【摘要】：背景： 大量研究表明腎素血管緊張素醛固酮系統(tǒng)(RAAS)在高血壓和心血管疾病(CVD)發(fā)生發(fā)展和病理生理過程中起著關(guān)鍵的作用。Ang II作為RAS系統(tǒng)的主要效應(yīng)肽,除了能引起血流動力學的改變外,還可以作為一種前炎癥因子誘導(dǎo)多種炎癥因子的表達,促進氧化應(yīng)激水平,在AS的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要的作用。而巨噬源性泡沫細胞的形成是AS斑塊損傷形成、發(fā)展和崩解的關(guān)鍵。目前發(fā)現(xiàn),AngII能從多個環(huán)節(jié)上促進巨噬細胞泡沫化,包括,促進巨噬細胞攝取ox-LDL,下調(diào)ABCA1的表達,上調(diào)ACAT1的表達,并且AT1受體阻斷劑(ARB)的應(yīng)用可以拮抗血管緊張素Ⅱ的致泡沫化作用。但其具體調(diào)節(jié)機制仍不甚清楚。 ARB是目前臨床常用的高血壓一線治療藥物,除能有效降壓之外,同時還具有改善胰島素抵抗、減輕心臟重構(gòu)等降壓外益處,其主要作用機制為選擇性阻斷AT1受體,阻斷血管緊張Ⅱ收縮血管、升高血壓、促進醛固酮分泌、水鈉潴留、交感神經(jīng)興奮等作用,并使血管緊張素Ⅱ合成反饋性增加,作用于AT2受體,產(chǎn)生擴血管、抗細胞增殖、調(diào)節(jié)細胞凋亡等作用。目前發(fā)現(xiàn),ARB類藥物中的替米沙坦、厄貝沙坦,除了可選擇性阻斷AT1受體外,還具有PPARγ的選擇性激動作用,可能具有獨立于降壓作用以外的改善代謝的作用。而PPARγ/LXRα途徑作為ABCA1調(diào)控機制中核心的因素,對ABCA1的表達有顯著上調(diào)作用。那么具PPARγ激動作用的ARB與不具PPARγ激動作用的ARB,在逆轉(zhuǎn)AngII致泡沫化作用中的機制方面是否亦有差別呢? 本實驗旨在探討AngII抑制巨噬細胞ABCA1表達的相關(guān)受體及信號通路,并以ABCA1為參照基因,在高水平AngII作用下,探討不同血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB)對ABCA1表達的影響及其作用機制。 研究目的： 1.探討AngII對THP-1源巨噬細胞ABCG1表達的影響,同時驗證AngII對THP-1源巨噬細胞ABCA1表達的抑制作用,并探討其濃度和時間依賴關(guān)系。 2.探討AngII抑制THP-1源巨噬細胞ABCA1表達的相關(guān)受體及信號通路。 3.在高水平AngII作用下,探討不同血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB)對ABCA1表達的影響及其作用機制。 方法： 1.實驗選用THP-1單核細胞系。 2.巨噬細胞由THP-1單核細胞系經(jīng)PMA誘導(dǎo)分化獲得,巨噬細胞由CD68免疫組化染色鑒定。 3.分別用AngII不同濃度和不同作用時間對THP-1源巨噬細胞進行干預(yù),Real-time PCR和Western Blot檢測ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表達。 4.在AngII干預(yù)的基礎(chǔ)上,分別用AT1受體阻斷劑纈沙坦、AT2受體阻斷劑PD123319和NF-κB阻斷劑TPCK預(yù)處理THP-1源巨噬細胞,Real-time PCR和、Vestern Blot檢測ABCA1的mRNA和蛋白表達。 5.在AngⅡ干預(yù)的基礎(chǔ)上,分別用替米沙坦、纈沙坦、吡咯列酮預(yù)處理THP-1源巨噬細胞；此外還分別用PPARγ抑制劑GW9662進行聯(lián)合干預(yù),Real-time PCR和Western Blot檢測ABCA1的mRNA和蛋白表達。 6.統(tǒng)計分析：采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分析,計量資料以X±SD表示,組間比較以one-way ANO VA進行分析。 結(jié)果： 1. THP-1細胞系在PMA誘導(dǎo)下,成功分化為具有吞噬功能的多形性巨噬細胞,CD68抗原免疫組化染色呈陽性反應(yīng)。 2. AngII0.01μM、0.1μM、1μM均能顯著抑制ABCA1mRNA和蛋白的表達(p0.01),且呈現(xiàn)出一定的濃度依賴性；而對ABCG1的mRNA和蛋白表達水平無影響(p0.05)。將AngII1μM分別干預(yù)24h、36h、48h,結(jié)果顯示AngII自24h即開始對ABCA1表達有顯著抑制作用(p0.01),并在48h達到最大,呈現(xiàn)出一定的時間依賴性；而對ABCG1的表達在各時間點均無影響(p0.05)。 3. AT1R阻斷劑纈沙坦10μM能顯著逆轉(zhuǎn)AngII1μM對ABCA1mRNA和蛋白表達的抑制作用(p0.05vs. AngII組),而AT2R阻斷劑PD12331910μM組與AngII組相比ABCA1的表達并無顯著性差異(p0.05)；AT1R與AT2R共同阻斷組同樣能顯著逆轉(zhuǎn)AngII對ABCA1的抑制作用(p0.05vs. AngII組),但與單純AT1R阻斷組相比并無顯著性差異(p0.05)。NF-κB阻斷劑TPCK同樣可以顯著逆轉(zhuǎn)AngII對ABCA1mRNA的抑制作用,但在蛋白水平,TPCK有逆轉(zhuǎn)AngII抑制ABCA1蛋白表達的趨勢,但無統(tǒng)計學意義(p=0.088vs.AngII組)。 4.替米沙坦(10μM)、纈沙坦(10μM)、吡咯列酮(10μM)均能顯著逆轉(zhuǎn)AngII1μM對ABCA1表達的抑制作用(p0.01vs. AngII組)；加入PPARy阻斷劑GW9662聯(lián)合干預(yù)能顯著抑制吡咯列酮對ABCA1表達的上調(diào)作用(p0.01),而對替米沙坦10μM組與纈沙坦10μM組ABCA1的表達與各自相應(yīng)組別比較無顯著性差異(p0.05) 結(jié)論： 1. AngII可顯著抑制THP-1源巨噬細胞ABCA1mRNA和蛋白的表達；且作用強度呈濃度和時間依賴性。 2. AngⅡ主要通過與AT1受體結(jié)合發(fā)揮其對巨噬細胞ABCA1表達的抑制作用,并且該抑制作用與NF-κB信號通路的激活相關(guān)。 3. ARB可以顯著逆轉(zhuǎn)AngⅡ?qū)HP-1源巨噬細胞ABCA1表達的抑制作用,該作用幾乎完全是通過阻斷AT1受體實現(xiàn)的。
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R363

【共引文獻】

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本文編號：2644647