【摘要】： 帕金森�。≒D）是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性疾病，其典型的病 理改變?yōu)橹心X黑質(zhì)的多巴胺能神經(jīng)元變性壞死，導(dǎo)致紋壯體內(nèi)多巴胺含 量減少，引起一系列的臨床癥狀。長期以來，口服左旋多巴一直是治療 PD的主要療法，但隨著病程的進(jìn)展，L-DOPA的療效逐漸下降并且出 現(xiàn)病人難以忍受的副作用，目前認(rèn)為基因治療是最有成功希望的方法之 一。本工作根據(jù)基因治療需要，在四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，構(gòu)建了兩 個(gè)能通過四環(huán)素誘導(dǎo)調(diào)控治療基因表達(dá)的通用型重組腺相關(guān)病毒載體質(zhì) 粒，通過攜帶的標(biāo)記基因觀察其功能和TH基因在轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及 調(diào)控，并探討了腺病毒（Ad）和單純皰疹病毒（HSV）對(duì)重組腺相關(guān) 病毒載體中四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)的影響。主要功能和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1．構(gòu)建了pSVtTA、pSVbitTA兩個(gè)通用型四環(huán)素誘導(dǎo)調(diào)控基因表 達(dá)的腺相關(guān)病毒載體質(zhì)粒，把四環(huán)素反應(yīng)啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄激活子、多克隆 酶切位點(diǎn)等元件裝置在兩個(gè)ITR之間，外側(cè)還帶有新霉素、氨卞青霉素 抗性表達(dá)盒，是真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒。 2．將綠色熒光蛋白分別克隆到pSVtTA、pSVbitTA載體上，轉(zhuǎn)染 BHK-21細(xì)胞系，觀察到基因表達(dá)，其表達(dá)量受四環(huán)素的衍生物強(qiáng)力霉 素調(diào)控，呈劑量依賴關(guān)系。 3．將攜帶綠色熒光蛋白的兩個(gè)載體質(zhì)粒包裝成重組腺相關(guān)病毒， 能夠在感染的HEK293、BHK-21細(xì)胞中表達(dá)，其表達(dá)量受四環(huán)素的衍 生物強(qiáng)力霉素調(diào)控，，并觀察了Ad和HSV對(duì)重組腺相關(guān)病毒載體中四 環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)的影響。 4．將TH基因克隆到pSVbitTA載體上，轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞，免 疫酶細(xì)胞化學(xué)方法觀察到TH基因表達(dá)強(qiáng)度隨強(qiáng)力霉素的濃度不同發(fā)生 變化，可以用四環(huán)素類藥物進(jìn)行誘導(dǎo)調(diào)控其表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號(hào)】：R742.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 徐國恒,凌雁,萬有,王曉民,韓濟(jì)生;人TH基因重組腺病毒的構(gòu)建及生物學(xué)活性研究[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;1998年04期

本文編號(hào)：2588737