎo)肺泡巨噬細(xì)胞NF-κB活化的調(diào)控[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)呼吸病學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

7 鄭錦彪;王力平;王玲莉;戴林森;;人cAMP依賴型蛋白激酶β抑制劑NMR譜圖的歸屬以及基于化學(xué)位移的二級(jí)結(jié)構(gòu)研究[A];第十四屆全國(guó)波譜學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2006年

8 高瑞蘭;陳小紅;林筱潔;錢(qián)煦岱;周郁鴻;徐衛(wèi)紅;;三七皂苷在造血細(xì)胞內(nèi)MAPK信號(hào)傳遞途徑的研究[A];全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合血液病學(xué)術(shù)研討會(huì)、浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)血液病專業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)首次學(xué)術(shù)年會(huì)暨繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

9 楊鳴良;沈磊;孫長(zhǎng)伏;;特異性抑制劑對(duì)腺樣囊性癌細(xì)胞中蛋白激酶B表達(dá)的影響[A];第五次全國(guó)口腔頜面—頭頸腫瘤學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2006年

10 謝萬(wàn)欽;趙玉龍;胡文全;李翠鳳;;植物內(nèi)源蛋白激酶對(duì)轉(zhuǎn)脂蛋白BP-10磷酸化的研究[A];2007中國(guó)植物生理學(xué)會(huì)全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 麥國(guó)榮;內(nèi)皮素受體抑制劑的研究進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2001年

2 陸志城;蛋白激酶靶向治療 藥物之劫？[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

3 新華;皮內(nèi)注射艾滋病疫苗試驗(yàn)取得重大進(jìn)展[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

4 張建琛　李靜;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)可調(diào)控細(xì)胞死亡方式的人體蛋白激酶[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

5 成銀霞;外周鎮(zhèn)痛藥作用新機(jī)制：激活精氨酸/NO/cGMP/蛋白激酶G/ATP敏感性鉀通道 Analgesics:Stimrlators of the NO-cGMP-PKG-K+ ATP Channel[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

6 金楚;碘過(guò)敏試驗(yàn)[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

7 李春和;奶牛結(jié)核菌素皮內(nèi)注射技術(shù)[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2007年

8 副主任醫(yī)師 黃利慧;壓力過(guò)大令人失憶[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2007年

9 記者 班瑋;人體有種蛋白激酶或可用于“以肥治肥”[N];新華每日電訊;2009年

10 ;電針能激活老年癡呆大鼠海馬蛋白激酶信號(hào)通路[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 季文進(jìn);內(nèi)皮素-1引起搔癢的分子機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

2 冉迎春;內(nèi)皮素-1對(duì)高氧暴露早產(chǎn)鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的影響及其機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

3 張宇;內(nèi)皮素系統(tǒng)與冠心病患者支架植入術(shù)、冠狀動(dòng)脈慢血流的關(guān)系[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2006年

4 田貴華;長(zhǎng)期電針刺激百會(huì)、足三里對(duì)SHR大鼠海馬CA1區(qū)微血管和神經(jīng)元損傷的改善作用[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

5 陳艾東;室旁核血管緊張素Ⅱ和內(nèi)皮素-1調(diào)控心交感傳入反射機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

6 王建亭;蛋白激酶CK2α特異性siRNA真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對(duì)喉癌抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2007年

7 王超;NF-κB介導(dǎo)大鼠背根神經(jīng)節(jié)持續(xù)機(jī)械刺激后熱痛覺(jué)過(guò)敏及其分子機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2012年

8 尤青海;src抑制的蛋白激酶C底物在炎癥因子所致肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性變化中的作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

9 王婧婧;半邊蓮生物堿和山梗菜堿對(duì)內(nèi)皮素-1誘導(dǎo)的人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖作用的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2006年

10 郭凌晨;人類激酶基因CK1γ1L2和PDIK1L的克隆和功能研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 童宗焰;內(nèi)皮素在創(chuàng)傷性休克中作用的基礎(chǔ)與臨床研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

2 紀(jì)巖磊;ET-1、TGF-β_1及α-SMA在積水腎盂中的表達(dá)及其相關(guān)性研究[D];青島大學(xué);2007年

3 楊澤福;氧活性產(chǎn)物介導(dǎo)縮血管活性物質(zhì)促進(jìn)心肌細(xì)胞分泌內(nèi)皮素[D];華中科技大學(xué);2006年

4 周娟;細(xì)胞內(nèi)鈣在內(nèi)皮素-1促肺腺癌細(xì)胞SPC-A1生長(zhǎng)中的作用及機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2008年

5 倪布清;新型K_（ATP）通道開(kāi)放劑埃他卡林對(duì)人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2007年

6 許露偉;前列腺增生組織中內(nèi)皮素-1及其受體的表達(dá)及臨床研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2006年

7 孔德全;先心病體外循環(huán)圍術(shù)期血漿C型利鈉肽與內(nèi)皮素-1水平變化的相關(guān)性研究[D];蘭州大學(xué);2006年

8 王珍;內(nèi)皮素-1基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關(guān)聯(lián)性分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

9 李建;肺血栓栓塞癥早期血清學(xué)標(biāo)志物的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

10 楊明高;三拗芎葶合劑對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠血漿一氧化氮/內(nèi)皮素-1影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2005年

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本文編號(hào)：2697698