【摘要】： 目的 一氧化碳(CO)作為一種無色無味的氣體，由含碳物質的不完全燃燒所釋放，其毒性早已為人們所知。然而，隨著生活水平的提高，一氧化碳中毒卻沒有相應的下降趨勢，在許多國家(無論是發(fā)展中國家還是發(fā)達國家)，與中毒相關的死亡50％以上由一氧化碳所引起。CO中毒除有較高的死亡率外，還有較高的致殘率。CO對人體重要器官腦和心損害極大，中毒病人經(jīng)及時治療仍有高達23-47％發(fā)生遲發(fā)性神經(jīng)精神后遺癥(delayed neuropsychologic sequelae，DNS)。輕者頭痛，失眠，記憶力減退，重者發(fā)展成腦病或精神病。由于CO中毒受害者多為青壯年，由此引發(fā)的勞動能力喪失，生活質量下降，巨大的醫(yī)療花費等又構成嚴重的社會問題。 鑒于CO中毒嚴重威脅人民的生命健康，許多學者對其進行了研究。由于損害涉及到腦，許多實驗難以在人體上進行，，只能采取間接的方法或利用動物。至今CO引起神經(jīng)精神損害的機制不清。動物研究發(fā)現(xiàn)，CO中毒后腦內(nèi)有脂質過氧化和白細胞粘附增多的情況；大鼠腦內(nèi)即早基因表達增多；CO阻礙組織對氧的利用，抑制細胞色素C氧化酶活性等。死亡病人解剖發(fā)現(xiàn)有腦白質脫髓鞘壞死，腦皮質海綿狀壞死以及海馬壞死等。國內(nèi)研究基本都是采病人外周血做一些指標的測定，CO中毒腦損害仍有許多問題需要探討。 我國也是CO中毒高發(fā)區(qū)。北方冬季寒冷，門窗緊閉，仍有許多民居用煤取暖。近年因燃氣熱水器引發(fā)的CO中毒也常有發(fā)生。1994年中國醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)院急診科調(diào)查顯示，急性CO中毒為第二位常見中毒，而死亡人數(shù)居第一位。 CO中毒的治療主要是通過供氧以促進CO從血紅蛋白解離，改善組織氧供。高壓氧(HBO)治療始于上世紀60年代末期。HBO用于CO中毒急性期效果已經(jīng)得到公認。研究認為，HBO可改善線粒體的有氧代謝，抑制脂質過氧化和中性粒細胞粘附于腦血管而引起的損害。但HBO對遲發(fā) 性神經(jīng)精神損害的效果至今仍有爭議，HBO的作用機制仍未完全闡明。對 于其他抑制腦損害的治療途徑，目前研究甚少。 本實驗利用CO中毒小鼠模型，觀察腦內(nèi)形態(tài)學（超微結構廠凋亡，自 由基釋放與清除，細胞因子變化等，并設立高壓氧治療組，觀察其對上述指 標的影響。為進一步探討CO中毒腦損害機制的研究提供實驗依據(jù)；也為 高壓氧治療的理論基礎，臨床上引人基因治療，桔抗劑治療等提供依據(jù)。 方 法 1．建立CO中毒小鼠模型 將小鼠放人自制SL染毒瓶中，密閉。瓶內(nèi)預先放置堿石灰，可吸收呼 吸產(chǎn)生的COp通過導管通人CO氣，令小鼠于瓶內(nèi)吸人濃度為2500－ 3000ppm的CO氣50－60min至昏迷。每15分鐘采樣一次50ITil，用快速檢 測管測定瓶內(nèi)CO濃度和氧濃度，使之維持于規(guī)定濃度。 2．流式細胞術測定小鼠腦內(nèi)Bcl－2，Bax，P53的表達以及凋亡細胞數(shù) ①用網(wǎng)搓法制備單細胞懸液 lx 10VInl。一抗分別用 Bcl－2，Bax或 p53 ／J’鼠IgG單抗，二抗用FITC山羊抗小鼠均 對細胞懸液進行標記。在 流式細胞儀上以488urn t激光激發(fā)，以平均熒光強度代表基因蛋白表達 量。②同法制備單細胞懸液進行PI染色。在流式細胞儀上以488urn t激光 激發(fā)，＞61O urn濾光鏡檢測。測定每樣本計數(shù)＊，皿O個細胞，經(jīng)0…SS七 軟件分析細胞數(shù)DNA分布圖，計算正常二倍體峰前AP峰曲線下面積占整 個分布曲線下面積百分比，即為凋亡細胞所占比例，用百分數(shù)表示。 3．透射電鏡觀察超微結構 取大腦，小腦，海馬區(qū)組織各約 lmm＼ 2．5％戊二醛及 1％OSO。固定， EPON812環(huán)氧樹脂包埋，LKB－V超薄切片機（500－1000A）切片，切片以 醋酸鈾檸檬酸鉛雙重染色，用H—600透射電鏡觀察。 4．分光光度法測定血腦屏障通透性 取已注射二％EB生理鹽水的小鼠腦勻漿，離心取上清．用分光光度計 在70Inm處測吸光度，根據(jù)EB含量一吸光度回歸方程計算腦組織EB含 量。 5．ELISA法測定 TNF－a、IL－lp、IL－8和 IL－10 ·2· 取腦組織勻漿，低溫離心卜t℃，120009）取上清，采用雙抗體夾心 ELISA法進行測定。根據(jù)標本OD值在各自的標準曲線上查出各種細胞因 子含量。 6．分光光度法測定小鼠腦內(nèi)NO、NOS、MDA、SOD、GSH－Px、CAT 腦組織勻漿離心取上清。用＊U—640型分光光度計在546urn（NO人 401urn和 421urn（NOS），532urn 〔MDA），550urn（SOD），405urn（CAT）， 412nm（SH－Px）處，比色測各管吸光度值。 結 果 ＊CO中毒小鼠腦內(nèi)h－2，P53人ax表達及細胞凋亡增加，高峰分別 為中毒后 lh，3天，7天；急性 CO中毒可使小鼠腦細胞凋亡，發(fā)生超微結構 改變?nèi)薕中毒后應用高壓氧治療可以減少細胞凋亡（與中毒組比較有顯著 差異八HBO抑制腦細胞超微結構的改變；急性CO中毒可使小鼠血腦屏障 通透性增高，中毒前15分鐘或中毒后30分鐘給予L－NAME均可減輕CO 中毒對血
【圖文】：

CO中毒高壓氧治療組:與對照組類似，無神經(jīng)元核固縮，無染色的團塊狀凝集及邊移。線粒體峪完整、無斷裂及空泡化，無膠質細胞腫脹及毛細血管充血擴張，但溶酶體比對照組多。見附圖1一12。圖1正常小腦膠質細胞(x8000)圖2正常大腦皮層細胞(x5000)

500050005000500O口Q口Q白O‘11，t人對照11124h圖2CO中毒大腦及小腦內(nèi)Bax表達二二/卜~飛、、一一一丫//聲\~一’\\\一一洲產(chǎn)目嘆嘆公公//一\\一一...護洲一一)))lllllr.一~-~一-一-一一口通尸臼-.祖卜~Bax大腦Bax小腦一~-一-一--一~一~00八

本文編號：2599987