【摘要】： 血吸蟲病仍是一個(gè)全球性的重要公共衛(wèi)生問(wèn)題。由于長(zhǎng)期化療存在需反復(fù)治療、費(fèi)用高以及不能預(yù)防再感染、有可能產(chǎn)生耐藥蟲株等缺點(diǎn)，所以尋找其他具有較長(zhǎng)期效果的防治措施成為國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者關(guān)注的焦點(diǎn)，其中血吸蟲病疫苗可能是一種費(fèi)用較低而有效的措施。血吸蟲病疫苗研究已有60多年的歷史，，大致經(jīng)歷了死疫苗、活疫苗(照射致弱尾蚴疫苗)和基因工程疫苗等研究階段，產(chǎn)生了一些WHO/TDR推薦認(rèn)為很有希望的疫苗候選分子，如谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、副肌球蛋白(Sm97)、照射致弱疫苗抗原5(IrV-5)、磷酸丙糖異構(gòu)酶(TPI)、曼氏血吸蟲膜內(nèi)在蛋白(Sm23)和脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP，Sm14)等，但其對(duì)宿主的保護(hù)作用均不甚理想，未能穩(wěn)定地達(dá)到40％或以上的保護(hù)力水平，因此有必要繼續(xù)尋找新的疫苗抗原分子和/或疫苗佐劑，進(jìn)一步提高其保護(hù)力。據(jù)報(bào)道，減蟲率達(dá)50％或以上就可明顯減輕宿主的病理變化，降低傳播率。 管曉虹等(1991)建立了一株日本血吸蟲單克隆抗獨(dú)特型抗體NP30，已證實(shí)為腸相關(guān)抗原(GAA)的內(nèi)影像抗獨(dú)特型抗體，其抗體同型為IgM，與可溶性蟲卵抗原(SEA)及膜相關(guān)抗原(MAA)有部分交叉反應(yīng)。已對(duì)NP30分子進(jìn)行了較為廣泛的研究，應(yīng)用小鼠日本血吸蟲肝肉芽腫模型證實(shí)NP30對(duì)蟲卵肉芽腫的形成具有致敏作用；對(duì)感染宿主(昆明種小鼠、C57BL/6小鼠和山羊)具有較好的免疫保護(hù)作用(減蟲率分別為50.46％、41.67％和42.78％)；用NP30主動(dòng)免疫小鼠具有抗雌蟲生殖產(chǎn)卵和抗卵胚發(fā)育的雙重功效；另外，還對(duì)血吸蟲病肉芽腫和肝纖維化有明顯的負(fù)調(diào)節(jié)作用(蟲卵肉芽腫的直徑、面積和體積均明顯小于對(duì)照組，肝組織Ⅰ、Ⅲ型膠原及纖維連接蛋白含量均低于對(duì)照組)。證 南京醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文 明抗獨(dú)特型抗體 NP3 0分子具有較好的抗感染免疫和抗病免疫功 效，可作為日本血吸蟲病疫苗候選分子。在此基礎(chǔ)上，我們從疫 苗佐劑研究入手，分別對(duì)納米顆粒、細(xì)胞因子和中藥進(jìn)行系列研 究，旨在篩選出能提高 NP3 0誘導(dǎo)保護(hù)性免疫作用的疫苗佐劑， 并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。 1．鈣納米顆粒作為血吸蟲病抗獨(dú)特型抗體疫苗佐劑的研究 1．1 探索鈣納米顆粒CA作為血吸蟲病抗獨(dú)特型抗體 疫苗佐劑的可行性 應(yīng)用物理方法制胸納米顆粒CA；顆粒直徑為3O0一8O0m。 將鈣納米顆粒CA與NP30制備成CA皿30結(jié)合物（CA－NP30）， 主動(dòng)免疫B從B兒，J、鼠，觀察其對(duì)，J、鼠抗血吸蟲感染的保護(hù)作用、 對(duì)血清特異性屹G抗體的影響和足墊反應(yīng)。B從B兒，J、鼠K4周 齡，體重 18A12g）隨機(jī)分為 4組，每組 10 R，雌雄兼用。①實(shí) 驗(yàn)組：CA．NP30結(jié)合物 0＊ ml／次／鼠（含 CA和 NP30各 20 u g）， 腹腔注射門．p．），共免疫3次，每次間隔2周。末次免疫后8周 經(jīng)腹部皮膚感染日本血吸蟲（中國(guó)大陸株）尾拗40 ti u鼠。尾 蝴攻擊感染后 6周處死小鼠，行 I”1靜脈灌注沖洗收集成蟲計(jì)數(shù)計(jì) 算減蟲率；計(jì)數(shù)肝組織蟲卵計(jì)算減卵率。常規(guī)ELISA方法檢測(cè)小 鼠血清NP3 0特異性IgG抗體水平。于尾蝴攻擊感染后40天進(jìn)行 足墊試驗(yàn)。②單獨(dú)NP 3o組：僅以NP 3O ZO以g／鼠免疫小鼠，免 疫時(shí)間、次數(shù)均與CA－NP30組相同。③單獨(dú)CA納米顆粒組： CA納米顆粒 20 u g／鼠，i．p，共 3次，每次間隔 2周，其它處理 同實(shí)驗(yàn)組。④對(duì)照組：以注射用水代替CA－NP30 其余處理均 同實(shí)驗(yàn)組。 結(jié)果顯示（A納米顆粒可明顯增強(qiáng) NP3 0對(duì)小鼠的保護(hù)作用， 減蟲率明顯提高，從單用NP30免疫組的30．4O提高到57．80；肝 組織減卵率與單獨(dú) N’P3 0組比較無(wú)顯著性差異。血清特異性抗體 IgG水平較單獨(dú) NP3 0組顯著升高；足墊試驗(yàn)可引發(fā)遲發(fā)型超敏反 2 南京醫(yī)科大學(xué)博土學(xué)位論文 應(yīng)（CA－NP30免疫組引起的遲發(fā)性足墊腫脹明顯高于單獨(dú)NP30 免疫組）。提示 CA納米顆�？勺鳛檠x病抗獨(dú)特型抗體疫苗 NP3 0的佐劑，其作用機(jī)制可能與增強(qiáng)宿主體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng) 答有關(guān)。 1．2納米顆粒CA作為血吸蟲病抗獨(dú)特型抗體疫苗佐劑的 進(jìn)一步研究 觀察與第1次實(shí)驗(yàn)不同濃度和結(jié)合比例的CA－NP30結(jié)合物對(duì) 宿主抗血吸蟲感染保護(hù)性免疫力的影響，并進(jìn)一步探討其作用機(jī) 制。制備與第 1次實(shí)驗(yàn)服不同的 CA－NP30結(jié)合物矚A：NP30為 23：1X進(jìn)行動(dòng)物的保護(hù)性實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物分組及實(shí)驗(yàn)方案基本同第1 次實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)方案作如下調(diào)整：①實(shí)驗(yàn)組：CA－NP30結(jié)合物 0．l：1／ 次／鼠（含 CA納米顆粒 23 0 u g，NP3 of 0 u g）；
【圖文】：

宿主的保護(hù)性免疫作用。材料與方法1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物BALB/c小鼠，6一8周齡，體重18一229，雌雄兼用，由科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，飼以標(biāo)準(zhǔn)食料。2日本血吸蟲單克隆抗獨(dú)特型抗體N’P30NP30雜交瘤細(xì)胞株的建株見管曉虹等[I4l報(bào)道。NP30瘤培養(yǎng)上清，經(jīng)飽和硫酸按沉淀蛋白質(zhì)，用PBS調(diào)節(jié)其蛋白度為巧.0叭，置一70℃保存?zhèn)溆谩?CA納米顆粒及CA.N甲30結(jié)合物由南京醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)研究所自行研制，CA納顆粒直徑為300一800nm。CA納米顆粒電鏡照片見圖1。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號(hào)】：R392

【引證文獻(xiàn)】

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1 李東;朱珠;張e

本文編號(hào)：2656388