發(fā)布時間：2020-04-19 13:38

【摘要】：約10％的夫婦是不育的，其中一半為男方原因所致。在眾多的男性不育病因中，伴有無精和嚴重寡精的原發(fā)不育占有較大比例并與遺傳因素密切相關。此外，精子發(fā)生也是研究個體發(fā)育和細胞分化過程中基因次遞表達的一個優(yōu)良模型。因此，生精過程相關基因的研究對深入了解精子發(fā)生的分子機理和闡明男性原發(fā)不育的遺傳病因具有重要的理論和臨床意義。 小鼠作為一種模式生物被廣泛地運用在精子發(fā)生相關基因的功能研究中。本文運用cDNA末端快速擴增技術和電子克隆的方法，克隆了人類精子發(fā)生相關基因ZNF230的小鼠同源基因znf230(GenBank接受號AF353167)。后者cDNA全長982bp，編碼230個氨基酸，分子量26kD的肽鏈。生物信息學分析的結果顯示：1)小鼠znf230蛋白同樣包括一個C3HC4型鋅指蛋白結構域；2)與人ZNF230基因相比，兩者的核酸和氨基酸序列高度同源，分別為92％和98％；3)兩者鋅指域的 同源性高達100%，與其它物種來源的C3HC4型鋅指蛋白相比，該結構 域在進化上高度保守，提示其功能也可能保守;4)用PSORT軟件分析 的結果提示，該基因定位于細胞核中;5)小鼠znf230基因的基因組 序列全長28kb，，將其cDNA分為6個外顯子，其內含子和外顯子的剪 切位點符合GT一AG規(guī)則;6)根據(jù)小鼠znf230基因組序列的定位信息 和人一小鼠同源圖譜分析，將小鼠基因定位于7號染色體。 用Northern雜交對小鼠znf23o基因表達的時空特異性進行研究 的結果顯示:與人ZNF23O基因相似，預期的Ikb大小的轉錄本只在 辜丸中表達，為辜丸特異表達的轉錄本;而4.4kb的轉錄本除了在 心、腦、骨骼肌、腎表達外(與人ZNF230基因一致)，也在肺、肝、 摹丸中表達;此外，在心、肝和腎中還有一個2.4kb的轉錄本。多組 織RT一PCR實驗進一步證實了上述結果。 用RT一PCR對不同發(fā)育階段的小鼠znf230基因的表達進行研究的 結果表明，該基因在產后6天開始表達，產后14一21天達到最高峰， 即達到成年時的表達水平，此期間完成了由A型精原細胞到圓形精子 細胞的第一輪分化。己知人ZNF230基因的不表達導致生精過程阻滯在 精細胞期，因此，可以初步推斷小鼠znf230基因及其人類同源基因可 能與精子細胞的生成有關。 酵母單雜交的結果顯示，小鼠znf230蛋白具有轉錄激活活性，并 可能主要是通過鋅指結構域起作用，而要達到最大轉錄激活活性，則 可能同時需要非鋅指結構域的存在。體外轉錄翻譯和Southwestern雜 交證實，26kD的小鼠znf230蛋白具有DNA結合能力。生物信息學和 綠熒光蛋白標記的活細胞內亞細胞定位實驗表明znf230蛋白定位于細 胞核內，因此，初步推測該基因可能作為生殖細胞特異的轉錄調控因 子，參與精原細胞向圓形精子細胞分化過程的基因表達調控。 關鍵詞:精子發(fā)生znf230基因鋅指蛋白轉錄調控
【學位授予單位】：四川大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R346;Q78

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本文編號：2633356