【摘要】： OMgp(Oligodendrocyte Myeline Glycoprotein)是表達(dá)于寡突膠質(zhì)細(xì)胞表面的一種GPI連接的糖蛋白，對OMgp mRNA在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的表達(dá)進(jìn)行測定發(fā)現(xiàn)，在許多神經(jīng)細(xì)胞表面也表達(dá)有OMgp。但目前對它們的功能還不清楚。2002年，Wang等人用磷脂酶處理CNS髓磷脂，對釋放出的蛋白質(zhì)進(jìn)行神經(jīng)突起生長抑制能力的篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)OMgp是唯一的抑制性蛋白，在體外具有抑制神經(jīng)突起生長和誘使生長錐潰變的功能。后來的研究表明，OMgp與另外兩種神經(jīng)突起生長抑制因子Nogo-A和MAG競爭同一個受體NgR介導(dǎo)其抑制性信號的傳導(dǎo)。研究表明，這三種抑制因子在序列上并沒有同源性，因而推測三者的結(jié)合位點可能有部分重疊。 對十四種動物OMgp的蛋白序列分析發(fā)現(xiàn)，OMgp由幾個部分構(gòu)成：富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域(CR)、富含亮氨酸重復(fù)序列的結(jié)構(gòu)域(LRR)和富含絲／蘇氨酸的結(jié)構(gòu)域。其中LRR結(jié)構(gòu)域極為保守，在十四種動物中一致性達(dá)到86％以上。這提示該結(jié)構(gòu)域可能對其功能具有重要意義。 為了對OMgp結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系有進(jìn)一步的了解，我們克隆了小鼠OMgpcDNA，，按照其結(jié)構(gòu)特征分段表達(dá)了含有不同結(jié)構(gòu)域的OMgp蛋白。通過與表達(dá)有NgR的CHO細(xì)胞的結(jié)合實驗、GST沉降實驗和對原代培養(yǎng)的海馬錐體細(xì)胞的抑制試驗證明，OMgp LRR在其神經(jīng)突起生長抑制功能中起重要作用，單獨的LRR結(jié)構(gòu)域具有與全長OMgp蛋白幾乎相同的神經(jīng)突起生長抑制功能，而刪除了此結(jié)構(gòu)域的蛋白則失去了對神經(jīng)突起的抑制作用。含有部分LRR結(jié)構(gòu)域的蛋白也有較強的作用，這提示，OMgp在完成其神經(jīng)突起抑制功能時，可能并不是每個亮氨酸重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域都是必須的。 為了進(jìn)一步鑒定OMgp與NgR作用的最小單位，本研究使用基因突變法分別刪除了OMgp LRR的不同亮氨酸富含重復(fù)序列，表達(dá)蛋白后對其功能進(jìn)行研究。結(jié)果表明，刪除了LRR25-56、57-133、134-180的蛋白片段沒有明顯的功能改變，而刪除了第181-228位氨基酸的LRR蛋白雖然仍具有結(jié)合NgR的功能，但卻失去 了對神經(jīng)突起的生長抑制功能。這提示，在OM即與NgR結(jié)合時，可能存在多個 結(jié)合位點，而LRR 181一228則可能是OMgP最重要的功能結(jié)構(gòu)域。 刪除了LRR181一228的OMgP片斷失去了對神經(jīng)突起的生長抑制功能，但仍具 有結(jié)合NgR的功能，有可能作為神經(jīng)生長抑制因子的競爭劑用于促進(jìn)CNS損傷后 神經(jīng)的再生。 由于目前還未得到OMgP的晶體結(jié)構(gòu)，本研究使用同源模建的方法模擬了 OMgP的三維結(jié)構(gòu)并進(jìn)行了初步分析，為進(jìn)一步對神經(jīng)突起生長抑制因子與配體相 互作用及神經(jīng)再生的研究奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

GDIs的功能是通過在胞漿內(nèi)將助。A包圍起來，并抑制有活性的Rho一GTP的形成而使孫OA保持在非活性狀態(tài)。當(dāng)勸。一GDI結(jié)合到p75時，助。A從Rh。一GDI的抑制下釋放出來，使得燦OA被GEFs激活(圖2一l)。P75和助。一GDI之間的相互作用似乎與髓磷脂抑制特別相關(guān)，因為髓磷脂相關(guān)的抑制因子而非NGF能增強孫。一GDI和p75的相互作用。重要的是，能抑制燦。一GDI和p75相互作用的多膚也能中和髓磷脂的抑制作用。助�？梢蕴禺愋缘乇灰环N從肉毒梭菌(CIOstridiumbotulinum)中獲得的酶—C3轉(zhuǎn)移酶滅活。研究顯示，使用C3有可能抑制溶血磷脂酸誘導(dǎo)的生長錐潰變和神經(jīng)突回縮(Jalinketal·，1994;Tigyietal.，1996)。一項對神經(jīng)再生有重要意義的發(fā)現(xiàn)是，有證據(jù)表明，髓磷脂誘導(dǎo)的生長錐的潰變和神經(jīng)突的抑制是通過Rh。的激活介導(dǎo)的

10nNA的鑒定gp的酶切鑒定載體比較，選取瓊脂糖電泳泳速較慢者進(jìn)行酶切鑒定。序列選取酶切位點，酶切位點分別位于oMgP和載體。選l、Pstl分別進(jìn)行雙酶切和單酶切。單酶切選用加閃反應(yīng)用的星活性，雙酶切使用30川反應(yīng)體系。單酶切雙酶切右..幾‘...壓‘...且卜林卜，‘l

本文編號：2657307