【摘要】：腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL,也稱為Apo-2L)是Wiley 1995年首次克隆成功的一種新的抗腫瘤細(xì)胞因子,屬于TNF家族的一個(gè)成員,在人體的多種組織中如脾、肺、前列腺、胸腺和外周血淋巴細(xì)胞等正常組織均可發(fā)現(xiàn)其表達(dá)。人TRAIL蛋白編碼281個(gè)氨基酸,它的基因位于染色體3q26。TRAIL與目前發(fā)現(xiàn)的TNF家族的其它主要成員,如TNF-α,TNF-β(也稱為淋巴毒素或LT-α),淋巴毒素-β(LT-β),41BBL,OX40L,CD27L,CD30L,CD40L和FasL(CD95L,也稱為Apo-1L)等配體均為Ⅱ型膜蛋白,可水解形成可溶性同源三聚體,參與調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)的許多重要生物功能。TRAIL除了在免疫調(diào)節(jié)和炎性反應(yīng)方面起重要的作用外,還與TNF家族中的TNF-α、TNF-β、FasL配體可導(dǎo)致易感細(xì)胞凋亡。TRAIL與這些配體的區(qū)別在于,除可特異性導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡外,不損傷正常細(xì)胞。這些細(xì)胞因子的跨膜受體含有死亡結(jié)構(gòu)閾,與配體結(jié)合導(dǎo)致引起凋亡的一系列蛋白酶反應(yīng)。本研究首先對(duì)合成的TRAIL寡核苷酸全長(zhǎng)進(jìn)行了誘導(dǎo)表達(dá)和純化,獲得了有活性的TRAIL蛋白,并驗(yàn)證其抗腫瘤效應(yīng)。同時(shí)采用分子模建方法,對(duì)TRATL結(jié)構(gòu)進(jìn)行了缺失突變,得到了兩個(gè)突變體,并對(duì)它們進(jìn)行了熱誘導(dǎo)表達(dá),以便深入的研究結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,為TRAIL開發(fā)成新的抗腫瘤藥物打下基礎(chǔ)。 1.人TRAIL寡核苷酸全長(zhǎng)合成及在大腸桿菌中表達(dá)和純化 人TRAIL寡核甘酸全長(zhǎng)843個(gè)堿基,我們對(duì)其分段合成,然后進(jìn)行全長(zhǎng)拼接,并改變其中的30個(gè)密碼子,以糾正氨基酸偏性,更利于在原核載體中進(jìn)行表達(dá)。核苷酸自動(dòng)測(cè)序結(jié)果,與預(yù)想的序列一致。合成的產(chǎn)物亞克隆至pGEX-2T質(zhì)粒構(gòu)成TRAIL-pGEX-2T,然后轉(zhuǎn)染受體菌DH-5α大腸桿菌。我們?cè)诘蜏?0℃,用IPTG 0.4mM/L誘導(dǎo)TRAIL融合蛋白表達(dá),得到了TRAIL融合蛋白。然后采用親和層析方法純化TRAIL蛋白。 2.TRAIL的抗腫瘤生物活性 用A172人膠質(zhì)細(xì)胞瘤,B104神經(jīng)母細(xì)胞瘤,SKNSH人神經(jīng)母細(xì)胞瘤,
【圖文】：

『軍筍醫(yī)勞群瑞些虜娜士后研男扮昔自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)定TRAIL基因序列見圖1一2，圖1一2顯示合成的基因片段序列與我們糾正氨基酸偏性后的TRALI序列相符。圖1一2TRA工L核普酸序列分析

中低分子量Marker。由大到小依次為:97，66，43，31，20，14.4KD。2345圖1一5親和層析純化TRALI融合表達(dá)蛋白的SDS一PAGE檢測(cè)純化后TRA工L融合蛋白。2，TRALI融合蛋白的表達(dá)。3，TRA工L蛋白。4GST蛋白。5，中低分子量Marker。由大到小依次為:97，66，43，，31，20
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號(hào)】：R346

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 ;The Role of TNF Related Apoptosis-Inducing Ligand in Neurodegenerative Diseases[J];Cellular & Molecular Immunology;2005年02期

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4 張智峰;TRAIL及其在腦膠質(zhì)瘤中的研究應(yīng)用進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)分冊(cè);2002年04期

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相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

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相關(guān)碩士學(xué)位論文 前9條

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2 侯登勇;人腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL）基因的克隆、表達(dá)、產(chǎn)物純化及其生物學(xué)活性的測(cè)定[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

3 梁旭東;凋亡調(diào)控基因TRAIL、Caspase-3、Survivin在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的檢測(cè)及意義[D];鄭州大學(xué);2003年

4 張明烽;人TRAIL基因cDNA的克隆及真核和原核表達(dá)載體的構(gòu)建[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2005年

5 王軍;重組可溶性人TRAIL抑制腫瘤細(xì)胞增殖的研究[D];武漢大學(xué);2005年

6 劉云燕;白藜蘆醇對(duì)TRAIL誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721凋亡的影響及其機(jī)制的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

7 高萍;凋亡抑素啟動(dòng)子調(diào)控TRAIL基因表達(dá)在宮頸癌治療中應(yīng)用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

8 王琪影;TRAIL、DR4、DR5在皮膚血管瘤中的表達(dá)及與細(xì)胞凋亡的相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2006年

9 楊文理;TRAIL_（111-281）蛋白自剪切功能原核表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)及其生物學(xué)活性的初步研究[D];四川大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2637894