【摘要】：腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL,也稱為Apo-2L)是Wiley 1995年首次克隆成功的一種新的抗腫瘤細胞因子,屬于TNF家族的一個成員,在人體的多種組織中如脾、肺、前列腺、胸腺和外周血淋巴細胞等正常組織均可發(fā)現其表達。人TRAIL蛋白編碼281個氨基酸,它的基因位于染色體3q26。TRAIL與目前發(fā)現的TNF家族的其它主要成員,如TNF-α,TNF-β(也稱為淋巴毒素或LT-α),淋巴毒素-β(LT-β),41BBL,OX40L,CD27L,CD30L,CD40L和FasL(CD95L,也稱為Apo-1L)等配體均為Ⅱ型膜蛋白,可水解形成可溶性同源三聚體,參與調節(jié)機體內的許多重要生物功能。TRAIL除了在免疫調節(jié)和炎性反應方面起重要的作用外,還與TNF家族中的TNF-α、TNF-β、FasL配體可導致易感細胞凋亡。TRAIL與這些配體的區(qū)別在于,除可特異性導致腫瘤細胞發(fā)生凋亡外,不損傷正常細胞。這些細胞因子的跨膜受體含有死亡結構閾,與配體結合導致引起凋亡的一系列蛋白酶反應。本研究首先對合成的TRAIL寡核苷酸全長進行了誘導表達和純化,獲得了有活性的TRAIL蛋白,并驗證其抗腫瘤效應。同時采用分子模建方法,對TRATL結構進行了缺失突變,得到了兩個突變體,并對它們進行了熱誘導表達,以便深入的研究結構與功能的關系,為TRAIL開發(fā)成新的抗腫瘤藥物打下基礎。 1.人TRAIL寡核苷酸全長合成及在大腸桿菌中表達和純化 人TRAIL寡核甘酸全長843個堿基,我們對其分段合成,然后進行全長拼接,并改變其中的30個密碼子,以糾正氨基酸偏性,更利于在原核載體中進行表達。核苷酸自動測序結果,與預想的序列一致。合成的產物亞克隆至pGEX-2T質粒構成TRAIL-pGEX-2T,然后轉染受體菌DH-5α大腸桿菌。我們在低溫30℃,用IPTG 0.4mM/L誘導TRAIL融合蛋白表達,得到了TRAIL融合蛋白。然后采用親和層析方法純化TRAIL蛋白。 2.TRAIL的抗腫瘤生物活性 用A172人膠質細胞瘤,B104神經母細胞瘤,SKNSH人神經母細胞瘤,
【圖文】：

『軍筍醫(yī)勞群瑞些虜娜士后研男扮昔自動測序儀測定TRAIL基因序列見圖1一2，圖1一2顯示合成的基因片段序列與我們糾正氨基酸偏性后的TRALI序列相符。圖1一2TRA工L核普酸序列分析

中低分子量Marker。由大到小依次為:97，66，43，31，20，14.4KD。2345圖1一5親和層析純化TRALI融合表達蛋白的SDS一PAGE檢測純化后TRA工L融合蛋白。2，TRALI融合蛋白的表達。3，TRA工L蛋白。4GST蛋白。5，中低分子量Marker。由大到小依次為:97，66，43，，31，20
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2002
【分類號】：R346

【共引文獻】

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本文編號：2637894