發(fā)布時間：2020-03-25 06:47

【摘要】：第一部分建立延期直接神經(jīng)修復(fù)的大鼠模型 目的建立標準化的大鼠坐骨神經(jīng)延期修復(fù)模型,并驗證二期直接縫合神經(jīng)的可能性。 方法Lewis雌性大鼠58只,隨機分為6組,分別為及時修復(fù)(B0組,n=8)、延期1周(B1組,n=11)、4周(B2組,n=10)、6周(B3組,n=11)、8周(B4組,n=11)、12周(B5組,n=7)修復(fù)組。切斷左側(cè)坐骨神經(jīng),神經(jīng)近斷端反折后包埋于附近股肌內(nèi),遠斷端通過兩根9/0Ethilon尼龍線牽拉固定于閉孔肌腱上以防止神經(jīng)斷端回縮。經(jīng)過曠置不同時間后,用10/0Ethilon尼龍線直接縫合坐骨神經(jīng)斷端。若神經(jīng)斷端之間相距距離不大于4mm,且最大幅度反復(fù)活動左下肢后10/0Ethilon線仍牢固固定,則定義這種直接修復(fù)下的神經(jīng)吻合口處無張力。二期修復(fù)神經(jīng)手術(shù)過程中測量神經(jīng)斷端大小、相距距離、疤痕和神經(jīng)瘤大小等術(shù)中參數(shù),獲取這些模型的參數(shù)后可以確保模型的標準化和可重復(fù)性。術(shù)后4周、8周、12周分別行神經(jīng)電生理學(xué)檢測,以證實無張力縫合的神經(jīng)成功再生。 結(jié)果延期1周、4周、6周、8周及12周神經(jīng)修復(fù)組中,神經(jīng)斷端之間相距距離為0-9mm不等,均值分別為1.36、2.85、3.43、3.83及6.40mm；所有延期神經(jīng)修復(fù)的50只大鼠中,39只到達無張力縫合標準,無張力縫合的成功率為78%。術(shù)后4周時,所有組均未測到復(fù)合肌肉動作電位(compound muscle action potential, CMAP)。術(shù)后12周時,延期1周、4周組與及時修復(fù)組之間的CMAP恢復(fù)無統(tǒng)計學(xué)差異,但均顯著優(yōu)于延期6周、8周、12周組(P0.05)。 結(jié)論一種創(chuàng)新的、標準化的、可重復(fù)的大鼠坐骨神經(jīng)延期修復(fù)模型己建立,且二期手術(shù)中神經(jīng)可直接縫合,無張力神經(jīng)直接縫合的成功率達78%。要獲得效果有別于及時修復(fù)的延期神經(jīng)修復(fù)模型,自神經(jīng)切斷至二期神經(jīng)修復(fù)之間的時間間隔至少需4周。延期間隔時間越久,神經(jīng)恢復(fù)越差。具體延期時間間隔的選擇,需根據(jù)不同實驗?zāi)康挠喼啤?[關(guān)鍵詞]周圍神經(jīng)延期修復(fù)動物模型直接修復(fù)大鼠 第二部分大鼠坐骨神經(jīng)損傷后靶肌微環(huán)境變化規(guī)律及其時間過程的實驗研究 目的在大鼠坐骨神經(jīng)損傷后不同時間,檢測靶肌內(nèi)各種微環(huán)境變化的特點和規(guī)律,了解這些變化的時間過程。 方法Lewis成年雌性大鼠40只,體重200±5g,隨機分為以下5組：切斷左側(cè)坐骨神經(jīng),曠置1周(A1組,n=8)、4周(A2組,n=8)、6周(A3組,n=8)、8周(A4組,n=8)及12周(A5組,n=8)。術(shù)后檢測大鼠靶肌內(nèi)微環(huán)境：電生理學(xué)(纖顫電位)、病理組織學(xué)(肌濕重,肌橫截面積和纖維化程度,肌纖維表型)和分子生物學(xué)(MRF4、Myogenin、nAChR、MUSK、P21基因mRNA表達水平)。 結(jié)果坐骨神經(jīng)切斷后3天就可在腓腸肌內(nèi)側(cè)頭內(nèi)記錄到纖顫電位。最大纖顫電位波幅在神經(jīng)損傷后1至4周達到峰值,6周起迅速降低,最后維持在較低水平；腓腸肌、比目魚肌及脛前肌肌濕重維持率(患側(cè)/健側(cè))隨肌萎過程不斷減小,術(shù)后4周時迅速減小為40%左右,術(shù)后8周和12周基本穩(wěn)定在20%左右；脛前肌和腓腸肌內(nèi)側(cè)頭肌橫截面積隨失神經(jīng)時間不斷減小,纖維化程度隨失神經(jīng)時間不斷增大(P0.05)；腓腸肌內(nèi)側(cè)頭(混合肌)及脛前肌(快肌)的Ⅱ B型肌纖維(最快的快肌纖維)比例隨失神經(jīng)時間不斷下降(P0.05),Ⅰ型(慢肌纖維)和Ⅱ A型肌纖維(最慢的快肌纖維)比例則隨失神經(jīng)時間不斷升高(P0.05),但肌纖維總數(shù)不變,提示快肌纖維向較慢纖維轉(zhuǎn)化。比目魚肌(慢肌)的Ⅱ A型肌纖維比例隨失神經(jīng)時間不斷升高,Ⅰ型肌纖維比例隨失神經(jīng)時間不斷下降(P0.05),但肌纖維總數(shù)不變,提示慢肌纖維向快肌纖維轉(zhuǎn)化。術(shù)后4-6周是上述肌纖維表型發(fā)生變化最明顯的時刻；失神經(jīng)的腓腸肌內(nèi)側(cè)頭中Myogenin、 MUSK、nAChR、P21及MRF4基因mRNA相對表達水平先增高后降低,失神經(jīng)后4-6周時最高,之后不斷下降并維持在較低水平。 結(jié)論失神經(jīng)靶肌的最大纖顫電位波幅、肌濕重、肌橫截面積和纖維化程度、肌纖維表型、靶肌生長相關(guān)基因(Myogenin、MUSK、nAChR、P21及MRF4) mRNA相對表達水平均發(fā)生顯著變化。上述靶肌內(nèi)微環(huán)境變化與失神經(jīng)時間密切相關(guān),在失神經(jīng)后4-6周時最明顯。 第三部分不同時間延期神經(jīng)修復(fù)后靶器官恢復(fù)特點及預(yù)后相關(guān)指標的篩選 目的比較不同時間延期神經(jīng)修復(fù)的療效,篩選出與預(yù)后密切相關(guān)的指標。 方法清潔級Lewis成年雌性大鼠43只,切斷左側(cè)坐骨神經(jīng),曠置不同時間后直接縫合神經(jīng)。隨機分為以下6組：及時修復(fù)組(B0,n=8),延期1周(B1,n=8)、4周(B2,n=8)、6周(B3,n=8)、8周(B4,n=8)、12周修復(fù)組(B5,n=3)。術(shù)后每4周測量復(fù)合肌肉動作電位(compound muscle action potential, CMAP)。繼續(xù)飼養(yǎng)16周后取材,檢測大鼠靶肌的電生理學(xué)(CMAP)、最大等長收縮肌力、神經(jīng)肌肉病理組織學(xué)(肌濕重,肌橫截面積和纖維化程度,肌纖維表型,有髓神經(jīng)纖維計數(shù))和分子生物學(xué)(Myogenin、MUSK、nAChR、P21及MRF4的mRNA相對表達水平)以了解神經(jīng)肌肉功能恢復(fù)程度。通過分析上述神經(jīng)肌肉功能恢復(fù)指標與失神經(jīng)靶肌中微環(huán)境變化的相關(guān)性,篩選出與延期神經(jīng)修復(fù)療效密切相關(guān)的敏感指標。 結(jié)果延期1周、4周修復(fù)組的電生理、肌濕重、最大等長收縮肌力、有髓神經(jīng)纖維直徑和密度、有髓軸索直徑等與及時修復(fù)組相似,但均明顯優(yōu)于延期6周、8周及12周組(P0.05)；及時修復(fù)組、延期1周修復(fù)組相比延期6-12周修復(fù)組,脛前肌和腓腸肌內(nèi)側(cè)頭肌橫截面積更大(P0.05),脛前肌的纖維化程度更小(P0.05)；腓腸肌內(nèi)側(cè)頭內(nèi)MRF4、Myogenin、nAChR、MUSK、P21基因mRNA相對表達水平在各不同延期修復(fù)組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；脛前肌、腓腸肌內(nèi)側(cè)頭和比目魚肌內(nèi)各肌纖維表型的比例在各延期修復(fù)組中無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)失神經(jīng)靶肌中最大纖顫電位波幅、肌橫截面積和纖維化程度、靶肌內(nèi)ⅡB和ⅡA型肌纖維比例、nAChR基因mRNA相對表達水平與神經(jīng)修復(fù)后的功能恢復(fù)程度成線性相關(guān)(P0.05)。 結(jié)論不同時間延期神經(jīng)修復(fù)的效果不同,延期時間越長,神經(jīng)修復(fù)的效果越差；再生肌肉的肌濕重、CMAP波幅、最大等長收縮肌力和有髓鞘神經(jīng)纖維總數(shù)、直徑、密度、軸索直徑等均是反映神經(jīng)肌肉恢復(fù)程度的良好指標。及時修復(fù)、延期1周、4周修復(fù)組之間的神經(jīng)肌肉功能恢復(fù)程度無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),但均明顯優(yōu)于延期6周、8周及12周組(P0.05)。失神經(jīng)靶肌中最大纖顫電位波幅、肌橫截面積和纖維化程度、靶肌內(nèi)ⅡB和ⅡA型肌纖維比例、靶肌內(nèi)nAChR mRNA相對表達水平均是與神經(jīng)修復(fù)療效密切相關(guān)的敏感指標。
【圖文】：

從失神經(jīng)1周到12周，胚前肌和腓腸肌內(nèi)側(cè)頭橫截面積逐漸減小，，肌纖維化程度逐漸增高。不同失神經(jīng)組之間腔前肌橫截面積有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(圖9,表6)： A1>A2>A3> (A4=A5) (F=35.431, P=0.000);不同失神經(jīng)組之間腓腸肌內(nèi)側(cè)頭橫截面積有明顯統(tǒng)計學(xué)差異（圖10,表7): A1>(A2=A3)〉(A4=A5)(F=98.531，P=0.000);不同失神經(jīng)組之間腔前肌纖維化程度有明顯統(tǒng)計學(xué)差異（圖9,表6):Al< (A2=A3) <A5 <A4 (F=80.245, P=0.000);不同失神經(jīng)組之間腓腸肌內(nèi)側(cè)頭纖維化程度有明顯統(tǒng)計學(xué)差異（圖10,表7): A1<A2< (A3=A4) <A5 (F=40.008,p=0.000) =LTA ITA9.n「 ；ifl「4n t N

最大等長收縮肌力恢復(fù)率明顯比即時修復(fù)、延期1周、4周修復(fù)組差（P<0.05)(圖2及表2)。所以，4周之內(nèi)的延期神經(jīng)修復(fù)，祀肌最大等長收縮肌力恢復(fù)與即時神經(jīng)修復(fù)之間無統(tǒng)計學(xué)差異。3C. 00% ■EG. 00? - J --7C. CC% ? T■_ ■ ■ ■■ I ■ ■ ■ ■ ■00% ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■G GC% ^—I——I—^ 1—^—I—^—I 1B- 53：?=} 551^3*=：蓋叛(MM^m圖2:術(shù)后16周時左腔前肌最大等長收縮肌力恢復(fù)率表2:各組中左腔前肌最大等長收~.肌力恢復(fù)率（x±5) (%) 即時修 延期1周延期4周延?
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R651.3;R-332

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 徐建廣,顧玉東;失神經(jīng)支配骨骼肌退變組織形態(tài)學(xué)及電生理實驗研究[J];中國修復(fù)重建外科雜志;1999年04期

本文編號：2599564