【摘要】：目的分別制備抗幽門螺桿菌(H.pylori)全菌(SS1株)和尿素酶I和尿素酶B的重組蛋白(r IB)的特異性卵黃抗體(Ig Y),純化后研究其體外抑菌效果。方法分別以超聲破碎SS1菌液和r IB為抗原免疫來杭雞,用水稀釋法和硫酸銨沉淀法純化獲得相應特異性Ig Y(SS1-Ig Y、IB-Ig Y)。將特異性Ig Y與SS1混合作用后共培養(yǎng)檢測其抑菌效果,快速脲酶試驗檢測其抗尿素酶作用。結(jié)果成功制備2種特異性Ig Y:SS1-Ig Y和IB-Ig Y,效價超過1∶12 800,純度超過80%。SS1-Ig Y和IB-Ig Y均有體外抗尿素酶活性和抑菌作用。結(jié)論 SS1-Ig Y和IB-Ig Y均具有在體外抑制H.pylori尿素酶活性和抑制H.pylori生長的作用。
【圖文】：

后49d2種IgY均達到峰值(1∶12800)，繼續(xù)免疫后特異IgY效價不變(圖1)。圖1免疫蛋雞后IgY的效價變化2．2兩種方法提取抗H．pylori特異性IgY的濃度、純度和效價第3次免疫后，IB-IgY和SS1-IgY的效價均達到1∶12800。經(jīng)過10倍水稀釋法［13］粗提，采用Akita和Nakai法［14］得到的IgY純度較Wallman等［15］的純度高，可達到85．2%，基本滿足后續(xù)實驗要求(表1)。采用Akita和Nakai方法獲得的IgYSDS-PAGE圖(圖2)，在相對分子質(zhì)量(Mr)66200和25000附近有明顯的兩條帶分別為IgY的重鏈和輕鏈，SS1-IgY和IB-IgY純度分別為85．20%和83．2%。表1兩種方法提取抗H．pylori特異性IgY效價濃度純度方法IB-IgY效價濃度(mg/mL)純度(%)SS1-IgY效價濃度(mg/mL)純度(%)Akita和Nakai［14］1∶1280030．4085．201∶800029．8083．20Wallman等［15］1∶1280020．3780．901∶800028．3079．13M:蛋白質(zhì)Mrmarker;1:SS1-IgY;2:IB-IgY．圖2純化后的IgY電泳圖2．3IgY體外抑菌涂板IgY溶液作用于新鮮H．pylori菌液涂板孵育72h，根據(jù)培養(yǎng)皿上的透明、濕潤、針尖狀大小菌落進行計數(shù)，平行3個平板。統(tǒng)計結(jié)果表明，SS1-IgY組和IB-IgY組與對照組(生理鹽水組)相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0．05)，CPV-IgY與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0．05)，SS1-IgY組和IB-IgY組之間差異也無統(tǒng)計學意義(P＞0．05，圖3)。2．4快速脲酶試驗隨著時間變化，，陽性對照組H．pylori超聲破碎溶液中的尿素酶作用于尿素試劑使吸光度值不斷升高，尿素酶活性最強;SS1-IgY作用于H．pylori超聲破碎溶液后，可明顯抑制尿素酶活性;IB-IgY也具有抑制尿素酶活性的作用，但抑制尿素酶活性能力不及SS1-IgY，與SS1超聲破碎溶液及生理鹽水組相比，差異均有統(tǒng)?

后49d2種IgY均達到峰值(1∶12800)，繼續(xù)免疫后特異IgY效價不變(圖1)。圖1免疫蛋雞后IgY的效價變化2．2兩種方法提取抗H．pylori特異性IgY的濃度、純度和效價第3次免疫后，IB-IgY和SS1-IgY的效價均達到1∶12800。經(jīng)過10倍水稀釋法［13］粗提，采用Akita和Nakai法［14］得到的IgY純度較Wallman等［15］的純度高，可達到85．2%，基本滿足后續(xù)實驗要求(表1)。采用Akita和Nakai方法獲得的IgYSDS-PAGE圖(圖2)，在相對分子質(zhì)量(Mr)66200和25000附近有明顯的兩條帶分別為IgY的重鏈和輕鏈，SS1-IgY和IB-IgY純度分別為85．20%和83．2%。表1兩種方法提取抗H．pylori特異性IgY效價濃度純度方法IB-IgY效價濃度(mg/mL)純度(%)SS1-IgY效價濃度(mg/mL)純度(%)Akita和Nakai［14］1∶1280030．4085．201∶800029．8083．20Wallman等［15］1∶1280020．3780．901∶800028．3079．13M:蛋白質(zhì)Mrmarker;1:SS1-IgY;2:IB-IgY．圖2純化后的IgY電泳圖2．3IgY體外抑菌涂板IgY溶液作用于新鮮H．pylori菌液涂板孵育72h，根據(jù)培養(yǎng)皿上的透明、濕潤、針尖狀大小菌落進行計數(shù)，平行3個平板。統(tǒng)計結(jié)果表明，SS1-IgY組和IB-IgY組與對照組(生理鹽水組)相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0．05)，CPV-IgY與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0．05)，SS1-IgY組和IB-IgY組之間差異也無統(tǒng)計學意義(P＞0．05，圖3)。2．4快速脲酶試驗隨著時間變化，陽性對照組H．pylori超聲破碎溶液中的尿素酶作用于尿素試劑使吸光度值不斷升高，尿素酶活性最強;SS1-IgY作用于H．pylori超聲破碎溶液后，可明顯抑制尿素酶活性;IB-IgY也具有抑制尿素酶活性的作用，但抑制尿素酶活性能力不及SS1-IgY，與SS1超聲破碎溶液及生理鹽水組相比，差異均有統(tǒng)?

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 王保寧;施橋發(fā);李虹;李明遠;陳翠萍;鄭慶文;蔣忠華;肖麗英;;幽門螺桿菌尿素膜通道基因的克隆和表達[J];南方醫(yī)科大學學報;2007年01期

2 韓飛;楊致邦;王長本;李建英;周政;牟君成;;抗幽門螺桿菌HP1188蛋黃抗體的研究[J];國際檢驗醫(yī)學雜志;2013年04期

3 黃進;秦思棟;楊致邦;黃偉;鄧穎;葉翠蓮;;HpaA IgY抑制小鼠胃內(nèi)幽門螺桿菌的定植[J];免疫學雜志;2008年05期

4 成虹;胡伏蓮;謝勇;胡品津;王吉耀;呂農(nóng)華;張建中;張桂英;周曾芬;吳克利;張玲霞;彭孝偉;戴寧;唐國都;姜葵;李巖;侯曉華;白文元;王明春;葉紅軍;劉玉蘭;許樂;;中國幽門螺桿菌耐藥狀況以及耐藥對治療的影響—全國多中心臨床研究[J];胃腸病學;2007年09期

5 王保寧;楊遠;鄺玉;曹康;李明遠;李婉宜;;ureI和ctB-ureI真核質(zhì)粒構(gòu)建及表達分析[J];細胞與分子免疫學雜志;2010年08期

6 段琳;丁建坤;趙文鋒;吳梧桐;劉景晶;;抗CtUBE IgY的制備及其抗幽門螺桿菌感染研究[J];藥物生物技術;2011年04期

7 郭麗媛;吳金英;黃偉;楊致邦;吳敏;馬小京;;硫糖鋁對幽門螺桿菌VacA IgY的保護作用的動物實驗評價[J];中國微生態(tài)學雜志;2010年11期

8 石新麗;楊靖;王保寧;李明遠;;卵黃抗體技術在人類胃腸道疾病診治中的應用[J];現(xiàn)代預防醫(yī)學;2013年17期

9 潘興;肖繼紅;楊靖;王保寧;李健春;周法庭;祝捷;周永君;李婉宜;李明遠;;幽門螺桿菌BIB原核表達工程菌的構(gòu)建及微生物學特性分析[J];西部醫(yī)學;2013年10期

10 Jiro Watari;Nancy Chen;Peter S Amenta;Hirokazu Fukui;Tadayuki Oshima;Toshihiko Tomita;Hiroto Miwa;Kheng-Jim Lim;Kiron M Das;;Helicobacter pylori associated chronic gastritis,clinical syndromes,precancerous lesions,and pathogenesis of gastric cancer development[J];World Journal of Gastroenterology;2014年18期

【共引文獻】

相關期刊論文 前10條

1 徐明積;;雷貝拉唑鈉三聯(lián)根除幽門螺桿菌療效觀察[J];北方藥學;2012年02期

2 成虹;王蔚虹;胡伏蓮;李江;高文;;北京地區(qū)幽門螺旋桿菌對四環(huán)素耐藥情況初探[J];中國醫(yī)藥導刊;2008年01期

3 鄭小麗;許樂;;7天與10天莫西沙星三聯(lián)療法根除幽門螺桿菌的療效比較[J];中國醫(yī)藥導刊;2010年03期

4 張兵;胡景芝;;新序貫療法與傳統(tǒng)三聯(lián)療法根除幽門螺桿菌的療效比較[J];臨床醫(yī)學;2011年04期

5 王玉東;;10天序貫療法與標準三聯(lián)療法治療十二指腸潰瘍幽門螺桿菌感染療效比較[J];臨床醫(yī)學;2011年07期

6 陳明紅;林志輝;彭孝緯;潘秀珍;;福建省寧德市青山島居民幽門螺桿菌感染率及細菌耐藥率調(diào)查[J];福建醫(yī)科大學學報;2008年05期

7 溫晉鋒;陳春曉;;幽門螺桿菌克拉霉素耐藥的研究現(xiàn)狀[J];國際消化病雜志;2011年01期

8 趙林;毛朝亮;吳旭;許晴晴;;貴州省遵義地區(qū)幽門螺桿菌感染及耐藥性調(diào)查研究(附332例報告)[J];貴州醫(yī)藥;2012年07期

9 韓飛;楊致邦;王長本;李建英;周政;牟君成;;抗幽門螺桿菌HP1188蛋黃抗體的研究[J];國際檢驗醫(yī)學雜志;2013年04期

10 柯金珍;鄭建瑋;張志陽;陳雅真;;阿莫西林與阿莫西林雙氯西林鈉對幽門螺桿菌根治的對照研究[J];中國臨床藥理學雜志;2013年02期

相關會議論文 前2條

1 國敏;徐帆洪;;幽門螺桿菌疫苗研究進展[A];第五次全國免疫診斷暨疫苗學術研討會論文匯編[C];2011年

2 朱振坤;汪金云;王巧燕;孫正林;田翔;;胃腸病患者幽門螺桿菌感染狀況及耐藥性分析[A];全國高血壓防治知識推廣培訓班暨健康血壓中國行福建漳州會論文綜合刊[C];2014年

相關博士學位論文 前6條

1 斯慶圖娜拉;不同慢性胃病來源HP的耐藥特征及抗HP嗜酸乳桿菌的抑制效應分析[D];吉林大學;2011年

2 鄭海倫;抗幽門螺桿菌三聯(lián)療法中抗生素在胃內(nèi)轉(zhuǎn)運的基礎和臨床研究[D];安徽醫(yī)科大學;2010年

3 王彥;Hp相關性慢性胃炎證素研究及中醫(yī)藥治療的療效評價研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2013年

4 張麗穎;中藥聯(lián)合標準三聯(lián)療法提高幽門螺桿菌根除率的臨床療效評價研究[D];中國中醫(yī)科學院;2013年

5 謝建輝;廣藿香醇抗幽門螺桿菌相關性胃炎機理研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2014年

6 蘇鵬;中國三地幽門螺桿菌cagPAI序列多態(tài)性分析[D];中國疾病預防控制中心;2013年

相關碩士學位論文 前10條

1 李慧;含鉍劑四聯(lián)療法與10天序貫療法根除幽門螺桿菌的臨床療效觀察[D];山西醫(yī)科大學;2011年

2 吳婧;幽門螺桿菌毒素分型與胃腸疾病的關系及對根除率的影響[D];河北醫(yī)科大學;2011年

3 盧春燕;不同劑量埃索美拉唑為基礎的三聯(lián)療法對幽門螺桿菌的根除療效及其對阿莫西林胃內(nèi)分布影響的初步研究[D];安徽醫(yī)科大學;2011年

4 王雪敏;不同亞型功能性消化不良與幽門螺桿菌根除及耐藥關系的探討[D];華中科技大學;2011年

5 劉瑤;胃病患者幽門螺桿菌感染的調(diào)查分析及健康管理的初步研究[D];南方醫(yī)科大學;2011年

6 王立剛;大連市海港集團職工幽門螺桿菌感染現(xiàn)狀及相關因素調(diào)查研究[D];大連醫(yī)科大學;2011年

7 鄧巖軍;蘇州地區(qū)老年人上消化道出血病因分析[D];蘇州大學;2011年

8 黃德瑜;含替硝唑的序貫療法根除幽門螺桿菌的療效觀察[D];青島大學;2009年

9 王瑜;幽門螺桿菌不同方案根除效果與體外抗生素耐藥性研究[D];河北醫(yī)科大學;2009年

10 晁園;含莫西沙星的PPI三聯(lián)療法對幽門螺桿菌根除的隨機、平行對照臨床研究[D];浙江大學;2009年

【二級參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 高運金;;百貝寧治療嬰幼兒輪狀病毒腸炎療效觀察[J];北方藥學;2011年01期

2 常山,查曉霞,陸聲,陳軍,張雅萍;IgY與雙歧桿菌防治小鼠白色念珠菌感染的研究[J];第三軍醫(yī)大學學報;2003年04期

3 王保寧;施橋發(fā);李虹;李明遠;陳翠萍;鄭慶文;蔣忠華;肖麗英;;幽門螺桿菌尿素膜通道基因的克隆和表達[J];南方醫(yī)科大學學報;2007年01期

4 李R

本文編號：2563979