【摘要】：組織移植是整形外科常用的治療手段之一。目前整形外科臨床 應(yīng)用最多的是自體組織移植，但自體組織存在來源有限、損害供區(qū)、 增加患者痛苦等不足。異體（種）組織來源廣泛，取材方便，形狀 逼真，但免疫排斥反應(yīng)的存在使其在整形外科的臨床應(yīng)用受到極大 的限制。 既往的研究表明，異體組織移植排斥反應(yīng)的發(fā)病機(jī)理主要為T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。盡管免疫抑制劑能夠降低T淋巴細(xì)胞活 性，但應(yīng)用后常常造成全身免疫狀態(tài)低下、易發(fā)生感染等危險(xiǎn)。因 此，如能單純消除移植物周圍局部浸潤激活的T淋巴細(xì)胞，則能在 不損害全身免疫狀態(tài)的情況下使移植物免受排斥反應(yīng)而存活。近年 來對免疫赦免的研究結(jié)果為這一設(shè)想的實(shí)現(xiàn)帶來了曙光。 人們很早就發(fā)現(xiàn)人體內(nèi)存在著一些免疫赦免區(qū)如眼球、睪丸及 腦組織等。近來的研究發(fā)現(xiàn)這些部位的組織均能表達(dá)FasL，很可能 通過Fas/FasL途徑誘導(dǎo)Fas~+的T淋巴細(xì)胞凋亡，從而形成局部無淋 巴細(xì)胞浸潤的免疫赦免環(huán)境。在睪丸組織中睪丸足細(xì)胞持續(xù)表達(dá) FasL。 上述研究結(jié)果啟發(fā)人們能夠應(yīng)用FasL 或睪丸足細(xì)胞保護(hù)異體 （種）組織移植物，使移植物免受排斥反應(yīng)的侵害，延長其在受體 內(nèi)的存活。雖然目前對FasL保護(hù)異體（種）移植物的作用尚存有爭 議：1、FasL延長異體（種）移植物在受體內(nèi)的存活，2、FasL作為 前炎性分子，吸引并激活粒細(xì)胞，加劇而不是抑制移植排斥反應(yīng)的 發(fā)生，但動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果卻都顯示睪丸足細(xì)胞與異體細(xì)胞混合移植， 延長了移植細(xì)胞在受體內(nèi)的存活。然而對睪丸足細(xì)胞在此過程中的 具體作用機(jī)制及調(diào)控因素尚未完全闡明。 2 第二軍醫(yī)人學(xué)慚卜論義 中義摘要－3－ 本研究的目的是： 1．觀察體外條件下睪丸足細(xì)胞對成熟T淋巴細(xì)胞凋亡的影響。 2．探討睪丸足細(xì)胞誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞凋亡的具體機(jī)制。 3．深入了解FasL在睪丸足細(xì)胞誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞凋亡過程中的作用。 4．探討應(yīng)用FasL及睪丸足細(xì)胞保護(hù)異體（種）移植物的可行性， 為應(yīng)用翠丸足細(xì)胞及FasL保護(hù)異體（種）移植物的在體研究及 臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 本研究包括以下主要內(nèi)容： 一、體外聯(lián)合培養(yǎng)條件下小鼠暈丸足細(xì)胞對成熟T淋巴細(xì)胞影響的 研究 目的：探討體外聯(lián)合培養(yǎng)條件下小鼠睪丸足細(xì)胞對成熟T淋巴 細(xì)胞凋亡的影響。方法：用TUNEL標(biāo)記，核酸電泳、電鏡、流式細(xì) 胞術(shù)檢測對照組廠淋巴細(xì)胞卜A組廠淋巴細(xì)胞＋培養(yǎng)睪丸足細(xì)胞24 h培養(yǎng)上清卜 B組廠淋巳細(xì)胞＋睪丸足細(xì)胞乃組中小鼠成熟 T淋巴 細(xì)胞的凋亡及其量的變化。結(jié)果：3組細(xì)胞電鏡下均可見部分細(xì)胞染 色質(zhì)濃集，成塊狀或環(huán)狀位于核膜內(nèi)側(cè)，核固縮，，凋亡小體形成； TUNEL標(biāo)記見部分細(xì)胞核染色呈深藍(lán)色；核酸電泳均出現(xiàn)典型DNA 梯狀帶（ladder）：流式細(xì)胞術(shù)檢測 A、B兩組 T淋巴細(xì)胞凋亡量均 明顯高于對照組u＜0刀1XB 組T淋巴細(xì)胞凋亡量顯著高于A組 （尸＜0刀1）。 二、暈丸足細(xì)胞體外誘導(dǎo)成熟T淋巴細(xì)胞凋亡時(shí)FasL作用的研究 目的：研究 FasL在睪丸足細(xì)胞誘導(dǎo)成熟 T淋巴細(xì)胞凋亡過程中 的具體作用。方法：設(shè)計(jì)正義、反義及錯(cuò)配引物阻斷宰丸足細(xì)胞FasL 3 第＿軍匝人學(xué)助1：論義 中義摘要－4－ 的表達(dá)，建立轉(zhuǎn)染FasL基因井持續(xù)表達(dá)的小鼠表皮細(xì)胞株，運(yùn)用原 位雜交、免疫組化、Western blot 等檢測上述細(xì)胞及其培養(yǎng)上清中 FaSL的表達(dá)，運(yùn)用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測上述細(xì)胞與成熟 T淋巴細(xì)胞 混合培養(yǎng)后T淋巴細(xì)胞凋亡率的差異。結(jié)果：翠丸足細(xì)胞及其培養(yǎng) 上清中均有FasL的表達(dá)，轉(zhuǎn)染FasL基因的表皮細(xì)胞有FasL的表達(dá)， 但其培養(yǎng)上清中則未檢測到FasL蛋白的表達(dá)，反義引物作用后在睪 丸足細(xì)胞及其上清中基本檢測不到FasL；轉(zhuǎn)染與未轉(zhuǎn)染的表皮細(xì)胞 誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞凋亡量無明顯區(qū)別（尸＞0刀5），經(jīng)反義引物作用后睪 丸足細(xì)胞誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞凋亡量顯著減少（P＜0刀1）。 結(jié) 論： 1．體外條件下睪丸足細(xì)胞能夠誘導(dǎo)成熟T淋巴細(xì)胞凋亡。 2．FasL是睪丸足細(xì)胞體外誘導(dǎo)成熟T淋巴細(xì)胞凋亡過程中的主要因 素但不是唯一因素；睪丸足細(xì)胞主要是由于表達(dá)FasL從而誘導(dǎo)表達(dá) Fas的成熟T淋巴細(xì)胞凋亡，這可能是形成睪丸免疫赦免的主要機(jī)制。 3．轉(zhuǎn)染有FasL基因并持續(xù)表達(dá)的細(xì)胞不能有效地誘導(dǎo)成熟T淋巴 細(xì)胞凋亡；FasL誘導(dǎo)成熟 T淋巴細(xì)胞凋亡尚需其它蛋白的協(xié)同作用； 單純轉(zhuǎn)染FasL基因尚不能使同種異體移植物免受排斥反應(yīng)的損害。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2000
【分類號(hào)】：R392.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 時(shí)玉舫,張莉英,王若翔;Fas和FasL:免疫細(xì)胞的自殺和謀殺[J];上海免疫學(xué)雜志;1997年04期

本文編號(hào)：2669154