【摘要】： 目的：體外分離、培養(yǎng)、鑒定大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞和兔椎間盤髓核細胞。并建立永生化的脂肪間充質(zhì)干細胞。運用Transwell培養(yǎng)法對大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞和兔椎間盤髓核細胞進行體外共培養(yǎng),研究脂肪間充質(zhì)干細胞與髓核細胞的近距離作用后,脂肪間充質(zhì)干細胞表型的變化,為構(gòu)建組織工程髓核提供優(yōu)良種子細胞建立基礎(chǔ)。 方法：從SD大鼠的腹股溝脂肪墊分離出脂肪組織,通過Ⅰ型膠原酶消化法獲取原代脂肪間充質(zhì)干細胞,進行傳代；同時取兔髓核細胞進行原代培養(yǎng)。通過倒置相差顯微鏡對兩種細胞進行形態(tài)學(xué)觀察,MTT法測定兩種細胞增殖情況,并采用免疫細胞化學(xué)方法進行鑒定。使用LipofectamineTM 2000將含有猿腎病毒40大T抗原基因(SV40Tag)的質(zhì)粒pCMVSV40T/PUR轉(zhuǎn)染脂肪間充質(zhì)干細胞,進過嘌呤酶篩選,抗性克隆擴大培養(yǎng)取得永生化脂肪間充質(zhì)干細胞。將永生化的脂肪間充質(zhì)干細胞單獨培養(yǎng)(對照組),并以1：1的比例和髓核細胞于Tranawell中進行共培養(yǎng)(實驗組)。共培養(yǎng)15天后,采用組化、RT-PCR鑒定檢測兩組細胞中Ⅱ型膠原(CollagenⅡ)和聚集蛋白聚糖(Aggrecan)的表達。 結(jié)果：經(jīng)過免疫細胞化學(xué)方法證實取材分離并且純化的細胞為脂肪間充質(zhì)干細胞和髓核細胞。SV40Tag穩(wěn)定轉(zhuǎn)染進入脂肪間充質(zhì)干細胞,命名為永生化脂肪間充質(zhì)干細胞。實驗組永生化脂肪間充質(zhì)干細胞經(jīng)過15天在Transwell中與髓核細胞共培養(yǎng)后,RT-PCR結(jié)果顯示有Ⅱ型膠原和聚集蛋白聚糖表達,而對照組則無Ⅱ型膠原和聚集蛋白聚糖表達;免疫組織化學(xué)染色顯示實驗組聚集蛋白聚糖表達陽性而對照組為陰性。 結(jié)論：運用顯微取材和免疫學(xué)純化技術(shù)可以成功分離出純化的脂肪間充質(zhì)干細胞和髓核細胞。通過SV40Tag穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,可構(gòu)建永生化脂肪間充質(zhì)干細胞。在Transwell環(huán)境內(nèi)非接觸共培養(yǎng),髓核細胞能夠在體外誘導(dǎo)永生化脂肪間充質(zhì)干細胞向永生化髓核樣細胞方向分化,因此可以利用永生化的脂肪間充質(zhì)干細胞治療椎間盤退行性疾病。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R329

【共引文獻】

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2 趙亮;瞿東濱;陳建庭;江建明;金大地;;腰椎間盤人工髓核置換術(shù)后手術(shù)節(jié)段活動度和椎間隙高度變化的觀察[J];中國脊柱脊髓雜志;2007年03期

3 鄧方躍,劉尚禮,鄭召民,黃東生,李春海,郭家偉;人工髓核置換術(shù)治療退變性腰椎間盤病的近期效果[J];中國臨床解剖學(xué)雜志;2004年06期

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1 張輝;腰椎間盤突出人工髓核置換術(shù)的基礎(chǔ)與臨床研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

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3 趙慶華;SOX9蛋白對人頸椎退變疾病透明軟骨細胞作用的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

4 于長江;人骨髓間充質(zhì)干細胞向結(jié)膜樣細胞誘導(dǎo)分化的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

5 趙亮;腰椎間盤人工髓核置換術(shù)的臨床與基礎(chǔ)研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2007年

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4 李偉;腰椎椎板截骨原位回植術(shù)遠期療效分析[D];山東大學(xué);2007年

5 李志強;兩種頸椎前路減壓結(jié)構(gòu)重建方式的臨床評價[D];同濟大學(xué);2005年

6 徐展;亞甲藍對長入疼痛椎間盤內(nèi)神經(jīng)纖維影響的實驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2008年

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本文編號：2637729