【摘要】： 目的：研究鑒定galE基因敲除后空腸彎曲菌變異株脂寡糖結(jié)構(gòu)及抗原性的改變。 方法：對galE變異株及其親代株CJ（CJ HB9313，HS:19型）進行如下實驗：①熱酚水法分別提取兩菌株脂寡糖（Lipo-oligosaccharide，LOS）；②以親代株的LOS 為抗原，全身免疫新西蘭白兔制備抗LOS血清；③選用Tricine- SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳系統(tǒng)，對親代株和galE基因變異株的LOS電泳分離，分別對其凝膠銀染、免疫印跡（兔抗血清為第一抗體，HRP標記的羊抗兔IgG為二抗）及霍亂毒素配體印跡檢查（HRP標記的霍亂毒素B亞單位為神經(jīng)節(jié)苷脂GM1的特異性配體）。 結(jié)果：①galE變異株的LOS電泳遷移較親代株快速，前者分子量約為4.5kDa，后者約5.5kDa，提示galE變異株的 LOS分子有部分喪失。②親代株的LOS可與兔抗血清特異性結(jié)合，galE變異株LOS則喪失此結(jié)合能力，進一步證明galE變異株LOS的部分抗原結(jié)構(gòu)缺失。③親代株LOS可與特異性配體CTB（霍亂毒素B亞單位）結(jié)合顯色，說明存在神經(jīng)節(jié)苷脂GM1樣結(jié)構(gòu)（位于LOS外核糖基），而galE變 WP=9 異株的LOS不能與CTB結(jié)合，表明變異株LOS缺失的正是外核部分糖基，故結(jié)合在外核上的GM1等神經(jīng)節(jié)苷脂模擬結(jié)構(gòu)也均缺失。 結(jié)論：galE變異株喪失了脂寡糖外核糖基及其神經(jīng)節(jié)苷脂GM1樣結(jié)構(gòu)，從而改變LOS的抗原性和對周圍神經(jīng)免疫致病力，，并因此可能成為CJ安全減毒活菌苗的候選菌株。
【圖文】：

Gal（半乳糖），NeuNAc（唾液酸），GalNAc（N-乙酰半乳糖），Glu（葡萄糖），Ceramid（神經(jīng)酰胺）圖 1. 常見神經(jīng)節(jié)苷脂分子結(jié)構(gòu)示意圖因一些毒素或外源凝集素能特異性識別寡糖表位，常用來檢測神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)節(jié)苷脂存在的部位及密度[2]。如霍亂毒素是GM1特異性配體，對其表位有高特異性親和力，已在Ranvier結(jié)及Schwann細胞上檢測到GM1；花生凝集素與asialo -GM1（脫唾液酸GM1）有高度親和力，在Ranvier檢測它的存在；破傷風毒素可特異結(jié)合含雙唾液酸的神經(jīng)結(jié)苷脂（如GT1b和GD1b），在周圍神經(jīng)Ranvier結(jié)及軸索檢測到GT1b和GD1b存在。GBS與神經(jīng)節(jié)苷脂抗體已有大量資料顯示GBS病人血清中存在多種神經(jīng)節(jié)苷脂抗體，并發(fā)現(xiàn)不同的抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體與不同類型的GBS相關(guān)。這些抗體在GBS發(fā)病中的作用已引起廣泛關(guān)注。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R378

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本文編號：2605374