【摘要】： 目的 一氧化碳(CO)作為一種無(wú)色無(wú)味的氣體，由含碳物質(zhì)的不完全燃燒所釋放，其毒性早已為人們所知。然而，隨著生活水平的提高，一氧化碳中毒卻沒(méi)有相應(yīng)的下降趨勢(shì)，在許多國(guó)家(無(wú)論是發(fā)展中國(guó)家還是發(fā)達(dá)國(guó)家)，與中毒相關(guān)的死亡50％以上由一氧化碳所引起。CO中毒除有較高的死亡率外，還有較高的致殘率。CO對(duì)人體重要器官腦和心損害極大，中毒病人經(jīng)及時(shí)治療仍有高達(dá)23-47％發(fā)生遲發(fā)性神經(jīng)精神后遺癥(delayed neuropsychologic sequelae，DNS)。輕者頭痛，失眠，記憶力減退，重者發(fā)展成腦病或精神病。由于CO中毒受害者多為青壯年，由此引發(fā)的勞動(dòng)能力喪失，生活質(zhì)量下降，巨大的醫(yī)療花費(fèi)等又構(gòu)成嚴(yán)重的社會(huì)問(wèn)題。 鑒于CO中毒嚴(yán)重威脅人民的生命健康，許多學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了研究。由于損害涉及到腦，許多實(shí)驗(yàn)難以在人體上進(jìn)行，，只能采取間接的方法或利用動(dòng)物。至今CO引起神經(jīng)精神損害的機(jī)制不清。動(dòng)物研究發(fā)現(xiàn)，CO中毒后腦內(nèi)有脂質(zhì)過(guò)氧化和白細(xì)胞粘附增多的情況；大鼠腦內(nèi)即早基因表達(dá)增多；CO阻礙組織對(duì)氧的利用，抑制細(xì)胞色素C氧化酶活性等。死亡病人解剖發(fā)現(xiàn)有腦白質(zhì)脫髓鞘壞死，腦皮質(zhì)海綿狀壞死以及海馬壞死等。國(guó)內(nèi)研究基本都是采病人外周血做一些指標(biāo)的測(cè)定，CO中毒腦損害仍有許多問(wèn)題需要探討。 我國(guó)也是CO中毒高發(fā)區(qū)。北方冬季寒冷，門(mén)窗緊閉，仍有許多民居用煤取暖。近年因燃?xì)鉄崴饕l(fā)的CO中毒也常有發(fā)生。1994年中國(guó)醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)院急診科調(diào)查顯示，急性CO中毒為第二位常見(jiàn)中毒，而死亡人數(shù)居第一位。 CO中毒的治療主要是通過(guò)供氧以促進(jìn)CO從血紅蛋白解離，改善組織氧供。高壓氧(HBO)治療始于上世紀(jì)60年代末期。HBO用于CO中毒急性期效果已經(jīng)得到公認(rèn)。研究認(rèn)為，HBO可改善線粒體的有氧代謝，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化和中性粒細(xì)胞粘附于腦血管而引起的損害。但HBO對(duì)遲發(fā) 性神經(jīng)精神損害的效果至今仍有爭(zhēng)議，HBO的作用機(jī)制仍未完全闡明。對(duì) 于其他抑制腦損害的治療途徑，目前研究甚少。 本實(shí)驗(yàn)利用CO中毒小鼠模型，觀察腦內(nèi)形態(tài)學(xué)（超微結(jié)構(gòu)廠凋亡，自 由基釋放與清除，細(xì)胞因子變化等，并設(shè)立高壓氧治療組，觀察其對(duì)上述指 標(biāo)的影響。為進(jìn)一步探討CO中毒腦損害機(jī)制的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)；也為 高壓氧治療的理論基礎(chǔ)，臨床上引人基因治療，桔抗劑治療等提供依據(jù)。 方 法 1．建立CO中毒小鼠模型 將小鼠放人自制SL染毒瓶中，密閉。瓶?jī)?nèi)預(yù)先放置堿石灰，可吸收呼 吸產(chǎn)生的COp通過(guò)導(dǎo)管通人CO氣，令小鼠于瓶?jī)?nèi)吸人濃度為2500－ 3000ppm的CO氣50－60min至昏迷。每15分鐘采樣一次50ITil，用快速檢 測(cè)管測(cè)定瓶?jī)?nèi)CO濃度和氧濃度，使之維持于規(guī)定濃度。 2．流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定小鼠腦內(nèi)Bcl－2，Bax，P53的表達(dá)以及凋亡細(xì)胞數(shù) ①用網(wǎng)搓法制備單細(xì)胞懸液 lx 10VInl。一抗分別用 Bcl－2，Bax或 p53 ／J’鼠IgG單抗，二抗用FITC山羊抗小鼠均 對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行標(biāo)記。在 流式細(xì)胞儀上以488urn t激光激發(fā)，以平均熒光強(qiáng)度代表基因蛋白表達(dá) 量。②同法制備單細(xì)胞懸液進(jìn)行PI染色。在流式細(xì)胞儀上以488urn t激光 激發(fā)，＞61O urn濾光鏡檢測(cè)。測(cè)定每樣本計(jì)數(shù)＊，皿O個(gè)細(xì)胞，經(jīng)0…SS七 軟件分析細(xì)胞數(shù)DNA分布圖，計(jì)算正常二倍體峰前AP峰曲線下面積占整 個(gè)分布曲線下面積百分比，即為凋亡細(xì)胞所占比例，用百分?jǐn)?shù)表示。 3．透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu) 取大腦，小腦，海馬區(qū)組織各約 lmm＼ 2．5％戊二醛及 1％OSO。固定， EPON812環(huán)氧樹(shù)脂包埋，LKB－V超薄切片機(jī)（500－1000A）切片，切片以 醋酸鈾檸檬酸鉛雙重染色，用H—600透射電鏡觀察。 4．分光光度法測(cè)定血腦屏障通透性 取已注射二％EB生理鹽水的小鼠腦勻漿，離心取上清．用分光光度計(jì) 在70Inm處測(cè)吸光度，根據(jù)EB含量一吸光度回歸方程計(jì)算腦組織EB含 量。 5．ELISA法測(cè)定 TNF－a、IL－lp、IL－8和 IL－10 ·2· 取腦組織勻漿，低溫離心卜t℃，120009）取上清，采用雙抗體夾心 ELISA法進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)標(biāo)本OD值在各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出各種細(xì)胞因 子含量。 6．分光光度法測(cè)定小鼠腦內(nèi)NO、NOS、MDA、SOD、GSH－Px、CAT 腦組織勻漿離心取上清。用＊U—640型分光光度計(jì)在546urn（NO人 401urn和 421urn（NOS），532urn 〔MDA），550urn（SOD），405urn（CAT）， 412nm（SH－Px）處，比色測(cè)各管吸光度值。 結(jié) 果 ＊CO中毒小鼠腦內(nèi)h－2，P53人ax表達(dá)及細(xì)胞凋亡增加，高峰分別 為中毒后 lh，3天，7天；急性 CO中毒可使小鼠腦細(xì)胞凋亡，發(fā)生超微結(jié)構(gòu) 改變?nèi)薕中毒后應(yīng)用高壓氧治療可以減少細(xì)胞凋亡（與中毒組比較有顯著 差異八HBO抑制腦細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變；急性CO中毒可使小鼠血腦屏障 通透性增高，中毒前15分鐘或中毒后30分鐘給予L－NAME均可減輕CO 中毒對(duì)血
【圖文】：

CO中毒高壓氧治療組:與對(duì)照組類似，無(wú)神經(jīng)元核固縮，無(wú)染色的團(tuán)塊狀凝集及邊移。線粒體峪完整、無(wú)斷裂及空泡化，無(wú)膠質(zhì)細(xì)胞腫脹及毛細(xì)血管充血擴(kuò)張，但溶酶體比對(duì)照組多。見(jiàn)附圖1一12。圖1正常小腦膠質(zhì)細(xì)胞(x8000)圖2正常大腦皮層細(xì)胞(x5000)

500050005000500O口Q口Q白O‘11，t人對(duì)照11124h圖2CO中毒大腦及小腦內(nèi)Bax表達(dá)二二/卜~飛、、一一一丫//聲\~一’\\\一一洲產(chǎn)目嘆嘆公公//一\\一一...護(hù)洲一一)))lllllr.一~-~一-一-一一口通尸臼-.祖卜~Bax大腦Bax小腦一~-一-一--一~一~00八

本文編號(hào)：2599987