【摘要】： 毒力島（pathogenicity island，PAI）是近幾年細(xì)菌學(xué)領(lǐng)域出現(xiàn)的一 個(gè)新概念，它存在于許多細(xì)菌中，可能與新病原菌的出現(xiàn)和細(xì)菌毒力的 進(jìn)化有關(guān)。其中耶爾森菌屬的強(qiáng)毒力島（high pathogenicity island，HPI）編 碼鐵載體耶爾森桿菌素介導(dǎo)的鐵攝取系統(tǒng)，是決定小鼠毒力必不可少的 遺傳單元。最近，，在部分致瀉性大腸桿菌染色體上發(fā)現(xiàn)了HPI的存在。 但HPI在致瀉性大腸桿菌中的結(jié)構(gòu)、功能仍不清楚。鑒于次，本文著重 從以下三個(gè)方面對(duì)致瀉性大腸桿菌中的HPI進(jìn)行了研究。 一、94株腸產(chǎn)毒性大腸桿菌中耶爾森菌HPI的檢測(cè) 采用PCR及DNA打點(diǎn)雜交方法，檢測(cè)了94株腸產(chǎn)毒性大腸桿菌 （enterotoxigenic E.coli，ETEC）中國(guó)分離株中的HPI基因，發(fā)現(xiàn)HPI 存在于14％（13/94）的菌株中，且均插入在染色體的asnT tRNA位點(diǎn)。 通過(guò)測(cè)序分析，發(fā)現(xiàn)三株攜帶HPI的ETEC菌株，其中的整合酶基因發(fā) 生了缺失。提示ETEC中的HPI至少有兩種類型：整合酶完整的HPI和 整合酶部分缺失的HPI。 二、腸聚集性大腸桿菌ybtU、ybtT及ybtE基因的克隆及序列分析 采用PCR擴(kuò)增的方法，克隆了腸聚集性大腸桿菌 （enteroaggregative E.coli，EAEC）17-2 HPI的ybtU、ybtT及ybtE基 因。經(jīng)序列分析和比較，與Yps HPI及Yen HPI的相應(yīng)基因序列同源性 分別高達(dá)99％及97％以上，推導(dǎo)的氨基酸序列同源性亦分別高達(dá)99％ 和97％以上。表明Yps HPI功能核心區(qū)的三個(gè)重要基因在EAEC中高度 保守，EAEC中的HPI可能來(lái)源于Yps HPI。上述克隆以及結(jié)論為下一 步構(gòu)建相應(yīng)的基因缺失突變株，確定相應(yīng)基因的功能及對(duì)宿主毒力的影 響奠定了基礎(chǔ)。 三、腸聚集性大腸桿菌中ybtE基因作用的研究 克隆了 EAEC－2中 HPI白 yb伍基因，體外缺失 988hp，并插入卡 那霉素抗性基因（ban）作為選擇性標(biāo)記。利用自殺質(zhì)粒 pK川70作為 載體，采用體內(nèi)同源重組原理，將已缺失并插入 ban的 EAEC A 叩伍：：切n與＊AE C染色體的叩億進(jìn)行同源重組，缺失了＊＊＊C染色 體上 ybtE基因，構(gòu)建了 EAEC2 ybtE缺失突變株。為下一步 ybtE功 能的研究提供了合適的宿主菌。通過(guò)對(duì)ybtE缺失突變株EAEC1鐵缺 陷條件下的生長(zhǎng)監(jiān)測(cè)、小鼠毒力試驗(yàn)、＊EpZ粘附實(shí)驗(yàn)及生化反應(yīng)的測(cè) 定，發(fā)現(xiàn)ybtE對(duì)EAEC的鐵攝取、小鼠毒力、聚集性粘附及生化反應(yīng) 均無(wú)明顯影響。 通過(guò)本次研究，我們首次揭示了ETEC中國(guó)分離株HPI的結(jié)構(gòu)特 征，它整合在 asnT tRNA位點(diǎn)，至少以兩種形式存在；首次成功地構(gòu)建 了 EAEC－2 ybtE缺失突變株，并在此基礎(chǔ)上對(duì) ybtE的功能進(jìn)行了初 步的、探索性研究。ybtE對(duì)EAEC的鐵攝取、HEp習(xí)細(xì)胞的聚集性粘附 及小鼠毒力均無(wú)明顯影響。這為HPI在致瀉大腸桿菌中可能不是毒力島 而是適應(yīng)島這一觀點(diǎn)提供了強(qiáng)有力的證據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號(hào)】：R378.21

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 胡靜;EAggEC攜帶的耶爾森菌HPI毒力的功能研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2002年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 劉華;多重PCR檢測(cè)禽致病性大腸桿菌毒力基因方法的建立及應(yīng)用[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2660299