【摘要】： 目的: 脂肪干細(xì)胞是否可以在特定的誘導(dǎo)環(huán)境下分化形成血管平滑肌細(xì)胞,為構(gòu)建組織工程化血管的血管平滑肌細(xì)胞尋找新的種子細(xì)胞來(lái)源。 方法: 應(yīng)用酶消化法消化人脂肪組織獲取原代脂肪干細(xì)胞,待原代細(xì)胞生長(zhǎng)至融合后,采用免疫磁珠法分選CD34+的細(xì)胞以取得較高純化的脂肪干細(xì)胞,分選的細(xì)胞生長(zhǎng)24小時(shí)后采用酶消化法收獲細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組兩組,對(duì)照組培養(yǎng)液為5%M199培養(yǎng)液,實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)液為5%M199培養(yǎng)液內(nèi)添加生長(zhǎng)因子PDGF-BB(50ng/ml)、TGF-β1(2.5ng/ml),誘導(dǎo)14天,每日觀(guān)察誘導(dǎo)組細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化;14天后分別采用免疫熒光、RT-PCR的方法檢測(cè)血管平滑肌細(xì)胞特異性標(biāo)記α-SMA、Calponin、SM22α、SM-MHC的表達(dá)情況;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在誘導(dǎo)14天前后α-SMA、Calponin、SM-MHC的陽(yáng)性表達(dá)率。 結(jié)果: 脂肪干細(xì)胞在特定的誘導(dǎo)環(huán)境下誘導(dǎo)14天后,細(xì)胞生長(zhǎng)呈現(xiàn)血管平滑肌細(xì)胞所特有的峰-谷樣生長(zhǎng);免疫熒光、RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞:α-SMA、Calponin、SM22α、SM-MHC呈陽(yáng)性表達(dá);實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞誘導(dǎo)14天后,α-SMA、Calponin、SM-MHC的陽(yáng)性表達(dá)率為50.58±2.71%,42.94±2.76%,49.31±0.67%,誘導(dǎo)前為5.11±0.44%,5.73±0.54%,8.42±0.47%;誘導(dǎo)后較誘導(dǎo)前陽(yáng)性表達(dá)率明顯增加,有非常顯著性差異(P＜0.01)。 結(jié)論: 脂肪干細(xì)胞在體外特定的誘導(dǎo)環(huán)境中培養(yǎng)一段時(shí)間后,呈現(xiàn)明顯的血管平滑肌細(xì)胞的特性,有可能成為構(gòu)建組織工程化血管新的種子細(xì)胞來(lái)源。
【圖文】：

生長(zhǎng)至融合狀態(tài)(圖 1.B)，收集細(xì)胞進(jìn)行MACS分選，分選獲得的CD34+細(xì)胞，生長(zhǎng)呈紡錘形(圖1.C)，加入誘導(dǎo)液48h后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)較對(duì)照組有所增大并有一定方向性(圖1.D)，7天后呈現(xiàn)血管平滑肌細(xì)胞所特有的“谷-

呈紡錘形或梭形，類(lèi)成纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng)(圖1.A);原代細(xì)胞生長(zhǎng)5一6天后，生長(zhǎng)至融合狀態(tài)(圖 1.B)，，收集細(xì)胞進(jìn)行MACS分選，分選獲得的CD34+細(xì)胞，生長(zhǎng)呈紡錘形(圖1.C)，加入誘導(dǎo)液48h后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)較對(duì)照組有所增大并有一定方向性(圖1.D)，7天后呈現(xiàn)血管平滑肌細(xì)胞所特有的“谷-
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R329

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2575334