【摘要】： 目的: 1、通過(guò)比較和優(yōu)化用于SDS-PAGE電泳分析的血清樣品制備方法,建立簡(jiǎn)便、靈敏的適合血清的小分子蛋白差異比較的技術(shù)。 2、運(yùn)用生物學(xué)定量軟件對(duì)SDS-PAGE膠圖進(jìn)行分析,將電泳條帶的分子量和灰度進(jìn)行量化處理,轉(zhuǎn)換為可用于統(tǒng)計(jì)分析的數(shù)字形數(shù)據(jù)。 3、用生物信息學(xué)分析方法對(duì)所建立的用串聯(lián)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換方法將一維凝膠電泳技術(shù)用于血清差異蛋白組學(xué)研究的可行性進(jìn)行驗(yàn)證。 方法: 1、運(yùn)用鹽析法、有機(jī)溶劑法和親和層析柱法去除血清中高豐度蛋白,經(jīng)蛋白濃度測(cè)定和SDS-PAGE電泳分析,比較各方法對(duì)高豐度蛋白去除效果及小分子蛋白保留和分布情況。 2、分別使用二層Tris-SDS-PAGE法、三層Tris-SDS-PAGE法、Tricine-SDS-PAGE法、尿素-Tricine-SDS-PAGE法對(duì)樣品進(jìn)行分離,比較各方法對(duì)小分子蛋白分離的效果。 3、運(yùn)用凝膠成像系統(tǒng)中的定量軟件Quantity One對(duì)各電泳圖上的各條帶進(jìn)行定量分析,將圖形結(jié)果轉(zhuǎn)換為數(shù)據(jù)結(jié)果。 4、將上述技術(shù)用于正常人和肝癌病人的血清的小分子蛋白差異分析,驗(yàn)證該研究方法的可行性。 結(jié)果: 1、乙腈沉淀法能去除血清樣品中90%左右的高、中豐度蛋白,同時(shí)可殘留更多15kDa以下的小分子蛋白;鹽析沉淀法和親和層析柱法均能去除血清樣品中大部分高豐度蛋白,但這兩種方法去除高豐度蛋白后所得的15kDa以下的小分子蛋白較乙腈沉淀法所得到的相應(yīng)蛋白少,且親和層析柱法更能特異地只去除血清中的白蛋白和免疫球蛋白。 2、尿素-Tricine-SDS-PAGE能很好地分離血清中的小分子蛋白,比15%的二層Tris-SDS-PAGE、15%的三層Tris-SDS-PAGE、Tricine-SDS-PAGE分離效果更好,15kD以下的蛋白條帶清晰可見(jiàn),更適合用軟件對(duì)各小分子量條帶進(jìn)行Quantity One軟件定量分析。 3、運(yùn)用同前所述凝膠定量軟件Quantity One對(duì)膠圖中的泳道/條帶進(jìn)行定量法、等高線(xiàn)定量法分析并將結(jié)果轉(zhuǎn)換為數(shù)據(jù)后用SPSS13.0生物統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果表明,在ρ0.05,有10個(gè)條帶具有顯著差異。 結(jié)論: 1、用1.2倍體積乙腈沉淀法處理血清樣品可在去除絕大部分高、中豐度蛋白的同時(shí)收獲更多的15kDa以下的小分子量蛋白,適合用SDS-PAGE法對(duì)血清中15kDa以下的蛋白進(jìn)行差異研究。 2、尿素-Tricine-SDS-PAGE電泳在分離用乙腈沉淀法去除高豐度蛋白的血清樣品中具有明顯優(yōu)勢(shì),15kDa以下的小分子條帶清晰。 3、使用凝膠定量軟件Quantity One對(duì)經(jīng)尿素-Tricine-SDS-PAGE分離的乙腈法去除高豐度蛋白的血清樣品進(jìn)行分析,具有可行性。 4、用以上所確定的最適方法對(duì)正常人和肝癌患者血清進(jìn)行驗(yàn)證分析,表明一維凝膠電泳技術(shù)在血清差異蛋白初期比較研究中具有一定的可行性。
【圖文】：

度5%）；電泳上樣量為18μl，恒壓80V電泳至溴酚藍(lán)進(jìn)入分離膠后將電壓升至120V，恒壓電泳至溴酚藍(lán)到達(dá)凝膠底部，該實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果一致，僅出示一次電泳結(jié)果，電泳結(jié)果如圖1-1所示，在200kDa至25kDa之間存在大量高豐度蛋白，在15kDa至10kDa之間的小分子蛋白無(wú)法清晰顯示。圖1-1 未除高豐度蛋白前三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品池SDS-PAGE圖。1為Fermentas Page Ruler蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（分子量200，150，120，100，85，70

圖1-2 不同濃度硫酸銨沉淀標(biāo)準(zhǔn)樣品池SDS-PAGE圖。1為Fermentas Page Ruler蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（分子量200，150，，120，100，85，70，60，50
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R341

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳主初;腫瘤蛋白質(zhì)組學(xué)的研究進(jìn)展[J];癌癥;2004年02期

2 張國(guó)安,許雪姣,張素艷,樊惠芝,楊們?cè)?蛋白質(zhì)組的分離與分析及其應(yīng)用進(jìn)展[J];分析化學(xué);2003年05期

3 楊濤,楊金亮,魏于全;SELDI蛋白芯片技術(shù)及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J];腫瘤防治雜志;2004年10期

4 蘭彥,錢(qián)小紅,王閣,李勇,羅凌,柳正良,賀福初;蛋白質(zhì)組分析中蛋白質(zhì)分步提取方法的建立[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2001年03期

5 盛泉虎,解濤,丁達(dá)夫;串聯(lián)質(zhì)譜數(shù)據(jù)的從頭解析與蛋白質(zhì)的數(shù)據(jù)庫(kù)搜索鑒定[J];生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào);2000年06期

6 陳亞飛,孫宇,高豐衣,周立娜,徐康森;SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定蛇毒抗瘤蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量[J];中國(guó)生化藥物雜志;2004年05期

7 ;功能蛋白質(zhì)組學(xué)[J];生命的化學(xué);1998年06期

8 張曉楠,曹云新,程司X,張延鳳;用于測(cè)定小分子多肽的兩種電泳方法的比較[J];生物工程進(jìn)展;2001年03期

9 曹佐武;有效分離1kDa小肽的Tricine-SDS-PAGE方法[J];中國(guó)生物工程雜志;2004年01期

10 呂茂民,章金剛;生物質(zhì)譜技術(shù)及其應(yīng)用[J];生物技術(shù)通報(bào);2001年04期

本文編號(hào)：2584481