【摘要】：生物芯片是通過平面微細加工與生物分子的自組裝技術相結合,在固體基片上組裝成數(shù)目眾多的不同生物分子微陣列,以實現(xiàn)對目標DNA、RNA或蛋白質(zhì)分子信息的大規(guī)模檢測。這種技術被認為是生命科學研究中的高效工具,因而成為目前國內(nèi)外科學技術發(fā)展的熱點。蛋白質(zhì)免疫檢測型芯片有別于一般的DNA芯片檢測技術,其原理主要是基于抗原與抗體的特異結合反應來設計的,所測目的分子僅有結構上的專一性,而無序列特異性。本文在分離制備多種生物大分子的基礎上,采用分子組裝技術,探索出一種新型的適用于不同生物分子偶聯(lián)的固相載體,即經(jīng)氧化與化學修飾處理的瓊脂糖凝膠基片,成功地在其表面制作了抗原與抗體分子微陣列,建立了3種不同免疫檢測模式,包括直接模式、間接模式和雙抗體夾心模式,可敏感特異檢出抗原、抗體分子及酶與底物之間的相互作用;同時采用辣根過氧化物酶-二氨基聯(lián)苯胺-雙氧水(HRP-DAB-H_2O_2)、膠體金-硝酸銀-對苯二酚和熒光素3種不同示蹤劑作為蛋白質(zhì)與抗原分子微陣列的信號顯示系統(tǒng),均取得了較好的效果。經(jīng)初步對臨床疾病標本的研究發(fā)現(xiàn),本法制作的蛋白質(zhì)與抗原分子微陣列用于自身抗體的檢測表現(xiàn)出較好的方法學穩(wěn)定性和重復性,與ELISA測定結果有較好的一致性,并具有操作簡便、結果特異、實驗條件易于控制、所需樣本和試劑用量小等特點,對于實現(xiàn)高通量的生物分子檢測具有重要的意義。 本論文的主要研究工作 1.利用生物化學、免疫學和分子生物學技術,具體的實施方法包括用飽和硫酸胺鹽析、差速離心、凝膠色譜分析(分子篩、硅膠柱層析和親和色譜)、薄層層析技術、聚丙烯酰胺凝膠電泳和瓊脂糖凝膠電泳對待分離的組分進行分離純化。制備了10余種不同的生物大分子抗原探針(包括蛋白質(zhì)、DNA和磷脂分子等),同時就有關自身抗體的檢測方法、生物大分子抗原(主要為蛋白質(zhì))的一般理化特性、分離純化原則和基本的實驗技術進行了討論。這些自身抗原分別是甲狀腺球蛋白(TG)、甲狀腺過氧化物酶(TPO)、肌紅蛋白(Mb)、肝特異性細胞膜脂蛋白(LSP)、ENA抗原、精子膜抗原(SmAg)、熱聚合兔IgG(AgRIgG)、子宮內(nèi)膜抗原(EmAg)、人卵巢抗原(O-Ag),心磷脂,dsDNA和ssDNA
【學位授予單位】：東南大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：R392

【參考文獻】

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1 虞偉,孫永康,廖建輝,張海黔,顧寧,武建國;紫外線輻照聚苯乙烯微孔板用于酶免疫測定的研究與表征[J];生物化學與生物物理進展;2002年03期

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本文編號：2683218