【摘要】：念珠菌是臨床重要的條件致病菌，主要包括白色念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌等，占深部念珠菌感染的90％以上。由于艾滋病、白血病、腫瘤、粒細胞減少癥、器官移植等免疫缺陷或低下患者日益增多，大量使用廣譜抗生素、癌癥的放療、化療、免疫抑制劑、類固醇藥物等使患者機體的防御功能降低，合并深部念珠菌感染不斷增加。氟康唑等抗真菌藥物的廣泛使用，使念珠菌屬的耐藥性日益嚴重。臨床抗真菌藥品種有限，念珠菌獲得性耐藥發(fā)展快，常出現交叉耐藥，嚴重危及病人生命。 念珠菌對唑類藥物的耐藥機制包括：藥物靶酶的變化及藥物外排泵的過度表達。C-14去甲基酶(ERG11)是唑類藥物在真菌細胞內作用的靶酶，是麥角固醇(念珠菌細胞膜重要成分生物)合成途徑不可缺少的代謝酶，念珠菌在唑類抗真菌藥物的選擇壓力下，由于靶酶基因編碼區(qū)發(fā)生突變，引起酶活性區(qū)氨基酸變化和酶三維結構發(fā)生改變，導致酶與藥物的親和力及粘附度降低，使得真菌細胞內藥物不能有效抑制C-14去甲基酶的催化活性而耐藥；或靶酶基因調控區(qū)和(或)相應的調節(jié)基因發(fā)生改變，靶酶基因過度表達，產生大量的靶酶，細胞內藥物濃度不能完全抑制靶酶的活性而耐藥。多數念珠菌耐藥的主要原因是細胞內藥物累積量下降。這一變化與多種外排泵基因的過度表達相關。外排泵能將細胞內的藥物泵出胞外，導致細胞內藥物濃度降低，不能有效抑制念珠菌的生長。念珠菌與唑類藥物相關的外排泵基因主要有兩大類：一類為ATP結合盒轉運子家族(ATP binding cassette transporter)如cdr1、cdr2等基因；另一類是主要易化子超家族(major superfacilitater)的多重耐藥基因mdr1。 近年來，國內深部真菌感染日益增多，加強深部真菌感染的預防和監(jiān)控， 天津醫(yī)科大學博士研究生學位論文 進行深部真菌感染流行病學研究，深入探討真菌耐藥機制已刻不容緩。本研 究以2002年度從天津市5家三級甲等醫(yī)院分離的深部念珠菌臨床株著手，分 析其臨床資料，探討了對常見病原念珠菌快速、準確的臨床基因診斷方法， 對收集的白色念珠菌進行基因分型研究，為臨床深部念珠菌感染的基因診斷、 分子流行病學研究奠定基礎。并初步探討了耐氟康哇熱帶念珠菌臨床株Fc30 的耐藥機制。 第一部分天津地區(qū)深部念珠菌感染臨床株分析 目的:了解天津地區(qū)深部念珠菌感染的特點，分析深部念珠菌感染的危 險因素及耐藥特征，，為合理使用抗生素提供依據。 方法:從天津地區(qū)的5家大型醫(yī)院收集2002年5月一11月的深部念珠菌 感染臨床分離株，應用WHOnets軟件分析念珠菌臨床分離株的特點，采用 微量肉湯稀釋法測定它們對多種抗真菌藥物的敏感性。 結果:2002從天津地區(qū)共分離深部感染念珠菌53株。白色念珠菌最多 占47.17%，其次為熱帶念珠菌26.42%。深部念珠菌感染以肺部感染為主占 69.81%:老年患者居多54.72%;患者均有基礎疾病;抗生素、激素的大量使 用、各種侵入性操作及免疫功能低下等是重要危險因素。念珠菌對酮康哇、 5一氟胞啼咤敏感性高，無耐藥;白色念珠菌、熱帶念珠菌對氟康哇敏感率分 別為100%、92.9%，但光滑念珠菌、克柔念珠菌敏感率較低分別是62.5%、40%。 四種念珠菌均對兩性霉素B不同程度存在耐藥，敏感率分別是白色念珠菌 84%、熱帶念珠菌64.3%、光滑念珠菌75%、克柔念珠菌60%。 結論:念珠菌是臨床重要的條件致病菌，免疫力低下是深部念珠菌感染 的重要原因，必須重視院內深部念珠菌感染的預防和監(jiān)控。氟康哇仍是早期 經驗性治療深部念珠菌感染及預防用藥的最佳選擇。 天津醫(yī)科大學 博士研究生學位論文 第二部分常見深部念珠菌感染的快速基因診斷、白色念珠菌 基因分型及與耐藥表型的關系 目的:研究常見病原念珠菌快速、準確的基因診斷方法，為臨床深部 念珠菌感染的分子診斷奠定基礎。建立白色念珠菌的基因分型方法，觀察 不同基因型藥敏變化，為白色念珠菌分子流行病學研究奠定基礎。 方法:收集常見深部念珠菌感染臨床株，應用多重PCR技術擴增念珠 菌rDNA的內部轉錄間隔區(qū)ITSI一ITSZ，根據PCR產物片段的大小進行快速 基因鑒定。采用PCR方法擴增白色念珠菌285 rDNA基因內含子區(qū)，以內含 子大小及其中可轉座I型內含子片段的缺失或插入作為分型依據。采用微 量肉湯稀釋法對不同基因型白色念珠菌進行藥敏分析。 結果:(1)53株常見院內感染念珠菌依據多重PCR電泳圖譜分五型: 熱帶念珠菌14株:單一條帶，大小350飾。白色念珠菌25株:2條帶，150bp 和550bp。8株光滑念珠菌:單一條帶，大小90Obp�？巳崮钪榫�5株:單 一條帶，大小550bp。乳酒念珠菌1株:單一條帶，大小700bp。常見病原 性細菌如:金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸桿菌等經PCR擴增均無 產物。快速多重引物PCR診斷結果與常規(guī)生化鑒定一致，檢出率10既，無 假陽性。(2)臨床分離的25株白色念珠菌經PCR方法分為三型:A型12 株(450bp)，B型10株(840bp)，C型3株(450bp、840bp)。A、B型為 主要基因型，其藥敏結果差異并不顯著。 結論:此多重PCR快速基因診斷方法簡單、快速靈敏、特異性強、重 復性好，有助于臨床早期快速
【圖文】：

真菌在哇類抗真菌藥的選擇壓力下，藥物靶酶基因可能發(fā)生改變，使耐藥菌成為藥物環(huán)境下的優(yōu)勢菌。與靶酶基因相關的耐藥機制主要有:A.由于靶酶基因編碼區(qū)發(fā)生突變(見圖2)，引起酶活性區(qū)氨基酸變化和酶三維結構發(fā)生改變，導致酶與藥物的親和力及粘附度降低，使得真菌細胞內藥物不能有效抑制C一14去甲基酶的催化活性而耐藥;B.靶酶基因調控區(qū)和(或)

細胞內的藥物泵出胞外，導致細胞內藥物濃度降低，不能有效抑制念珠菌的生長。念珠菌與哇類藥物相關的外排泵基因主要有兩大類:一類為ATP結合盒轉運子家族(ATPbindingeassettetransporter)如edr(見圖3)、pdh等基因;另一類是主要易化子超家族(majOrfaCilitaters叩erfamily)的多重耐藥基因mdrl(見圖4)。圖3:ABC轉運子典型結構圖4:MDRI外排泵念珠菌對哇類藥物高度耐藥通常是多種耐藥機制共同作用的結果。Miyazaki〔4e]對從A工Ds病人口腔念珠菌病分離的2株高耐氟康哇念珠菌進行研
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R379

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本文編號：2683308