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關(guān)于低能沖擊波對(duì)T淋巴細(xì)胞的作用及其作用機(jī)理的探討

發(fā)布時(shí)間:2020-03-23 09:39
【摘要】:沖擊波是壓力急劇變化的產(chǎn)物,能在幾納秒內(nèi)達(dá)到它的壓力最大值。沖擊波的負(fù)相波段可引起空化反應(yīng)。沖擊波產(chǎn)生的快速上升的正相壓力波和空化反應(yīng)引起的微泡爆炸噴射會(huì)促使被作用物體表面的張力增加。一定的張力作用可使物體發(fā)生破裂。由于其這一特性,長(zhǎng)期以來,高能沖擊波一直被用于體外治療泌尿系統(tǒng)的結(jié)石,并且取得了良好的療效。近年來人們發(fā)現(xiàn),低能沖擊波對(duì)骨折愈合有促進(jìn)作用,并且將沖擊波應(yīng)用到骨不連的治療中,結(jié)果顯示沖擊波對(duì)肥大型骨不連治愈率幾乎達(dá)到100%,對(duì)營(yíng)養(yǎng)不良型骨不連的療效不理想,這和手術(shù)治療的結(jié)果相似。同時(shí)歐洲人又將沖擊波用于慢性肌腱炎的治療,如治療肱骨外上髁炎、足底筋膜炎和鈣化性肌腱炎等,也取得了理想療效,與傳統(tǒng)的非手術(shù)療法相比,沖擊波療效更鞏固,和手術(shù)治療相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異。這樣關(guān)于低能沖擊波的應(yīng)有基礎(chǔ)研究開始展開。早在1986年Haupt就發(fā)現(xiàn)低能沖擊波可促進(jìn)小豬的創(chuàng)口愈合,而加大沖擊波的強(qiáng)度則會(huì)抑制創(chuàng)口的愈合;形態(tài)學(xué)上的觀察顯示:低能沖擊波會(huì)使小豬創(chuàng)口內(nèi)的毛細(xì)血管、新生上皮細(xì)胞和巨嗜細(xì)胞的數(shù)量明顯增加,是對(duì)照組的二倍。中國(guó)臺(tái)北的Wang發(fā)現(xiàn),能損傷細(xì)胞膜但不損傷其它細(xì)胞器的低能沖擊波可誘導(dǎo)人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞向骨原細(xì)胞分化并誘導(dǎo)骨小節(jié)形成。 那么,為什么低能沖擊波能產(chǎn)生如此的生物學(xué)效應(yīng)呢?對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生一定應(yīng)力和應(yīng)變的機(jī)械刺激,會(huì)引起細(xì)胞內(nèi)的ATP快速釋放。一旦ATP被釋放到細(xì)胞外的環(huán)境中,其會(huì)與表達(dá)在幾乎所用哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜表面的P2X和/或P2Y受體相互作用,激活細(xì)胞內(nèi)的傳導(dǎo)路途經(jīng),調(diào)節(jié)細(xì)胞的功能和代謝。同時(shí)ATP的代謝產(chǎn)物(腺苷adenosine)也和細(xì)胞表面的P1受體相互作用。這樣細(xì)胞外的ATP和其代謝產(chǎn)物通過它們的受體,對(duì)T淋巴細(xì)胞的功能產(chǎn)生很強(qiáng)的影響:ATP可促使小鼠的胸腺細(xì)胞增殖,,ATP和腺苷將會(huì)抑制/或增強(qiáng)由T淋巴細(xì)胞受體激活的信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡或胸腺細(xì)胞分化。 沖擊波會(huì)對(duì)細(xì)胞表面產(chǎn)生一定的應(yīng)力和應(yīng)變的機(jī)械刺激。如果能損傷細(xì)胞膜而不損傷其它細(xì)胞器的低能沖擊波作用T淋巴細(xì)胞,將會(huì)產(chǎn)生什么樣的影響呢? 該低能沖擊波能否引起細(xì)胞內(nèi)的ATP快速釋放?釋 WP=99 放到細(xì)胞外的ATP是否通過激活P2受體,引起相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)呢?關(guān)于這方面的研究,國(guó)內(nèi)外未見報(bào)道。 另外,有絲分裂原激活蛋白激酶p38 (p38 MAPK)結(jié)構(gòu)上和酵母菌的壓力敏感蛋白HOG-1(the products of Saccharomyces cerevisiae osmosensing gene)蛋白相似。在受到高滲透壓作用時(shí),酵母菌細(xì)胞通過HOG-1蛋白調(diào)節(jié)基因表達(dá)。高滲透壓或機(jī)械刺激作用可使人T淋巴細(xì)胞的p38 MAPK被激活,促進(jìn)T淋巴細(xì)胞分泌IL-2。這樣我們不禁要問:是否低能沖擊波通過激活 p38 MAPK,對(duì)T淋巴細(xì)胞的功能產(chǎn)生影響?關(guān)于這方面的研究,國(guó)內(nèi)外未見報(bào)道。 為了檢驗(yàn)這一假說,我們用Balb/c小鼠的脾細(xì)胞和人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)來研究低能沖擊波對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖的影響。用人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)和人Jurkat T細(xì)胞來研究低能沖擊波對(duì)T淋巴細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)和分泌IL-2的影響。 研究目的: 研究低能沖擊波是否促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖及分泌IL-2;研究低能沖擊波是否通過激活細(xì)胞內(nèi)的有絲分裂原激活蛋白激酶p38(p38 MAPK)增強(qiáng)激活的T淋巴細(xì)胞增殖及分泌IL-2;探討是否細(xì)胞內(nèi)ATP向外釋放是低能沖擊波影響T淋巴細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)和功能的潛在機(jī)理。 材料和方法: 研究低能沖擊波是否能促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖及分泌IL-2 先將Balb/c小鼠脾細(xì)胞、PBMC或Jurkat T細(xì)胞,用0.18mJ/mm2的低能沖擊波分別作用0、100、150、200、250、300、320、360和420次。之后再立即用刀豆蛋白A(ConA)的亞刺激量作用Balb/c小鼠脾細(xì)胞,植物血凝素(PHA)的亞刺激量作用PBMC,或抗-CD3及抗-CD28抗體的亞刺激量作用Jurkat T細(xì)胞,同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照組。繼續(xù)放入5%CO2,37℃孵箱,繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí),用3H-TdR摻入法檢測(cè)低能沖擊波對(duì)激活的T淋巴細(xì)胞增殖的影響;或繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí),用生物活性分析法通過CTLL-2細(xì)胞檢測(cè)低能沖擊波對(duì)T淋巴細(xì)胞分泌IL-2的影響。 研究p38 MAPK在低能沖擊波促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖和分泌IL-2的作 WP=100 用 預(yù)先用p38 MAPK抑制劑( SB203580/20uM)和PBMC或Jurkat細(xì)胞37°C孵育箱共育1小時(shí),再用沖擊波和PHA或抗-CD3/抗-CD28抗體的亞刺激量作用,之后48小時(shí)用PBMC檢測(cè)低能沖擊波對(duì)激活的T淋巴細(xì)胞增殖的影響,或24小時(shí)用Jurkat細(xì)胞檢測(cè)低能沖擊波對(duì)T淋巴細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素-2(IL-2)的影響。設(shè)無上述拮抗劑和抑制劑的陰性對(duì)照組。通過用免疫印跡法(Western Immunoblotting),用抗- p38MAPK抗體及抗-磷酸化的p38MAPK(Thr180/Tyr182)抗體,測(cè)定Jurkat T細(xì)胞上的p38 MAPK的表達(dá)及磷酸化。 研究是否細(xì)胞內(nèi)ATP向外釋放是低能沖擊波影響T淋巴細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)和功能的潛在機(jī)理 用人Jurkat T細(xì)胞通過ATP熒光試劑盒來檢測(cè)低能沖擊波是否引起T細(xì)胞分泌ATP。預(yù)先用P2X7受體的拮抗劑(KN-62/0.1uM)、P2受體的拮抗劑(suramin/200uM)、p38MAPK抑制劑( SB203580/0-50uM)或Ca2+螯合劑(EGTA/2mM) 和PBMC或Jurkat細(xì)胞37°C孵育箱共育1小時(shí),之后用PBMC檢測(cè)低能沖擊波對(duì)激活的
【圖文】:

體外沖擊波,博士學(xué)位論文,作用機(jī)理,壓電式


林大學(xué)博士學(xué)位論文 關(guān)于低能沖擊波對(duì) T 淋巴細(xì)胞的作用及其作用機(jī)理的探Research on the effects of low-density shockwaves on T cells and their biologic mechan
【學(xué)位授予單位】:吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2004
【分類號(hào)】:R392

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