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ILizarov技術(shù)的實(shí)驗(yàn)與臨床研究及骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)化的條件

發(fā)布時(shí)間:2020-05-30 08:13
【摘要】: 目前,較大的骨缺損(創(chuàng)傷、腫瘤骨切除后),肢體不等長(zhǎng),身材矮小等疾病,是骨科治療的難點(diǎn)。以往多采用自體骨移植治療骨缺損,盡管技術(shù)成熟,但只適用于較小的骨缺損而且移植骨塊還存在再吸收和壞死等問(wèn)題。假體置換受到缺損部位的限制。因此,如何刺激骨生長(zhǎng)成為研究熱點(diǎn)。牽拉骨再生(distraction osteogenesis,DO)是骨干或干骺端截骨后、通過(guò)外固定器對(duì)截骨兩端進(jìn)行持續(xù)、緩慢、高頻牽拉,刺激骨形成的一種獨(dú)特方法。然而,由于長(zhǎng)期外固定器固定而引起許多并發(fā)癥如:針道感染、關(guān)節(jié)僵硬、馬蹄足、肌肉萎縮等。因此,如何促進(jìn)延長(zhǎng)骨愈合、縮短外固定時(shí)間、減少并發(fā)癥的發(fā)生成為亟待解決的問(wèn)題。為此我們開展了以下研究。 一、大鼠肢體延長(zhǎng)的動(dòng)物模型 目的:通過(guò)建立大鼠肢體延長(zhǎng)的動(dòng)物模型為將來(lái)能夠使用現(xiàn)代的免疫學(xué)、分子生物學(xué)技術(shù)研究延長(zhǎng)骨的愈合機(jī)理提供基礎(chǔ)。方法:12只成熟雄性大鼠下肢行微型環(huán)狀外固定器固定,脛骨骨干部位截骨,術(shù)后五天開始延長(zhǎng),2次/天、0.25mm/次、延長(zhǎng)12天,每周攝X片觀察。分別在不同階段處死動(dòng)物進(jìn)行組織學(xué)觀察。結(jié)果:所有動(dòng)物都安全度過(guò)麻醉、手術(shù)及延長(zhǎng)愈合期,外固定架對(duì)動(dòng)物未產(chǎn)生明顯的不良影響。有一只大鼠在鉆入遠(yuǎn)端克氏針時(shí)由于用力過(guò)大致脛骨遠(yuǎn)端骨折被排除,另外兩只針道處輕微紅腫,未引起嚴(yán)重感染數(shù)天后好轉(zhuǎn),五只大鼠出現(xiàn)小腿及足部水腫,未采取特殊處置一周后消退。X線片示截骨端對(duì)位、對(duì)線良好。結(jié)論:大鼠動(dòng)物模型優(yōu)于其它動(dòng)物更有利于從細(xì)胞水平、分子水平深入研究骨組織再生的機(jī)理。 二、FGF,1GF對(duì)體外培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)化的影響 川。m;;v拈木的丈驗(yàn)’。臨休川穴及卜*h增州似f化的妖什 小義摘蟄 目的 觀察堿性成纖雛細(xì)胞牛長(zhǎng)閃于兒FGF入 腆島素樣牛長(zhǎng) 岡于(IG)對(duì)體外培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)增殖、分化的影 響。方法3~6月齡的雄性SD大鼠處死后,取雙側(cè)股骨、勝骨的骨 髓進(jìn)行體外培養(yǎng)川 含有不同細(xì)胞因于的培養(yǎng)基分四組:IbFGF組; 11 IGF組;Ill bFGFHGF組;IV對(duì)照組(以上各組均含地塞米松、 尸-甘油磷酸鈉、維生素C、青霉素、鏈霉素人顯微鏡下觀察BMSC 的生長(zhǎng)特性,用MTT iL測(cè)得的細(xì)胞相對(duì)值繪制生長(zhǎng)曲線。采用改 良Gomori 氏鈣鈷法計(jì)數(shù)堿性磷酸酶(AL訃性率的細(xì)胞。結(jié)果 BMSC在傳代培養(yǎng)前兩大,各組的細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯變化,從第二至 八天,bFGF組、IGF組、bFGFHGF組的細(xì)胞數(shù)量均高于對(duì)照組, 并且旺GFn 組明顯高于其它三組。含細(xì)胞因子三組ALP”率均高 于對(duì)照組,bFGF+I(xiàn)GF組的陽(yáng)性率最高。結(jié)論bFGF、IGF者自促 進(jìn)BMSC增殖及向成骨細(xì)胞分化,并且兩者同時(shí)運(yùn)用憂于單獨(dú)使用, 結(jié)果表明bFGF、IGF在促進(jìn)BMS。增殖與分化時(shí)起協(xié)同作用。 三、骨髓基質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合膠原凝膠加速延長(zhǎng)骨愈合 目的 骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells,BMSc) 復(fù)合1型膠原凝膠k gel,CG)經(jīng)皮注射至延長(zhǎng)骨區(qū)促進(jìn)骨 愈合。方法動(dòng)物模型:雄性 S D大鼠 20只,體重 2503,按 Ilizarov 技術(shù)造成肢體延長(zhǎng)的動(dòng)物模型,雙側(cè)勝骨干截骨后安裝自行研制的 微型Ilizarov外固定器,術(shù)后5大開始延長(zhǎng)0.smm用,,分二次完成, 共延長(zhǎng) 12大。細(xì)胞培養(yǎng):取 3上月齡 S D雄性大鼠處死后,取雙側(cè) 股骨、勝骨剪斷股骨、腔骨的兩端,用注射器將骨髓沖出,含 15% 胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基在3 7℃,5%CO。條件下培養(yǎng)。動(dòng)物分組: 所有動(dòng)物隨機(jī)分為四組,每組5只門 側(cè)肢體人 在術(shù)后17大經(jīng)皮 注射。IBMSC組;HCG組;HIBMSC十CG組;W 空白對(duì)照組。 觀察內(nèi)容:不同階段的X線片,不同階段的組織學(xué)光、電鏡檢查。 結(jié)果第6s周的X線片見BMSC+CG組的骨頒量明顯多于其他組, 光、電鏡下見BMSC+CG組成骨細(xì)胞及骨細(xì)胞的數(shù)量多并且功能活 躍,破骨細(xì)胞出現(xiàn)時(shí)間早。結(jié)論BMSC+CG組對(duì)延長(zhǎng)區(qū)骨再生有促 * 弓 進(jìn)例I。 四、延長(zhǎng)骨的骨癡形態(tài)與并發(fā)癥之間的關(guān)系 目的研究延長(zhǎng)骨的不同X線形態(tài),及其在延長(zhǎng)過(guò)程中不同階 段的發(fā)展變化推斷出延長(zhǎng)骨的骨儷類型與并發(fā)癥之間的關(guān)系。方法 分祈一組 40例病人的 X線片,年齡 3叫 歲,平均 8.5歲,男 24例,女 16 例,均為 1990上00年間在我院行 Ilizarov技術(shù)肢體延長(zhǎng)術(shù)者。根據(jù) 延長(zhǎng)區(qū)骨儷的橫徑和低密度區(qū)或帶的出現(xiàn)分類。結(jié)果絕大多數(shù)骨儷 類型是均勻型無(wú)HA肥,術(shù)后五周時(shí),
【圖文】:

外固定器,克氏針,大鼠,江蘇常州


1材料和方法1.1外固定器自行設(shè)計(jì)的微型環(huán)狀外固定器(蘇州工業(yè)園區(qū)通達(dá)機(jī)械有限公司)生產(chǎn)。由兩個(gè)不銹鋼環(huán)和兩個(gè)螺棒組成(圖1),鋼環(huán):外徑35.Olnln、內(nèi)徑30.OTnln、厚度1.Slnfn、在環(huán)壁上每間隔2.5IT’irn有一直徑3.Zlnln的圓孔(用以固定克氏針及安裝螺棒),螺棒:直徑2.Slnln、長(zhǎng)40.Ofnm,克氏針0.8二(江蘇常州康輝醫(yī)療器械廠)。、一/夕廠三圖1自行研制的微型外固定器圖2SD大鼠外觀像(外固定解除前)1.2手術(shù)方法選用健康3一5月齡雄性SpragueDawley(SD)大鼠,

外固定,外觀,大鼠,肢體延長(zhǎng)


肢體延長(zhǎng)的動(dòng)物模型多選用狗〔6)、兔(7’、羊‘8,、小豬(micropig)‘9,等,最近,在國(guó)外有嚙齒類動(dòng)物被用于實(shí)驗(yàn)的報(bào)道〔’。’,此次研究的目的是建立肢體延長(zhǎng)的大鼠模型以便使用現(xiàn)代的免疫學(xué)、分子生物學(xué)技術(shù)甚至將來(lái)運(yùn)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究特定基因(SpeCifiCgene)在再生骨組織中的作用及延長(zhǎng)骨愈合的機(jī)理,大鼠模型是實(shí)用、便利、經(jīng)濟(jì)有廣闊應(yīng)用前景的肢體延長(zhǎng)模型。1材料和方法1.1外固定器自行設(shè)計(jì)的微型環(huán)狀外固定器(蘇州工業(yè)園區(qū)通達(dá)機(jī)械有限公司)生產(chǎn)。由兩個(gè)不銹鋼環(huán)和兩個(gè)螺棒組成(圖1),鋼環(huán):外徑35.Olnln、內(nèi)徑30.OTnln、厚度1.Slnfn、在環(huán)壁上每間隔2.5IT’irn有一直徑3.Zlnln的圓孔(用以固定克氏針及安裝螺棒),螺棒:直徑2.Slnln、長(zhǎng)40.Ofnm,克氏針0.8二(江蘇常州康輝醫(yī)療器械廠)。
【學(xué)位授予單位】:蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2002
【分類號(hào)】:R329

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