【摘要】： 乙型肝炎(hepatitis B,HB)是世界范圍內(nèi)流行的一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病,由乙型肝炎病毒(HBV hepatitis B virus)引起.我國(guó)是乙肝高流行區(qū),大約有1.12億人慢性感染HBV,占全世界感染者的30%以上.乙肝疫苗是預(yù)防感染乙型肝炎和降低乙肝病毒攜帶率的最有效措施.但是,5-10%的個(gè)體在按標(biāo)準(zhǔn)程序接種乙肝疫苗后不能產(chǎn)生足夠的抗體以抵抗乙肝病毒的感染. HBsAg-BP(Hepatitis B surface antigen binding protein,SBP)是本室以血清來源的乙肝表面抗原(HBsAg)為探針,通過印跡免疫技術(shù)從人肝cDNA噬菌體表達(dá)庫(kù)中篩選獲得,其特征是可以與乙肝表面抗原HBsAg特異性的相互作用.在本室前期的研究工作中,我們構(gòu)建了原核表達(dá)載體pBV-SBP,用Ecoli大量表達(dá)重組SBP,并證實(shí)其具有增強(qiáng)乙肝疫苗免疫效果的作用. 本文將SBP表達(dá)框克隆到在畢赤酵母表達(dá)載體pPICZαA中,通過電擊法轉(zhuǎn)化畢赤酵母菌株GS115,獲得能夠分泌表達(dá)SBP的GS115轉(zhuǎn)化菌株;對(duì)培養(yǎng)工藝進(jìn)行了優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)SBP表達(dá)菌株在pH為6.0,誘導(dǎo)劑甲醇濃度為1.0-1.5%的BMMY中誘導(dǎo)96小時(shí),達(dá)到最佳表達(dá)水平,可以加入終濃度為50μg/ml的Amp和15μg/ml的Kan以防止染菌及2mM的EDTA以抑制降解且不影響蛋白表達(dá);在最優(yōu)條件下誘導(dǎo)表達(dá)SBP并收集培養(yǎng)液,通過超濾和親和層析的方法純化獲得了一定量的重組SBP蛋白,ELISA法證實(shí)重組SBP具有與HBsAg特異性結(jié)合的能力,并用多種方法計(jì)算了二者間親和常數(shù),在小鼠免疫實(shí)驗(yàn)中證實(shí)重組SBP具有乙肝疫苗免疫增效作用.
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王四清,田淑芳,許洪林,郭斐,王文,陳紅,王秀平,王世峰,阮力;CpG對(duì)乙型肝炎基因重組(CHO細(xì)胞)疫苗免疫效果的影響[J];病毒學(xué)報(bào);2002年02期

2 陳瑩;袁漢英;李海;呂紅;;畢赤酵母YPS1基因的失活對(duì)減少重組人血清白蛋白降解的作用[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年03期

3 童巖,邊傳周,鄭純寧;新型免疫佐劑研究進(jìn)展[J];河南農(nóng)業(yè)科學(xué);2005年07期

4 劉建勛,石浩,楊建國(guó),付朝紅,韓同武,任清雨,左洪靈;應(yīng)用白介素-2誘導(dǎo)乙肝疫苗免疫無應(yīng)答者特異性免疫反應(yīng)的研究[J];河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;1999年03期

5 秦剛,施光峰;治療性乙型肝炎疫苗研究進(jìn)展[J];中國(guó)抗感染化療雜志;2005年02期

6 歐陽(yáng)立明,張惠展,張嗣良,劉志敏;巴斯德畢赤酵母的基因表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2000年02期

7 胡興斌,尹文,徐志凱;增強(qiáng)乙型肝炎疫苗免疫效果的研究進(jìn)展[J];生命科學(xué)研究;2004年S2期

8 李晶,趙曉祥,沙長(zhǎng)青,張淑梅,田潔萍;甲醇酵母基因表達(dá)系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J];生物工程進(jìn)展;1999年02期

9 陳媛媛,朱乃碩;一種新的乙型肝炎病毒表面抗原結(jié)合蛋白的篩選、表達(dá)及其生物學(xué)活性的初步研究[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2005年01期

10 馮立,胡顯文,陳惠鵬;治療性乙型肝炎疫苗研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通訊;2004年03期

，

本文編號(hào)：2585853