【摘要】：目的分別制備抗幽門(mén)螺桿菌(H.pylori)全菌(SS1株)和尿素酶I和尿素酶B的重組蛋白(r IB)的特異性卵黃抗體(Ig Y),純化后研究其體外抑菌效果。方法分別以超聲破碎SS1菌液和r IB為抗原免疫來(lái)杭雞,用水稀釋法和硫酸銨沉淀法純化獲得相應(yīng)特異性Ig Y(SS1-Ig Y、IB-Ig Y)。將特異性Ig Y與SS1混合作用后共培養(yǎng)檢測(cè)其抑菌效果,快速脲酶試驗(yàn)檢測(cè)其抗尿素酶作用。結(jié)果成功制備2種特異性Ig Y:SS1-Ig Y和IB-Ig Y,效價(jià)超過(guò)1∶12 800,純度超過(guò)80%。SS1-Ig Y和IB-Ig Y均有體外抗尿素酶活性和抑菌作用。結(jié)論 SS1-Ig Y和IB-Ig Y均具有在體外抑制H.pylori尿素酶活性和抑制H.pylori生長(zhǎng)的作用。
【圖文】：

后49d2種IgY均達(dá)到峰值(1∶12800)，繼續(xù)免疫后特異IgY效價(jià)不變(圖1)。圖1免疫蛋雞后IgY的效價(jià)變化2．2兩種方法提取抗H．pylori特異性IgY的濃度、純度和效價(jià)第3次免疫后，IB-IgY和SS1-IgY的效價(jià)均達(dá)到1∶12800。經(jīng)過(guò)10倍水稀釋法［13］粗提，采用Akita和Nakai法［14］得到的IgY純度較Wallman等［15］的純度高，可達(dá)到85．2%，基本滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求(表1)。采用Akita和Nakai方法獲得的IgYSDS-PAGE圖(圖2)，在相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)66200和25000附近有明顯的兩條帶分別為IgY的重鏈和輕鏈，SS1-IgY和IB-IgY純度分別為85．20%和83．2%。表1兩種方法提取抗H．pylori特異性IgY效價(jià)濃度純度方法IB-IgY效價(jià)濃度(mg/mL)純度(%)SS1-IgY效價(jià)濃度(mg/mL)純度(%)Akita和Nakai［14］1∶1280030．4085．201∶800029．8083．20Wallman等［15］1∶1280020．3780．901∶800028．3079．13M:蛋白質(zhì)Mrmarker;1:SS1-IgY;2:IB-IgY．圖2純化后的IgY電泳圖2．3IgY體外抑菌涂板IgY溶液作用于新鮮H．pylori菌液涂板孵育72h，根據(jù)培養(yǎng)皿上的透明、濕潤(rùn)、針尖狀大小菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，平行3個(gè)平板。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，SS1-IgY組和IB-IgY組與對(duì)照組(生理鹽水組)相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，CPV-IgY與對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)，SS1-IgY組和IB-IgY組之間差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05，圖3)。2．4快速脲酶試驗(yàn)隨著時(shí)間變化，，陽(yáng)性對(duì)照組H．pylori超聲破碎溶液中的尿素酶作用于尿素試劑使吸光度值不斷升高，尿素酶活性最強(qiáng);SS1-IgY作用于H．pylori超聲破碎溶液后，可明顯抑制尿素酶活性;IB-IgY也具有抑制尿素酶活性的作用，但抑制尿素酶活性能力不及SS1-IgY，與SS1超聲破碎溶液及生理鹽水組相比，差異均有統(tǒng)?

后49d2種IgY均達(dá)到峰值(1∶12800)，繼續(xù)免疫后特異IgY效價(jià)不變(圖1)。圖1免疫蛋雞后IgY的效價(jià)變化2．2兩種方法提取抗H．pylori特異性IgY的濃度、純度和效價(jià)第3次免疫后，IB-IgY和SS1-IgY的效價(jià)均達(dá)到1∶12800。經(jīng)過(guò)10倍水稀釋法［13］粗提，采用Akita和Nakai法［14］得到的IgY純度較Wallman等［15］的純度高，可達(dá)到85．2%，基本滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求(表1)。采用Akita和Nakai方法獲得的IgYSDS-PAGE圖(圖2)，在相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)66200和25000附近有明顯的兩條帶分別為IgY的重鏈和輕鏈，SS1-IgY和IB-IgY純度分別為85．20%和83．2%。表1兩種方法提取抗H．pylori特異性IgY效價(jià)濃度純度方法IB-IgY效價(jià)濃度(mg/mL)純度(%)SS1-IgY效價(jià)濃度(mg/mL)純度(%)Akita和Nakai［14］1∶1280030．4085．201∶800029．8083．20Wallman等［15］1∶1280020．3780．901∶800028．3079．13M:蛋白質(zhì)Mrmarker;1:SS1-IgY;2:IB-IgY．圖2純化后的IgY電泳圖2．3IgY體外抑菌涂板IgY溶液作用于新鮮H．pylori菌液涂板孵育72h，根據(jù)培養(yǎng)皿上的透明、濕潤(rùn)、針尖狀大小菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，平行3個(gè)平板。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，SS1-IgY組和IB-IgY組與對(duì)照組(生理鹽水組)相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，CPV-IgY與對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)，SS1-IgY組和IB-IgY組之間差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05，圖3)。2．4快速脲酶試驗(yàn)隨著時(shí)間變化，陽(yáng)性對(duì)照組H．pylori超聲破碎溶液中的尿素酶作用于尿素試劑使吸光度值不斷升高，尿素酶活性最強(qiáng);SS1-IgY作用于H．pylori超聲破碎溶液后，可明顯抑制尿素酶活性;IB-IgY也具有抑制尿素酶活性的作用，但抑制尿素酶活性能力不及SS1-IgY，與SS1超聲破碎溶液及生理鹽水組相比，差異均有統(tǒng)?

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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4 李R

本文編號(hào)：2563979