【摘要】：本論文的創(chuàng)新點(diǎn)：通過(guò)不同試驗(yàn)方法體外獲得親和力提高的新型抗人TNF-α 嵌合抗體，并保持抗體的中和功能不變；建立基于抗原抗體相互識(shí)別的立體結(jié)構(gòu) 信息預(yù)測(cè)判斷抗體親和力及抗原識(shí)別位點(diǎn)的新方法；嘗試在計(jì)算機(jī)模建基礎(chǔ)上， 通過(guò)定點(diǎn)突變進(jìn)一步提高抗體親和力。 人腫瘤壞死因子α(hTNFα)是一種由單核、巨噬、T淋巴、中性粒、肥大或 內(nèi)皮細(xì)胞分泌產(chǎn)生的細(xì)胞因子，可介導(dǎo)多種生物學(xué)活性。當(dāng)hTNF-α在體內(nèi)的大量 產(chǎn)生和釋放可引起機(jī)體免疫平衡失調(diào)，并可與其它炎癥因子一起產(chǎn)生多種病理?yè)p 傷，例如惡病質(zhì)和敗血癥休克所致的多器官功能衰竭、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、關(guān)節(jié) 強(qiáng)直性脊柱炎(AS)、多發(fā)性硬化癥(MS)、炎癥性腸病(IBD)、移植物抗宿主病 (GVHD)和骨髓造血紊亂綜合癥(MDS)等多種疾病。因此，通過(guò)應(yīng)用中和hTNF-α 活性的抗體，可阻斷因hTNF-α水平異常增高導(dǎo)致的機(jī)體病理性損傷，最終達(dá)到對(duì) 疾病的有效治療目的。美國(guó)Centocor公司研制生產(chǎn)的抗hTNF-α嵌合抗體(商品名 Remicade(？))，美國(guó)FDA、歐盟和日本相繼已批準(zhǔn)用于RA、結(jié)腸Crohn病和AS 的臨床治療。 本研究組于上世紀(jì)八十年代已經(jīng)制備得到抗hTNFα鼠源單克隆抗體(McAb) Zd12，具有中和hTNFα細(xì)胞毒性功能，其親和力在Ka=8×107L／mol。在其人源化過(guò) 程中，抗體的親和力有顯著地降低。本課題借助鏈替換(Chain Shuffling)方法，以 鼠源抗體Z12為母本，，通過(guò)噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)親和篩選，借助計(jì)算機(jī)合理設(shè)計(jì)獲 得高親和力嵌合抗體CH22，以期達(dá)到在保持抗體中和活性的同時(shí)顯著提高抗體親 和力的目的。同時(shí)借助計(jì)算機(jī)模建得到的抗原(hTNF-α)與抗體(CH22) 相互作 中文摘要 用的立體結(jié)構(gòu)信息，通過(guò)點(diǎn)突變得到新的人源化抗體，進(jìn)一步提高抗體親和力和 抗體中和活性。通過(guò)以上研究，獲得抗hTNF一a高親和力嵌合抗體，與212比較親 和力最高提高750倍，比Remicad姻親和力提高6倍:其識(shí)別hTN下一a功能表位不 同于Remicad礴，但中和hTNF一a活性能力與Renticad洲匆相同。嵌合抗體CH22與 已公開(kāi)發(fā)表的抗體均有所不同，具有獨(dú)立知識(shí)產(chǎn)權(quán)，此方面研究申請(qǐng)一項(xiàng)發(fā)明專(zhuān) 利。
【圖文】：

DNA重組等[361。其最主要的核心技術(shù)是噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)[3v〕。噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)能夠有效的將基因型和表型有機(jī)的統(tǒng)一起來(lái)，通過(guò)擴(kuò)增一篩選一再擴(kuò)增的循環(huán)過(guò)程(見(jiàn)圖1)[38】，最終獲得高親和力抗體基因序列，并用于進(jìn)一步的試驗(yàn)研究。

Rr-PcR擴(kuò)增得到抗體基因文庫(kù)
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王乃東;袁安文;薛立群;;鏈替換技術(shù)提高噬菌體抗體親和力的研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2010年08期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 王乃東;鼠源性高親和力H-Y噬菌體Fab抗體的篩選與早期胚胎性別鑒定[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2683272