【摘要】：目的： 本研究擬于大鼠腦出血模型上應(yīng)用ELISA、免疫組化、RT-PCR等方法，研究破血化瘀、填精補(bǔ)髓法是否通過調(diào)節(jié)NF-κB信號通路減輕腦出血后的繼發(fā)損傷機(jī)制，以論證破血化瘀、填精補(bǔ)髓法可以減輕腦出血后炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡，保護(hù)神經(jīng)功能，促進(jìn)腦組織損傷修復(fù)的假說，探索破血化瘀、填精補(bǔ)髓法治療腦出血的機(jī)制。 方法： 1.選擇正常Wistar雄性大鼠，體重240g～260g，隨機(jī)分為假手術(shù)組、腦出血模型組（模型組）、出血性中風(fēng)方劑組（方劑組）、腦血康對照組（對照組），按照自體尾動(dòng)脈血注射方法制備穩(wěn)定的腦出血模型。 2.通過神經(jīng)行為學(xué)評分、干濕重法、HE染色法觀察破血化瘀、填精補(bǔ)髓法對實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠的神經(jīng)功能缺損、腦含水量及血腫周圍腦組織病理的干預(yù)效果。 3.應(yīng)用ELISA法檢測腦出血血腫周圍腦組織的IL-1、IL-6、TNF-的表達(dá)變化。 4.應(yīng)用免疫組化法和RT-PCR法檢測NF-κB、TLR4、MyD88的蛋白表達(dá)及mRNA的變化。 結(jié)果： 1.假手術(shù)組Longa評分為0分，方劑組和對照組與模型組比較可明顯降低神經(jīng)功能缺損評分（P0.05），其中方劑組功能恢復(fù)最為明顯，與對照組比較存在顯著差異（P0.05）。 2.模型組大鼠腦含水量較假手術(shù)組增加明顯（P0.05），方劑組和對照組腦含水量與模型組比較下降明顯，其中方劑組下降更為顯著，與對照組比較存在顯著差異(P0.05）。 3.模型組與方劑組和對照組HE染色均顯示腦組織病理變化明顯，3d時(shí)病理較5d時(shí)改變更顯著，但方劑組和對照組的腦組織破壞較模型組大鼠輕。 4. ELISA法檢測3d時(shí)血腫周圍腦組織中IL-1、IL-6、TNF-含量，方劑組和對照組均低于模型組，存在顯著差異（P0.05），方劑組降低IL-1、IL-6、TNF-能力與對照組比較，無顯著性差異（P㧐0.05）。 5.腦出血后3d，NF-κB、TLR4、MyD88的表達(dá)一致。模型組與假手術(shù)組比較，模型組陽性細(xì)胞表達(dá)最強(qiáng)，數(shù)目最多，著色最深，呈棕褐色；對照組與方劑組陽性細(xì)胞中等強(qiáng)度表達(dá)，數(shù)目較少，著色為棕黃色；假手術(shù)組陽性細(xì)胞陽性表達(dá)較弱，著色為淡黃色，數(shù)目最少。其灰度值檢測，各組與模型組比較有極顯著性差異（P0.01），方劑組與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 6. RT-PCR檢測，NF-κB、TLR4、MyD88的表達(dá)一致。模型組與假手術(shù)組相比，NF-κBmRNA、TLR4mRNA、MyD88mRNA水平明顯增高（P0.01）；方劑組和對照組與模型組相比，NF-κB mRNA、TLR4mRNA、MyD88mRNA水平明顯降低（P0.05），兩者之間也有差異(P0.05）。 結(jié)論： 1.證實(shí)破血化瘀、填精補(bǔ)髓法可以明顯降低腦出血后腦水腫程度，減輕血腫周圍損傷腦組織的炎癥反應(yīng)，改善神經(jīng)功能缺損程度。 2.腦出血后血腫周圍腦組織中IL-1、IL-6與TNF-的表達(dá)增多，受損腦組織細(xì)胞形態(tài)的病理變化與其密切相關(guān)，破血化瘀、填精補(bǔ)髓法可以抑制IL-1、IL-6與TNF-的表達(dá)，對抗腦出血后的炎癥反應(yīng)。 3. NF-κB、TLR4、MyD88可在腦出血后血腫周圍受損腦組織中表達(dá)增多，破血化瘀、填精補(bǔ)髓法治療ICH的機(jī)制可能是調(diào)節(jié)NF-κB-TLR4-MyD88信號通路抑制炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡而達(dá)到“解毒”目的，并且治療由“毒損所致”的髓虛，既針對“諸毒”之標(biāo)，又兼顧“髓虛”之本而發(fā)揮治療腦出血作用。
【圖文】：

有顯著性差異（P<0.05）。如圖2-1 所示。結(jié)果提示出血性中風(fēng)方劑對腦出血的治療可通過降低 IL-1 水平發(fā)揮作用。圖 2-1 出血性中風(fēng)方劑對腦出血大鼠腦組織 IL-1 含量影響3.2 出血性中風(fēng)方劑對腦出血大鼠腦組織 IL-6 含量影響在本實(shí)驗(yàn)中，測得假手術(shù)組腦組織局部炎性因子 IL-6 水平為（28.35 3.484）pg/ml，模型組 IL-6 水平為（35.4 5.517）pg/ml，方劑組和對照組含量分別為（22.58 1.96）pg/ml、（15.34 2.65）pg/ml。如表 2-2 所示。

有顯著性差異（P<0.05），方劑組降低 IL-6 能力與對照組比較，有顯著性差異（P<0.05）。如圖2-2 所示。結(jié)果提示出血性中風(fēng)方劑可降低腦出血模型腦組織局部 IL-6 水平，，降低效果優(yōu)于對照組。圖 2-2 出血性中風(fēng)方劑對腦出血大鼠腦組織 IL-6 含量影響3.3 出血性中風(fēng)方劑對腦出血大鼠腦組織 TNF- 含量影響在本實(shí)驗(yàn)中，測得假手術(shù)組腦組織局部炎性因子 TNF- 水平為（59.22 12.55）ng/L，模型組 TNF- 水平為（84.06 16.45）ng/L，方劑組和對照組含量分別為（62 5.74）ng/L、（57.45 6.15）ng/L。如表 2-3 所示。
【學(xué)位授予單位】：長春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R277.7;R-332

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本文編號：2600142