發(fā)布時(shí)間：2020-05-30 22:52

【摘要】： 含砷化合物用于治療癌癥已有幾百年的歷史。自三氧化二砷（As_2O_3）成功地治療急性早幼粒白血�。ˋPL）以來(lái)，激起了人們對(duì)三氧化二砷及其相關(guān)化合物的廣泛研究，拉開(kāi)了世界范圍內(nèi)大量相關(guān)研究的序幕。除三氧化二砷外，其它已研究的砷化合物特別是有機(jī)胂如美拉胂醇、氧苯胂、甲基胂酸和二甲基胂酸等，雖然結(jié)果都表明可以誘導(dǎo)多種癌細(xì)胞凋亡，由于其毒性太大在臨床上是不可接受的，，因此探索結(jié)構(gòu)更為簡(jiǎn)單的、較低濃度下就可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，而對(duì)正常細(xì)胞無(wú)影響的新型有機(jī)胂藥物，意義重大。 含砷化合物除具有誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的作用外，我們的研究還發(fā)現(xiàn)一些含砷化合物具有象超氧化物歧化酶（SOD）一樣的作用，SOD是一種廣泛存在于生物體內(nèi)的金屬酶，它能催化超氧陰離子自由基O2·-發(fā)生歧化反應(yīng)，在防御生物體免受氧自由基損傷方面具有重要作用，有廣泛的應(yīng)用前景。但天然SOD普遍存在穩(wěn)定性差，分子量大，不容易透過(guò)細(xì)胞膜，且有免疫原性等缺點(diǎn)，使其應(yīng)用受到限制；所以SOD模擬物的研究成為廣泛關(guān)注的課題。 本文采用正交實(shí)驗(yàn)和方差分析，合成了一系列結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的、具有可誘導(dǎo)體外腫瘤細(xì)胞凋亡的新型脂肪族有機(jī)胂化合物（2—胂酸基乙酸、2—胂酸基乙酸甲酯和2—胂酸基乙酸乙酯），獲得合成它們的最佳條件，即反應(yīng)溫度為25℃、反應(yīng)時(shí)間為5個(gè)小時(shí)、三氧化二砷與鹵代酸的配比為1：1。同時(shí)合成了一系列具有模擬超氧化物歧化酶（SOD）活性功能的新型芳香族有機(jī)胂Schiff堿配體及其配合物（2-羥基苯甲醛縮鄰氨基苯胂酸、 2.4-二羥基苯甲醛縮鄰氨基苯胂酸和它們的銅（II）、鈷（II）鋅（II）配合物），通過(guò)元素分析、摩爾電導(dǎo)、紅外光譜及其電子光譜對(duì)它們的組成和結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。 與三氧化二砷相比，選擇脂肪族有機(jī)胂化合物中的2—胂酸基乙酸（ASAC），通過(guò)（1）MTT法觀察它們對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，確定了實(shí)驗(yàn)用藥的最佳濃度，（2）采用倒置顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，采用透射電鏡檢測(cè)凋亡小體，（3）采用PI染色流式細(xì)胞儀檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞凋亡峰和細(xì)胞周期的改變，（4）凝膠電泳觀察凋亡細(xì)胞DNA的“梯形”條帶等，觀察As_2O_3和ASAC體外對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721增殖的影響并探討其作用機(jī)制。結(jié)果表明： ------As_2O_3和ASAC明顯抑制人肝癌細(xì)胞SMMC-7721細(xì)胞增殖，抑制作用呈劑量依賴性和時(shí)間依賴性，且ASAC的抑制作用明顯強(qiáng)于As_2O_3，當(dāng)ASAC濃度為10-7mol.l-1時(shí)對(duì)正常血管內(nèi)皮細(xì)胞幾乎無(wú)毒副作用。 ------通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、流式細(xì)胞儀對(duì)DNA的測(cè)定及DNA凝膠電泳均證實(shí)，As_2O_3 WP=6 和ASAC均能誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡，在一定濃度范圍內(nèi)，凋亡率與As_2O_3和ASAC的作用時(shí)間呈依賴關(guān)系，且ASAC作用的效果更好。 采用NBT法，對(duì)各種芳香族有機(jī)胂Schiff堿配合物在不同濃度下的抗超氧陰離子自由基活性進(jìn)行了測(cè)定。測(cè)定結(jié)果表明： ----由于各配合物具有略有畸變的平面正方形構(gòu)型，使得在歧化O2·-的過(guò)程中，易于O2佟ソザ災(zāi)行睦胱擁鬧嵯蚺湮�，故均表现滁x锨康幕钚�。轻t(yī)蟂OD標(biāo)準(zhǔn)液活性強(qiáng)（同質(zhì)量濃度比較）。 ----一方面Cu(Ⅱ)自身價(jià)態(tài)變化能力強(qiáng)而使其具有一定的歧化O2·-活性，另一方面其特有的d9價(jià)電子結(jié)構(gòu)，使得銅配合物的活性最強(qiáng)。同時(shí)Cu(Ⅱ)配合物抑制率與濃度呈近對(duì)數(shù)變化關(guān)系。 ----配體共軛效應(yīng)能力越強(qiáng)，越有利于超氧離子的歧化，表現(xiàn)為2.4-二羥基苯甲醛縮鄰氨基苯胂酸類配合物的模擬SOD催化活性強(qiáng)于2-羥基苯甲醛縮鄰氨基苯胂酸類配合物。 ----對(duì)于不同金屬配合物，表現(xiàn)為銅（II）配合物最強(qiáng)，鈷（II）配合物次之，鋅（II）配合物最弱。
【圖文】：

SMMC-7721 細(xì)胞光學(xué)顯微鏡下的形態(tài)(10-7mol.l-1ASAC 作用 48h) 2細(xì)胞變圓 折光性減弱 變粗糙 貼壁性減弱 懸浮細(xì)胞更多tion of SMMC-7721 cells (treated with 10-6mol.l-1ASAC for and granulating, refraction weakened , more suspended c 部分圖片如圖 3.3-3.5 將 10-6mol.l-1As2O3和 10胞進(jìn)行 HE 染色 細(xì)胞核染色質(zhì)深染 聚集于核膜泡樣 小泡脫落形成含核小體片段的凋亡小體

對(duì)照組透細(xì)胞核完整核仁清楚Fig3.6Normalcell(transmissionaleleccellnucleusintegrity,nucleolusclarityamph
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號(hào)】：R313

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2688849