【摘要】：目的通過觀察清腸化濕方對三硝基苯磺酸(TNBS)誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠的治療效果,以NF-κB為中心分別探討其抑制NF-κB過度活化,減少腸黏膜促炎細(xì)胞因子分泌,保護(hù)腸上皮緊密連接(tight junction, TJ)蛋白,減少樹狀突細(xì)胞(dendritic cells, DCs)數(shù)目并抑制其活化程度,以及抑制細(xì)胞間黏附分子ICAM-1表達(dá)的療效機(jī)制,為臨床用藥提供客觀依據(jù),為開發(fā)治療UC的中藥新藥打下科學(xué)基礎(chǔ)。 方法將40只雄性清潔型Wistar大鼠,體重(200±20)g,6-7w鼠齡,隨機(jī)分為四組,每組10只；空白對照組,常規(guī)飼養(yǎng),自由飲水進(jìn)食。采用TNBS造模后分為模型對照組：造模后每日給予等體積生理鹽水灌胃。清腸化濕方組：按成人10倍劑量(12.8g生藥.kg-1.d)一次性灌胃給藥。美沙拉嗪組,按按成人10倍劑量(0.67g.kg-1.d)一次性灌胃給藥；于造模后第2天給藥,連續(xù)10d。最后1次給藥后,禁食24h處死大鼠,留取新鮮結(jié)腸標(biāo)本和腸系膜淋巴結(jié)組織,觀察各組大鼠一般情況和結(jié)腸組織病理形態(tài)：ELISA法檢測腸黏膜組織促炎細(xì)胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α的表達(dá)水平；免疫組化法檢測結(jié)腸黏膜組織和MLN DCs數(shù)目,流式細(xì)胞儀檢測腸系膜淋巴結(jié)大鼠DC特異標(biāo)志分子OX-62百分比和DCs表面分子MHC-Ⅱ和CD86的表達(dá)；免疫組化法檢測大鼠結(jié)腸粘膜ICAM-1的表達(dá)情況,ELISA法檢測sICAM-1水平；免疫組化SP法檢測大鼠結(jié)腸粘膜上皮occludin、 claudin-1蛋白的表達(dá),實(shí)時(shí)熒光定量PCR (real-time PCR)方法檢測結(jié)腸黏膜組織(?) occludin mRNA、claudin-1mRNA表達(dá)情況；(?)eal-time PCR法檢測NF-κBp65mRNA的表達(dá)水平,免疫組化SP法和蛋白免疫印跡法檢測大鼠結(jié)腸粘膜NF-κB p65的表達(dá)水平；采用相關(guān)分析探討NF-κB p65與炎性積分、IL-1β, TNF-α, IL-6, Claudin-1、occludin, DCs, ICAM-1等指標(biāo)的相關(guān)性。 結(jié)果造模后,模型組大鼠比空白組大鼠結(jié)腸黏膜的病理炎性積分明顯升高(P0.01)；促炎細(xì)胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α的表達(dá)水平明顯升高(P0.01)；結(jié)腸粘膜DCs和MLNDCs計(jì)數(shù)明顯增多(P0.01),MLN DCs表面分子MHC-Ⅱ表達(dá)水平明顯增高(P0.01)；ICAM-1和sIC AM-1水平明顯增高(P0.01)；occludin mRNA、claudin-1mRNA, occludin、 claudin-1蛋白表達(dá)水平下降(P0.05)；NF-κB p65mRNA和NF-κB p65蛋白表達(dá)水平增高(P0.05)。經(jīng)清腸化濕方和美沙拉嗪治療后,病理炎性積分明顯降低(P0.01)；IL-6、IL-1β、TNF-α的表達(dá)水平明顯降低(P0.01)；結(jié)腸粘膜DCs和MLN DCs計(jì)數(shù)明顯減少(P0.01),MLN DCs表面分子MHC-Ⅱ表達(dá)水平明顯降低(P0.01)；ICAM-1和sICAM-1水平明顯降低(P0.01);occludin mRNA、claudin-1mRNA, occludin、claudin-1蛋白表達(dá)水平下降(P0.05);NF-κB p65mRNA和NF-κB p65蛋白表達(dá)水平降低(P0.05)。NF-κB p65與炎性積分、IL-1β, TNF-α, IL-6, Claudin-1、occludin, DCs, ICAM-1等指標(biāo)呈高度相關(guān)(P0.01)。治療前后各組大鼠MLN DCs的比例和其表面分子CD86表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；清腸化濕方和美沙拉嗪對大鼠各觀察指標(biāo)的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 結(jié)論清腸化濕方可以改善TNBS模型大鼠結(jié)腸的一般情況和炎癥病變,其機(jī)制與其可以抑制結(jié)腸黏膜NF-κB的表達(dá),從而降低促炎細(xì)胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌水平,減少結(jié)腸黏膜及MLN DCs的數(shù)目,抑制DCs的活化,降低結(jié)腸黏膜黏附分子ICAM-1的表達(dá)水平,增加UC結(jié)腸黏膜緊密連接蛋白Claudin-1、Occludin的表達(dá),恢復(fù)腸粘膜屏障功能等有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R259

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2631780