發(fā)布時(shí)間：2020-03-09 07:08

【摘要】： 傷寒沙門菌和甲型副傷寒沙門菌是引起傷寒和副傷寒的主要致病菌,目前傷寒和副傷寒在全世界尤其在東南亞、非洲等許多發(fā)展中國家依然是一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì),2004年全球約有2160萬人患傷寒,541萬人患副傷寒,共導(dǎo)致約22萬人死亡。在我國傷寒和副傷寒是重點(diǎn)防治的傳染病之一,被列為乙類傳染病。1990年以前,我國不同地區(qū)傷寒、副傷寒發(fā)病率在10/10萬-50/10萬之間波動(dòng),1990年以后,發(fā)病率有所降低,在4.08/10萬-10.45/10萬之間。但是近年出現(xiàn)新的流行趨勢,甲型副傷寒在一些省份出現(xiàn)并迅速流行,在局部地區(qū)甲型副傷寒甚至超過傷寒成為優(yōu)勢菌感染,并表現(xiàn)為流行地區(qū)逐漸擴(kuò)大。 在傳染病的監(jiān)測、暴發(fā)識(shí)別和追蹤溯源方面,分子分型方法對(duì)病原學(xué)的分析有著重要的作用。脈沖場凝膠電泳技術(shù)(PFGE)是分子分型的重要技術(shù)之一,它重復(fù)性好、結(jié)果穩(wěn)定、易于標(biāo)準(zhǔn)化,已在分子流行病學(xué)分析中得到了廣泛應(yīng)用。本研究使用PulseNet Asia Pacific推薦的基于鼠傷寒沙門菌的PFGE分型方案,初步建立了我國傷寒沙門菌的PPGE分型數(shù)據(jù)庫。數(shù)據(jù)庫所有的菌株為中國疾病預(yù)防控制中心傳染病控制所(ICDC)保存的我國自1959年至2007年期間分離的傷寒沙門菌菌株共930株,XbaⅠ酶切PFGE電泳后用BioNumerics(Rersion 4.0)數(shù)據(jù)庫軟件處理,構(gòu)建我國傷寒沙門菌分離株的PFGE分型數(shù)據(jù)庫,并進(jìn)行聚類分析(UPGMA),聚類相似性系數(shù)在41.4%-100%之間,可分為456種帶型,每種帶型包含1～44株菌,平均每種帶型包含2株菌,38種帶型在不同的省份交叉出現(xiàn),而418種帶型屬于每個(gè)省份的獨(dú)特的帶型,63種帶型在不同的年份交叉出現(xiàn),其余的393種帶型屬于每個(gè)年份的獨(dú)特的帶型。各地之間存在著差異明顯的多個(gè)克隆系,并在不同的年份出現(xiàn),提示了這些分離株的變異度比較大。而有些帶型在不同年份的反復(fù)出現(xiàn),反應(yīng)了傷寒沙門菌不斷變異中的一種相對(duì)的穩(wěn)定型。本數(shù)據(jù)庫能夠與國際實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)連接和共享,可以為我國傷寒監(jiān)測分析以及國際化的傷寒預(yù)警和應(yīng)急反應(yīng)服務(wù)。 由于發(fā)達(dá)國家甲型副傷寒發(fā)病率很低,在0.4/10萬-3.7/10萬之間,多呈散發(fā),PulseNet公布的沙門菌PFGE標(biāo)準(zhǔn)化方案主要是針對(duì)鼠傷寒沙門菌血清型。近年來,甲型副傷寒在我國和東南亞國家引起流行,在對(duì)甲型副傷寒沙門菌分離株的監(jiān)測分析中,發(fā)現(xiàn)使用針對(duì)鼠傷寒沙門菌的PFGE分型方案在用于甲型副傷寒沙門菌的分析時(shí),其分辨能力有限。為探索更適合于甲型副傷寒沙門菌分離株的PFGE分析程序,因此在本研究中對(duì)核酸內(nèi)切酶以及PFGE電泳參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化篩選,選擇XbaⅠ、SpeⅠ和XhoⅠ三種限制性內(nèi)切酶作為選定的內(nèi)切酶,在甲型副傷寒沙門菌的PFGE分子分型的幾種電泳參數(shù)中,通過比較選擇每種酶區(qū)分能力最強(qiáng)的電泳參數(shù),并選出一種首選酶的PFGE分析過程。對(duì)于每種酶選擇不同的電泳參數(shù)對(duì)甲型副傷寒沙門菌菌株進(jìn)行分析,通過比較不同參數(shù)的電泳圖譜獲得的分辨率,選擇三種酶的具有最大區(qū)分能力的電泳參數(shù),進(jìn)一步確定最佳的酶。通過對(duì)來自不同年代和不同地區(qū)的33株甲型副傷寒沙門菌進(jìn)行相似度和分辨率的分類和比較分析,發(fā)現(xiàn)使用XbaⅠ酶切的PFGE電泳參數(shù)1.5-29s,20h;使用SpeⅠ酶切的PFGE電泳參數(shù)1-20s,20h;使用XhoⅠ酶切的PFGE電泳參數(shù)2.2-29s,20h,分辨率最高,分成的型別最多分別為17種,23種和15種。再對(duì)這三種酶進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)SpeⅠ的分辨率最佳,由此確定甲型副傷寒PFGE最佳內(nèi)切酶和電泳參數(shù)。利用該優(yōu)化條件能夠提高甲型副傷寒沙門菌分離株P(guān)FGE分型的分辨率,利于暴發(fā)流行的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測分析。
【圖文】：

酶切圖譜上相同片段在 XbaⅠ選定的參數(shù)，，左邊突出顯示的數(shù)字表示相應(yīng)箭片段之間距離與最大最小片段之間距離條件側(cè)重區(qū)分的片段大小�？梢�，X段區(qū)分能力最強(qiáng)；X-b對(duì)每個(gè)區(qū)間的X-aX-b X-c

Ⅰ限制性酶切圖譜上相同片段在 XbaⅠ選定的三種電示電泳參數(shù)，左邊突出顯示的數(shù)字表示相應(yīng)箭頭處中對(duì)應(yīng)片段之間距離與最大最小片段之間距離的百反映三種條件側(cè)重區(qū)分的片段大小�？梢�，X-a對(duì)>0.1 kb的片段區(qū)分能力最強(qiáng)；X-b對(duì)每個(gè)區(qū)間的區(qū)分310.1138.954.720.545.024.018.512.529.929.924.016.222.033.027.816.7X-aX-b X-c
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R378

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 陳惠娟;北京地區(qū)肉雞場沙門氏菌的流行性、耐藥性及分子分型研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2585755