【摘要】：目的(1)研究Hsp104是不是可以阻止異常朊蛋白的聚集或者對(duì)異常朊蛋白的聚集具有解聚作用,為研究PrPsc聚集體或單體對(duì)神經(jīng)細(xì)胞是具有保護(hù)作用還是毒性作用具有一定的意義；(2)根據(jù)PrP106-126肽具有聚集成纖維的特點(diǎn),將其作為PrPsc聚集的模式,擬通過(guò)Hsp104干擾PrP106-126纖維形成,來(lái)探討PrPsc聚集形成的機(jī)制。 方法(1)利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)全長(zhǎng)Hsp104蛋白；(2)PrP106-126肽用緩沖液溶解,然后把樣品分成兩組,一組加Hsp104蛋白5μM,另一組未加Hsp104蛋白。每組各6個(gè)樣品,370C,分別孵育Oh、12h、24h、48h、72h和96h；(3)采用熒光光譜法(ThT分析法)、透射電子顯微鏡、原子力顯微鏡、圓二色譜法和MTT比色法對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果利用原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了全長(zhǎng)Hsp104蛋白；在體外實(shí)驗(yàn)過(guò)程中證實(shí)PrP106-126可以形成纖維,而且隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng),纖維越來(lái)越細(xì),相互交織形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。PrP106-126肽在不同的細(xì)胞(如HeLa細(xì)胞和SK細(xì)胞)中具有相似的毒性。而且也發(fā)現(xiàn)PrP106-126肽聚集成纖維后比PrP106-126肽對(duì)細(xì)胞的毒性要低。當(dāng)Hsp104存在時(shí)PrP106-126肽可以保持其對(duì)細(xì)胞的毒性。并且能夠明顯的抑制PrP106-126纖維的形成,同時(shí)其解聚作用也很明顯。其作用機(jī)制是通過(guò)改變PrP106-126肽的二級(jí)結(jié)構(gòu)從p-折疊結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變成無(wú)規(guī)卷曲,而使已經(jīng)聚集形成的纖維發(fā)生解聚,從而可以拮抗PrP106-126肽纖維聚集的形成來(lái)阻止淀粉樣轉(zhuǎn)變。從而保持PrP106-126肽對(duì)細(xì)胞的毒性。 結(jié)論利用原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)全長(zhǎng)熱休克蛋白Hsp104蛋白；從動(dòng)力學(xué)、形態(tài)學(xué)、二級(jí)結(jié)構(gòu)三方面證實(shí)熱休克蛋白Hsp104在體外可抑制PrP106-126肽聚集形成纖維；體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)證實(shí)熱休克蛋白Hsp104能夠抑制PrP106-126肽聚集形成纖維,還可維持PrP106-126肽的細(xì)胞毒性作用；體外動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)熱休克蛋白Hsp104對(duì)PrP106-126肽形成的纖維具有解聚作用；體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)證實(shí)熱休克蛋白Hsp104能夠使PrP106-126肽聚集形成的纖維解聚成PrP106-126肽或低聚物,誘導(dǎo)細(xì)胞毒性作用。
【圖文】：

BCD圖1Hsplo4六聚體結(jié)構(gòu)模型(引自Jamesshorter，NeurosignalsZoos:26:65)圖AHsP104結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)圖圖BHsPlo4六聚體結(jié)構(gòu)的三維圖圖cHsp104六聚體結(jié)構(gòu)的俯視圖圖DHsP104六聚體結(jié)構(gòu)的側(cè)面圖

圖2AFM工作原理圖Fig2.SehematicmodeldeseribingthePrineiPleofAFM.電子顯微鏡(E一eetronMieroseopy)法觀察為了觀察Hspl04對(duì)prp106一126淀粉樣纖維形成的影響，我們將Hspl04蛋白
【學(xué)位授予單位】：安徽理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：2574755