【摘要】： 核酸疫苗是由抗原編碼基因和真核表達(dá)載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒,將其導(dǎo)入機(jī)體后可誘導(dǎo)機(jī)體全面的免疫應(yīng)答。與傳統(tǒng)的蛋白免疫相比具有制作簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)安全、易于貯存運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn),自發(fā)現(xiàn)以來已越來越引起人們的重視,成為第三代疫苗,被廣泛用于各種感染性疾病的防治研究中,我們實(shí)驗(yàn)室將核酸疫苗引入了性別控制領(lǐng)域。 在性別決定和性別分化過程中,SRY/Sry基因是公認(rèn)的哺乳動(dòng)物性別決定基因。研究表明,基因正常表達(dá)個(gè)體就發(fā)育成雄性;相反,如果基因缺失或突變個(gè)體就發(fā)育成雌性。小鼠的性別決定發(fā)生在10.5～12.5 dpc,Sry基因也僅在此時(shí)表達(dá)。所以,性別控制可以圍繞著SRY/Sry基因展開。 我們實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)通過對(duì)小鼠進(jìn)行肌肉注射Sry核酸疫苗的方法初步實(shí)現(xiàn)了XY胚胎向雌性反轉(zhuǎn)的性別控制,獲得了XY雌性個(gè)體。本實(shí)驗(yàn)就Sry核酸疫苗的作用途徑進(jìn)行了初步探索,以便對(duì)此疫苗進(jìn)行更深入的研究。 實(shí)驗(yàn)中,首先檢測(cè)了核酸疫苗的體外、體內(nèi)表達(dá)情況。在體外實(shí)驗(yàn)中,將pCR3.1-Sry瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞,分別用RT-PCR和間接免疫熒光法檢測(cè)質(zhì)粒在細(xì)胞中的表達(dá);體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,用pCR3.1-Sry肌肉注射小鼠,一周后分別提取小鼠肝臟、脾臟、肌肉、子宮組織的RNA,RT-PCR的方法檢測(cè)質(zhì)粒在這些組織處的表達(dá);其次,對(duì)小鼠進(jìn)行肌肉注射pCR3.1-Sry,隔一周后進(jìn)行二免,二免后一周眼眶取血制備抗血清;構(gòu)建pET21b-Sry重組質(zhì)粒并原核表達(dá)Sry蛋白做為抗原,用夾心法ELISA對(duì)獲得的抗血清進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明:不管在體內(nèi)還是體外,核酸疫苗pCR3.1-Sry可以在真核細(xì)胞中正常表達(dá);在肌肉注射免疫小鼠后,可以引起機(jī)體產(chǎn)生特異性的anti-Sry的抗體。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明:Sry核酸疫苗的確是引起了小鼠的體液免疫,其作用途徑可能就是通過產(chǎn)生的特異性抗體與Sry蛋白結(jié)合而影響了Sry蛋白正常作用而實(shí)現(xiàn)性別逆轉(zhuǎn)的。
【圖文】：

圖2SRY的HMG和DNA復(fù)合物的核磁共振結(jié)構(gòu)ox特異結(jié)合DNA時(shí)，小鼠SRY蛋白(mSRY)和人類SRYmSRY與DNA結(jié)合的特異性明顯強(qiáng)于hSRY與DNA結(jié)合式也是不同的，，甲基化干擾分析和ATGC堿基替代實(shí)，而mSRY蛋白主要結(jié)合DNA的大溝;③hSRY蛋白85。和60。，這種彎曲程度上的不同可能是由于蛋白上的差異造成的〔36]。另外，人SRY蛋白和小鼠SRY鼠的sRY蛋白富含谷氨酸的重復(fù)區(qū)域而人的sRY蛋佇凈贊月心準(zhǔn)翻峨聊螂蜘涵顴

彎曲程度分別為85。和60。，這種彎曲程度上的不同可能是由于蛋白與DNA的親和力以及與DNA的識(shí)別模式上的差異造成的〔36]。另外，人SRY蛋白和小鼠SRY蛋白都有HMG區(qū)域，它們的區(qū)別在于小鼠的sRY蛋白富含谷氨酸的重復(fù)區(qū)域而人的sRY蛋白沒有〔37，(圖3)。豹‘甘介翻介8只丫琦弓色佇凈贊月心l…篡默其竊舞準(zhǔn)翻峨聊螂蜘涵顴豹自O(shè)U名eSR丫圖3人SRY和小鼠SRY蛋白結(jié)構(gòu)域的區(qū)別
【學(xué)位授予單位】：首都師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號(hào)：2579196