【摘要】： 甲氧滴滴涕(methoxychlor,MXC)是一種替代滴滴涕的有機(jī)氯殺蟲劑,因其殺蟲效果明顯,生物毒性相對(duì)較低,在許多國(guó)家得到廣泛應(yīng)用。但由于大規(guī)模的使用,加之甲氧滴滴涕所具有難降解性、生物聚積性和沿食物鏈傳遞的特性,使其所造成的環(huán)境污染已遍及全球生態(tài)系統(tǒng)。在土壤、河流、動(dòng)植物體內(nèi)、人體體液、甚至孕婦血液、胎盤、臍血、新生兒體內(nèi)、乳汁中都檢測(cè)到了甲氧滴滴涕。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)MXC具有不孕、流產(chǎn)、誘導(dǎo)卵泡閉鎖等生殖毒性。因此,研究MXC對(duì)生殖細(xì)胞的影響具有重要意義。而有關(guān)MXC對(duì)體外卵母細(xì)胞成熟和受精及胚胎發(fā)育的影響的報(bào)道卻很少。我們的研究以昆明白小鼠未成熟卵母細(xì)胞為研究對(duì)象,采用體外成熟、體外受精及早期胚胎發(fā)育培養(yǎng)的方法研究不同劑量甲氧滴滴涕對(duì)卵母細(xì)胞成熟、受精和早期胚胎發(fā)育的影響。 研究目的:1研究MXC對(duì)小鼠未成熟卵母細(xì)胞體外成熟的毒性作用 2.研究MXC對(duì)小鼠成熟卵母細(xì)胞體外受精的毒性作用 3.研究MXC對(duì)小鼠早期胚胎發(fā)育的影響 第一部分甲氧滴滴涕對(duì)小鼠卵母細(xì)胞體外成熟的毒性作用研究方法:1、超促排卵得到未成熟小鼠卵母細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組MXC濃度分別為7.25,14.5,29μg/mL;對(duì)照組直接用M2培養(yǎng)液培養(yǎng),各組培養(yǎng)時(shí)間均為24 h。培養(yǎng)過程中在倒置顯微鏡下觀察各組生發(fā)卵泡破裂(GVBD)和第一極體(PB1)的形成情況,出現(xiàn)PB1的卵母細(xì)胞視為核成熟(MⅡ期)。2、激光共聚焦觀察有絲分裂紡錘體的形成。3、將出現(xiàn)PB1的卵母細(xì)胞進(jìn)行熒光染色,觀察皮質(zhì)顆粒的分布,判斷核成熟卵母細(xì)胞胞質(zhì)成熟情況。4、鏡下觀察MXC對(duì)卵丘擴(kuò)展的影響。 研究結(jié)果:1、培養(yǎng)24 h時(shí),甲氧滴滴涕各處理組與對(duì)照組卵母細(xì)胞GVBD發(fā)生率差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);培養(yǎng)過程中GVBD發(fā)生實(shí)驗(yàn)組較同期對(duì)照組也沒有明顯延遲。但是成熟率卻從71.2%(對(duì)照組)逐漸降低至22%(29μg/mL MXC組),7.25μg/mL MXC組(52.8%)和14.5μg/mL MXC組(44.4%)與對(duì)照組比較差別也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組MⅠ期紡錘體星體變小。3、MⅡ期卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒呈單層狀排布于細(xì)胞膜下的比例實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組差異不顯著(P0.05)。MXC對(duì)核成熟的卵母細(xì)胞胞質(zhì)成熟影響不明顯。4、MXC能抑制卵丘擴(kuò)展,且隨著MXC濃度的升高,卵丘擴(kuò)展程度明顯減弱。 研究結(jié)論:1、甲氧滴滴涕對(duì)小鼠卵母細(xì)胞的毒性作用,通過抑制卵母細(xì)胞胞核成熟,使小鼠卵母細(xì)胞成熟率明顯下降,從而使母體的受孕能力下降,導(dǎo)致不孕。2、甲氧滴滴涕可直接作用于卵母細(xì)胞,使卵母細(xì)胞有絲分裂紡錘體形成異常,從而抑制卵母細(xì)胞核的成熟。3、甲氧滴滴涕可能通過抑制卵丘細(xì)胞的擴(kuò)展,來影響后續(xù)胚胎發(fā)育,造成流產(chǎn)等。但對(duì)皮質(zhì)顆粒的分布影響不明顯,即甲氧滴滴涕不能抑制核成熟卵母細(xì)胞的胞質(zhì)成熟。 第二部分甲氧滴滴涕對(duì)小鼠卵母細(xì)胞體外受精和早期胚胎發(fā)育的影響 研究方法:1、將7.25和14.5μg/mL MXC組核成熟的小鼠卵母細(xì)胞行體外受精,觀察卵母細(xì)胞的受精能力。2、將受精卵吸出培養(yǎng),每日在顯微鏡下觀察胚胎發(fā)育情況,分析受精卵的2-細(xì)胞形成率、4-細(xì)胞形成率、8-細(xì)胞形成率、桑椹胚率、囊胚率和胚胎孵化率。3、選擇形態(tài)較好的囊胚進(jìn)行胚胎細(xì)胞染色計(jì)數(shù)。 研究結(jié)果: 1、7.25μg/mL MXC組與對(duì)照組小鼠受精卵的受精率,2-細(xì)胞形成率、4-細(xì)胞形成率、8-細(xì)胞形成率差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); 14.5μg/mL MXC組與對(duì)照組小鼠卵母細(xì)胞的受精率,2-細(xì)胞形成率、4-細(xì)胞形成率差別不明顯,但8-細(xì)胞期形成率在兩組間差異顯著(P0.05),且細(xì)胞停止于此期不再分裂。2、與對(duì)照組相比,7.25μg/mL MXC顯著降低小鼠囊胚形成和胚胎孵化(P0.05),結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、7.25μg/mL MXC與對(duì)照組囊胚期細(xì)胞數(shù)差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 研究結(jié)論:雖然甲氧滴滴涕對(duì)體外成熟的小鼠卵母細(xì)胞的受精率、2-細(xì)胞形成率的影響不明顯,但是卻能顯著降低囊胚的形成率和鼠胚孵化率,尤其是鼠胚孵化率下降明顯,從而導(dǎo)致流產(chǎn)和不良妊娠結(jié)局。
【圖文】：

小鼠卵母細(xì)胞鏡下形態(tài)變化

小鼠卵母細(xì)胞熒光標(biāo)記CG不同分級(jí)
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R363;R714

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本文編號(hào)：2691025