【摘要】：丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是非甲非乙型肝炎的主要致病原，全世界至少有1億7千萬患者。HCV感染者預(yù)后差，大多數(shù)會發(fā)展成慢性肝炎、肝硬化和肝癌。研究HCV的發(fā)病機(jī)理和研制出有效的疫苗是丙型肝炎研究中亟待解決的問題。為此本課題主要從以下兩個方面進(jìn)行研究：一是研究HCV NS3區(qū)基因變異和細(xì)胞毒T細(xì)胞表位改變在HCV感染中的作用；二是尋找相對保守的T細(xì)胞表位和初步研究基因免疫在HCV感染防治中得作用，為丙型肝炎的防治打下基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)包括以下五個部分： 1、丙型肝炎病毒NS3區(qū)C末端基因變異的動態(tài)研究 動態(tài)測定了2名慢性HCV感染者(編號291和681)5年3個時間點(diǎn)和3年2個時間點(diǎn)HCV NS3區(qū)C末端基因序列和1例HCV轉(zhuǎn)陰的患者(編號681)的序列，每個時間點(diǎn)測定5個克隆，共測定30個克隆。研究發(fā)現(xiàn)HCV NS3區(qū)C末端基因變異有以下特點(diǎn)：(1)患者所測序列中，核苷酸序列高度保守，，序列中核苷酸序列完全一致的大于89％。與參考序列比同源性大于92％。同一個體同一個時間點(diǎn)核苷酸同源性大于96％。(2)氨基酸序列也高度保守，同源性與核苷酸基本一致，無插入、缺失等突變，僅在一個序列中出現(xiàn)一個終止密碼。絲氨酸蛋白酶的切割位點(diǎn)也未發(fā)生改變，說明丙型肝炎病毒NS3區(qū)基因在病毒加工和復(fù)制中的重要性。(3)進(jìn)化樹分析，291患者克隆分布呈相互交織狀態(tài)，無明顯的優(yōu)勢克隆存在，941患者的序列體現(xiàn)優(yōu)勢克隆逐漸轉(zhuǎn)化的趨勢。 2、丙型肝炎病毒NS3區(qū)C末端CTL應(yīng)答的研究 動態(tài)分析丙型肝炎病毒NS3蛋白C末端細(xì)胞毒T細(xì)胞表位的長期演變規(guī)律。用血清學(xué)方法檢測患者的HLA分型，并以此為依據(jù)，預(yù)測了HLA-A2和HLA-A11限制的CTL表位，分析了CTL表位的改變。合成了一個預(yù)測的HLA-A11限制的表位IILTHPVTK，用T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和ELISPOT實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證序列是否為CTL識別的表位。結(jié)果表明：(1)預(yù)測的NS3蛋白C末端HLA-A2限制的細(xì)胞毒T細(xì)胞表位有22個，HLA-A11限制的細(xì)胞毒T細(xì)胞表位有11個。(2)5年和3年內(nèi)預(yù)測的HLA-A2和HLA-A11限制的CTL表位在2例慢性患者都未發(fā)生明顯改變。HCV轉(zhuǎn)陰患者的序列中，HLA-A2限
【圖文】：

圖2螺旋酶基因的擴(kuò)增二、NS3區(qū)序列測定和分析將陽性菌落擴(kuò)增和純化后，用載體上引物進(jìn)行測序。結(jié)果見圖2，圖3，圖4。GCGCCAAPTGCATCCIGGGGACCTTCASACCTGCGATTGLGACDAAGKGCGAGCGATCCSGAGETGCATCACGGCCTACTCCCAACAGACCCGG喘CTTA1TAY5QQTRGLATCGCTAGCCTCACAGGCCGAGACAAGAACCAG1A5LTGRDKNQGTTCAAGTGGTCTCCACCGCAACAC
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：1999
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 畢勝利,白憲鶴,叢勉爾,田厚文,孫得貴,H.S.Margolis,劉崇柏;中國人丙型肝炎病毒基因組的一級結(jié)構(gòu)及其變異[J];病毒學(xué)報;1993年02期

2 汪濤,郭華章,王海濤,金伯泉;丙型肝炎特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞及其免疫應(yīng)答的研究進(jìn)展[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1998年04期

本文編號：2687557