【摘要】： 銀屑病是一種具有多基因遺傳特性的疾病，其發(fā)病機(jī)理極其復(fù)雜。近年 來許多學(xué)者認(rèn)為T細(xì)胞的激活是銀屑病發(fā)病的中心特征。如銀屑病早期皮損 的組織學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，T細(xì)胞侵入皮膚促使表皮呈現(xiàn)銀屑病特征性的過度增殖。 臨床上皮質(zhì)類固醇、CsA、FK506等免疫抑制劑通過抑制T細(xì)胞的激活和細(xì)胞 因子的釋放而發(fā)揮明顯的治療作用。近年來有人用融合了毒素的IL-2清除被 激活的IL-2受體陽性T細(xì)胞群，從而使銀屑病過度增殖的表皮恢復(fù)到正常。 還有人發(fā)現(xiàn)抗CD_4單克隆抗體明顯改善銀屑病的癥狀。紫外線療法治療銀屑 病可能通過誘導(dǎo)T細(xì)胞亞群的凋亡實(shí)現(xiàn)。另一方面，激活的CD_4~+T細(xì)胞能夠 誘導(dǎo)移植給嚴(yán)重聯(lián)合性免疫缺陷（SCID）小鼠的銀屑病患者自體非皮損區(qū)皮 膚產(chǎn)生紅斑、鱗屑。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，從銀屑病皮損區(qū)分離獲得的T細(xì)胞 注入到銀屑病非皮損區(qū)后，可以引發(fā)銀屑病皮損形成，，而從銀屑病患者外周 血中獲得的T細(xì)胞則無此作用。以上結(jié)果提示：銀屑病皮損區(qū)存在特異性T 細(xì)胞被激活的現(xiàn)象，而其它來源的T細(xì)胞并不被激活，銀屑病的皮損是由激 活的特異性T細(xì)胞引發(fā)。 正常表皮角蛋白表達(dá)模式為：基底層主要由角蛋白K5/K14組成，基底層 以上部分由K1/K10組成。銀屑病表皮角蛋白的表達(dá)發(fā)生了明顯的變化，基底 層以上部分出現(xiàn)了小分子量的角蛋白，角蛋白K14較正常表皮呈現(xiàn)出過量的 表達(dá)，正常表皮所表達(dá)的角蛋白K1/K10被逐漸被代表過度增殖的角蛋白 K6/K16歷所代替，同時(shí)出現(xiàn)了K17的表達(dá)。K17的表達(dá)及K14表達(dá)量的增多被 第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文 認(rèn)為與銀屑病關(guān)系更為密切。銀屑病患者皮損區(qū)表達(dá)角蛋白K6、KI4、K16 及K17的現(xiàn)象提示在這些角蛋白中可能存在激活銀屑病特異性T細(xì)胞的自身 關(guān)鍵表位，并且極有可能是它們的同源保守序列中的某些表位在起作用。另 一方面，鏈球菌感染可引發(fā)點(diǎn)滴型銀屑病已為人所共知，而點(diǎn)滴型銀屑病可 發(fā)展成為慢性斑塊型銀屑病。M蛋白作為鏈球菌表面重要的致病性抗原，與 角蛋白在氨基酸保守序列區(qū)存在高度同源序列，目前的研究發(fā)現(xiàn)，用含有該 同源序列的人工合成肽能夠引起銀屑病皮損區(qū)特異性T細(xì)胞的激活，對(duì)銀屑 病具有積極的致病作用。 天然自身抗體＊aturl auoanibodyg NAA）是指在沒有任何抗原主動(dòng)免 疫的條件下，正常機(jī)體自覺產(chǎn)生的至少能與一種自身抗原反應(yīng)的免疫球蛋白， 它們往往識(shí)別進(jìn)化過程中處于自身抗原氨基酸高度保守序列區(qū)的具有交叉反 應(yīng)性的抗原表位。作為 NAA的成員之一，天然抗角蛋白自身抗體（AK auto Ah）理論上可識(shí)別角蛋白的位于高度保守序列區(qū)的多個(gè)表位，在這些表位中 也許含有可激活銀屑病特異性T細(xì)胞的關(guān)鍵表位。為了驗(yàn)證上述假設(shè)，我們 必須首先應(yīng)用一些實(shí)驗(yàn)手段獲得 AK auto Ah所識(shí)別的角蛋白表位。 表面呈現(xiàn)技術(shù)和隨機(jī)肽庫技術(shù)的發(fā)展，提供了廣泛研究抗原表位的空間。 噬菌體表面呈現(xiàn)的短肽不僅可供篩選線性表位，還能模擬不連續(xù)表位、糖基 化表位以及其他一些化學(xué)修飾肽，利用單克隆抗體可從隨機(jī)肽庫中篩選出相 應(yīng)的抗原或替代抗原位點(diǎn)。篩選的結(jié)果可用作鑒定單抗的結(jié)合位點(diǎn)，或篩出 某些有價(jià)值的保護(hù)性替代抗原，特別是可以搞清病原體關(guān)鍵抗原位點(diǎn)的結(jié)構(gòu) 和功能，為進(jìn)一步進(jìn)行短肽疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。目前，從人工合成或隨機(jī) 突變獲得的噬菌體肽庫中利用抗體已成功篩選出了多種病原體的抗原位點(diǎn)或 模擬抗原，井且已證明篩選出的抗原可以刺激動(dòng)物產(chǎn)生與原抗體相類似的抗 體，并獲得免疫保護(hù)。庫容量越大，篩選出陽性克隆的可能性就越大，相信當(dāng) 噬菌體庫容量足夠大時(shí)，任一種抗體均可從中篩選出其相應(yīng)抗原表位或模擬 表位。 3 第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文 本文選用噬菌體表面呈現(xiàn)肽庫技術(shù)及分子生物學(xué)的成熟技術(shù)對(duì) AK sllto Ah及1株抗人角蛋白單克隆抗體InAb 5G5進(jìn)行了三個(gè)方面的實(shí)驗(yàn)研究，下 面將逐一概述。 一、AK auo Ah所識(shí)別的角蛋白抗原表位的研究 AK－81．－－O－Ah作為天然自身抗體的成員之一，是存在于血清中的一種多克 隆抗體。本研究利用 AK auo Ah淘篩噬菌體遞呈的隨機(jī)肽庫，目的在于獲 得在體內(nèi)具有功能活性的角蛋白模擬表位。但由于 AK auo Ah滴度極低， 在血清抗體中所占的比例小，因而篩選這類抗體的相應(yīng)自身抗原表位難度非 常大。為了克服此困難，本實(shí)驗(yàn)選擇角蛋白與 Sepharose 4B耦聯(lián)，制備角蛋白
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號(hào)】：R750.2;R392.11

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2689395