【摘要】：當(dāng)人體細(xì)胞處在“升溫”(＞37℃)的條件下，即受到熱休克或稱熱應(yīng)激的影響�！盁帷弊鳛橐环N外界物理誘導(dǎo)物，經(jīng)細(xì)胞表面受體或通過其他方式的介導(dǎo)，將信息傳入核內(nèi)，從而調(diào)節(jié)基因的特異性表達(dá)。熱休克與細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。在臨床上已將局部熱療作為某些腫瘤治療或放療的輔助手段。但細(xì)胞熱應(yīng)激的本質(zhì)及機(jī)理尚有待揭示。 熱休克蛋白家族成員中的分子量為90kD的熱休克蛋白(Hsp90)是真核細(xì)胞中最豐富的蛋白質(zhì)之一。Hsp90能使在熱休克等應(yīng)激反應(yīng)中積累的誤折疊蛋白再折疊，并可促進(jìn)已變性的蛋白質(zhì)降解。Hsp90還參與激素受體、其他轉(zhuǎn)錄因子、信號途徑和翻譯起始階段的激酶及一氧化氮合酶的成熟、胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)和活性調(diào)節(jié)。因此Hsp90在真核細(xì)胞中有著廣泛而重要的功能。但迄今為止鮮見關(guān)于Hsp90在熱休克誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中功能研究的報(bào)道。 本論文首先對熱休克誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞凋亡的條件進(jìn)行了研究，包括不同的熱休克溫度及熱休克時(shí)間誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的情況。在此基礎(chǔ)上觀察了持續(xù)性熱休克、短時(shí)間熱休克及恢復(fù)過程對細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白及Hsp90表達(dá)的影響；用cDNA點(diǎn)陣分析的方法研究了熱休克引起的基因表達(dá)譜的變化以及Hsp90功能的抑制劑格爾德霉素geldanamycin(GA)對熱休克后基因表達(dá)譜的影響。然后研究了GA在熱休克誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中的作用。最后應(yīng)用反義基因表達(dá)技術(shù)，建立了內(nèi)源性Hsp90β低表達(dá)的細(xì)胞株，并對Hsp90在熱休克誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制進(jìn)行了初步的探討。 1．不同熱休克條件對Jurkat細(xì)胞凋亡的影響 42℃熱休克1h沒有造成明顯的細(xì)胞凋亡，而42℃熱休克2h多聚核糖腺苷二磷酸聚合酶(PARP)蛋白出現(xiàn)明顯的斷裂，熱休克后恢復(fù)過程中亞二倍體細(xì)胞逐漸增多，DNAladder逐步明顯。45℃熱休克15min后恢復(fù)過程中同樣出現(xiàn)上述現(xiàn)象。說明42℃熱休克2h和45℃熱休克15min可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并且45℃15min比42℃2h更為強(qiáng)烈地誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
【圖文】：

圖l不同熱休克條件誘導(dǎo)PARP斷裂的Wesetm印跡檢測結(jié)F191CleavgaeofAPRPindueedbyheatshoeknaalyzedbywerPanel:Heatshoekat42Coofro，05，l，，2，3，4，6herPnael:Recoverofro，4，8，12hrfomheatshoekat42，CofrZhna

C15min及42℃Zh熱休克后不l司恢復(fù)時(shí)間(hr)Jurkat細(xì)胞基f天}組DNAr包泳圖譜nomieDNAeleetroPhoretogramofjurkateellsduringtrfomheatshoekat45℃1sminand42℃Zh凋亡相關(guān)分子表達(dá)的影響導(dǎo)對凋亡相關(guān)分子表達(dá)的影響能通過那些凋亡相關(guān)分子影響Jurkat細(xì)胞發(fā)生胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。42℃持續(xù)熱休sissuseeptibility)、Fasligand、TIAR、Bel一2、4)。IeH一IL(proeaspase一2)和Cpp32(proeaspP和FADD蛋白的表達(dá)逐漸減少(Fgi.5)。提示于細(xì)胞壞死，溶酶體破裂釋放大量蛋白酶造
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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2 李忠浩;熱應(yīng)激對荷斯坦奶牛外周血淋巴細(xì)胞凋亡與抗氧化特性的影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

本文編號：2674107