【摘要】： 目的:觀察慢性應(yīng)激后大鼠海馬蛋白質(zhì)表達(dá)情況,探索應(yīng)激致海馬損傷的相關(guān)蛋白質(zhì)。方法:將成年雄性Wistar大鼠束縛3周建立慢性應(yīng)激動物模型,提取海馬組織蛋白質(zhì)。將對照組和應(yīng)激組海馬總蛋白進(jìn)行雙向凝膠電泳分離,通過比較對照組和慢性應(yīng)激組大鼠海馬蛋白質(zhì)的2-DE譜圖,尋找束縛應(yīng)激導(dǎo)致的差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)。將差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫檢索鑒定。采用western blot方法對差異表達(dá)蛋白α-突觸核蛋白(α-Synuclein)和動力蛋白1 (Dynamin1)表達(dá)情況進(jìn)行驗(yàn)證,并通過熒光定量PCR技術(shù)對其mRNA水平進(jìn)行檢測。通過檢測不同應(yīng)激強(qiáng)度大鼠海馬LTP以及細(xì)胞模型中FM1-43熒光染色情況的變化對動力蛋白1在應(yīng)激致海馬損傷中的功能行了初步探討。結(jié)果:建立了高重復(fù)性和高分辨率的大鼠海馬蛋白質(zhì)2-DE方法。通過比較正常和應(yīng)激后海馬蛋白表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)14個蛋白點(diǎn)含量發(fā)生變化;其中2個蛋白點(diǎn)表達(dá)升高,12個蛋白點(diǎn)表達(dá)降低,并利用質(zhì)譜技術(shù)鑒定出其中的11個蛋白點(diǎn)。Western blot方法檢測到差異表達(dá)蛋白α-突觸核蛋白(α-Synuclein)和動力蛋白1 (Dynamin1)在束縛應(yīng)激后的海馬中表達(dá)量確實(shí)降低,進(jìn)而驗(yàn)證了2-DE結(jié)果。熒光定量PCR結(jié)果顯示,α-突觸核蛋白(α-Synuclein)和動力蛋白1 (Dynamin1) mRNA水平在束縛應(yīng)激后分別降低到正常組的1/5和1/4。隨著束縛時間的延長大鼠海馬LTP明顯的下降,而動力蛋白1的表達(dá)量也有明顯下降趨勢。細(xì)胞模型中,糖皮質(zhì)激素使Dynamin1表達(dá)量降低并且神經(jīng)元的囊泡內(nèi)吞作用明顯減弱。結(jié)論:慢性應(yīng)激使大鼠海馬蛋白質(zhì)的表達(dá)發(fā)生變化,經(jīng)質(zhì)譜鑒定出其中11個差異蛋白質(zhì)。其中動力蛋白1在應(yīng)激過程中表達(dá)水平的下降可能通過阻礙突觸囊泡循環(huán)障礙而致LTP和學(xué)習(xí)記憶功能衰退。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R341

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 陳亮,楊建明,李曉明,李曉文,高天明;海馬組織分區(qū)膜質(zhì)分離后亞蛋白質(zhì)組分析方法的建立(英文)[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2004年11期

2 張偉,袁新初;海馬LTP的形成機(jī)制及進(jìn)展[J];數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志;2002年04期

3 周濤,許百男,闕海萍,林秋霞,呂雙紅,劉少君;FM1-43造影觀察PC12神經(jīng)元與原代皮層神經(jīng)元間的突觸形成[J];中華神經(jīng)外科雜志;2005年03期

4 吳馥梅,鄭元林;應(yīng)激對腦功能的影響[J];中國神經(jīng)科學(xué)雜志;2000年03期

，

本文編號：2579161