【摘要】：EB病毒(Epstein-Barr Virus, EBV)是一種致瘤病毒,已證明多種人類惡性腫瘤如Burkitt's淋巴瘤、霍奇金病、鼻咽癌和胃癌等與EBV感染相關(guān)。EBV感染能導(dǎo)致一系列的細(xì)胞效應(yīng),尤其是宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成途徑在病毒侵入后出現(xiàn)明顯變化。因此,在EBV感染和未感染細(xì)胞之間就出現(xiàn)了蛋白表達(dá)譜的差異,而這些差異蛋白正是病毒感染細(xì)胞、細(xì)胞抵御病毒的具體執(zhí)行者,尋找并鑒定這些蛋白將對(duì)認(rèn)識(shí)EBV感染機(jī)制提供大量的研究線索。本研究運(yùn)用比較蛋白組技術(shù)對(duì)EBV感染胃上皮AGS細(xì)胞前后出現(xiàn)的差異表達(dá)蛋白進(jìn)行分析,初步探索病毒—宿主相互作用,對(duì)于進(jìn)一步闡明EBV的感染機(jī)制及EBV在胃癌發(fā)生發(fā)展中可能的作用和機(jī)制具有十分重要的意義。 本論文由三部分組成：第一章前言概述了EB病毒感染與胃癌的相關(guān)性,以及比較蛋白質(zhì)組學(xué)在病毒學(xué)的研究現(xiàn)狀。本課題將比較蛋白質(zhì)組學(xué)與病毒學(xué)相結(jié)合,并提出本課題的研究方向。 第二章EB病毒感染的胃上皮AGS細(xì)胞系的建立,培養(yǎng)及鑒定：采用cell-to-cell感染法建立EB病毒感染的胃上皮AGS細(xì)胞系,并通過(guò)原位雜交及電子顯微鏡對(duì)EB病毒感染的胃上皮AGS細(xì)胞系進(jìn)行驗(yàn)證性檢測(cè)。原位雜交和電鏡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在EB病毒感染的胃上皮AGS細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)均可檢測(cè)到EBV EBER-1的表達(dá)；在EB病毒感染的胃上皮AGS細(xì)胞的胞漿內(nèi)存在明確的EB病毒顆粒。 第三章EB病毒感染AGS的比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析為了分析感染病毒后宿主細(xì)胞蛋白表達(dá)譜的變化,本研究利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)EBV感染和未感染的AGS細(xì)胞進(jìn)行了比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析。結(jié)果顯示,在EBV感染AGS細(xì)胞后共有11個(gè)蛋白點(diǎn)的表達(dá)水平發(fā)生了至少2.0倍的上調(diào)或下調(diào)變化。在這些差異表達(dá)蛋白中,我們用質(zhì)譜(MALDI-TOF和LC-ESI-IT MS)成功鑒定出9種蛋白質(zhì),對(duì)應(yīng)于5個(gè)上調(diào)表達(dá)和4個(gè)下調(diào)表達(dá)蛋白質(zhì)。5個(gè)上調(diào)表達(dá)蛋白質(zhì)是：熱休克同源71kDa蛋白(heat shock cognate71kDa protein),細(xì)胞質(zhì)肌動(dòng)蛋白-1(actin cytoplasmic1),吡多辛-5-磷酸鹽氧化酶(pyridoxine-5'-phosphate oxidase),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase9), T復(fù)合物蛋白1亞單位α[(t-complex protein1subunit alpha);4個(gè)下調(diào)表達(dá)蛋白是：鋅指蛋白-2(zinc finger protein2),細(xì)胞周期素依賴性激酶-2(cyclin-dependent kinase2),巨噬細(xì)胞加帽蛋白(macrophage capping protein),生長(zhǎng)分化因子-11(growth/differentiation factor11)。 為了檢驗(yàn)蛋白質(zhì)組研究結(jié)果,我們選取細(xì)胞周期素依賴性激酶-2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9進(jìn)行了Western-Blot驗(yàn)證。結(jié)果顯示：細(xì)胞周期素依賴性激酶-2在EBV感染的胃上皮AGS細(xì)胞組中下調(diào)表達(dá)；同時(shí),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9在EBV感染的胃上皮AGS細(xì)胞組中上調(diào)表達(dá)。這些結(jié)果表明兩種蛋白的變化趨勢(shì)與雙向凝膠電泳中兩種蛋白點(diǎn)變化趨勢(shì)一致,進(jìn)一步證明了本研究的蛋白組學(xué)結(jié)果正確。 在我們所發(fā)現(xiàn)的差異蛋白中,下調(diào)表達(dá)的細(xì)胞周期素依賴性激酶-2是細(xì)胞周期中的重要調(diào)控因子之一,我們推測(cè)：EBV可能通過(guò)改變細(xì)胞周期調(diào)控,引起細(xì)胞周期紊亂,而導(dǎo)致細(xì)胞惡性增殖。上調(diào)表達(dá)的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9是細(xì)胞凋亡的重要的起始因子。我們推測(cè)：EBV感染AGS細(xì)胞以后,細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)可能是宿主細(xì)胞對(duì)病毒的防御機(jī)制之一。 綜上所述,細(xì)胞周期素依賴性激酶-2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9在EBV感染中可能存在重要作用。其它的蛋白質(zhì)則有待于進(jìn)一步研究。本研究結(jié)果的這些數(shù)據(jù)為進(jìn)一步研究EBV感染的機(jī)制和致病機(jī)理提供了蛋白質(zhì)相關(guān)基礎(chǔ)信息。 圖8幅,表6個(gè),參考文獻(xiàn)103篇。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R373.9

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