發(fā)布時(shí)間：2019-11-16 11:34

【摘要】：本研究利用基因工程技術(shù)探索B型流感病毒NS1蛋白羧基端缺失對(duì)病毒致病性的影響,并利用反向遺傳學(xué)技術(shù)從體外拯救NS1蛋白羧基端缺失的B型流感病毒,評(píng)估去除NS1蛋白羧基端對(duì)B型流感病毒致病性的影響,探究B型流感病毒致病性變異的分子基礎(chǔ)。通過全基因合成和反向遺傳學(xué)技術(shù)從體外拯救NS1蛋白羧基端發(fā)生171個(gè)氨基酸缺失的B型流感病毒B/Yamagata/16/88株,命名為B-L5。將實(shí)驗(yàn)室之前拯救的母本株B/Yamagata/16/88(以下簡稱B-S9)和B-L5以3×105 EID5 0的攻毒劑量分別人工感染BALB/c小鼠,通過體重變化、生存率、肺臟病毒滴度等方面進(jìn)行致病性分析。成功構(gòu)建了B型流感病毒B/Yamagata/16/88NS1蛋白羧基端缺失株反向遺傳平臺(tái)。母本株B-S9和NS1蛋白羧基端缺失株B-L5均能夠人工感染BALB/c小鼠,但不致死,對(duì)BALB/c小鼠均呈現(xiàn)低致病性;B-S9感染小鼠后,從攻毒后第3d至第7d,體重持續(xù)下降,相反,B-L5感染小鼠后,只在攻毒后第2d出現(xiàn)體重下降,攻毒后第3d體重開始回升;B-S9和B-L5感染小鼠后均能在小鼠肺部進(jìn)行復(fù)制,但攻毒后第3d,B-L5感染小鼠肺臟滴度要比B-S9低7 900倍,攻毒后第6d,B-L5感染小鼠肺臟已檢測不到病毒復(fù)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,NS1蛋白羧基端缺失可以明顯降低B型流感病毒對(duì)小鼠的致病性。B型流感病毒致病性變異的分子基礎(chǔ)還有待繼續(xù)研究,該反向遺傳操作系統(tǒng)的建立為B型流感病毒分子機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ),同時(shí)也為B型流感減毒活疫苗的研究開辟了新途徑。
【圖文】：

圖３Ｂ－Ｌ５的電鏡照片（×４００００）Ｆｉｇｕｒｅ３ＥｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｇｒａｐｈｏｆＢ－Ｌ５（×４００００）暫下降外，基本無變化（圖５）。圖４攻毒后小鼠生存率Ｆｉｇｕｒｅ４Ｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｍｉｃｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｖｉｒｕｓｅｓ圖５攻毒后小鼠體重變化率Ｆｉｇｕｒｅ５Ｐｒｅｃｅｎｔｃｈａｎｇｅｉｎｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｏｆｍｉｃｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｖｉｒｕｓｅｓ６各組織病毒滴定結(jié)果在攻毒后第３ｄ和第６ｄ測定小鼠肺臟中的病毒滴度，以評(píng)價(jià)病毒的毒力。結(jié)果顯示，雖然兩種病毒均能在小鼠肺臟中復(fù)制，但攻毒后第３ｄ，Ｂ－Ｌ５在小鼠肺臟中的滴度要比Ｂ－Ｓ９低約７９００倍，而攻毒后第６ｄ小鼠肺臟內(nèi)已檢測不到Ｂ－Ｌ５的復(fù)制，說明ＮＳ１蛋白羧基端缺失的Ｂ－Ｌ５對(duì)小鼠的致病性要明顯低于母本株Ｂ－Ｓ９（圖６；虛線表示最低檢測線）。圖６攻毒后第３ｄ和第６ｄ小鼠肺臟中的病毒滴度Ｆｉｇｕｒｅ６Ｖｉｒａｌｔｉｔｅｒｓｉｎｌｕｎｇｓｏｆｍｉｃｅａｔ３ｄａｙｓａｎｄ６ｄａｙｓ討論流感病毒致病性分子機(jī)制研究一直是流感病毒研究的一個(gè)熱點(diǎn)，然而，目前的研究主要集中在Ａ型流感病毒上，對(duì)Ｂ型流感病毒致病性分子機(jī)制缺乏深入的研究。Ｂ型流感病毒與Ａ型流感病毒有相似性也有其獨(dú)特的一面，包括編碼ＮＢ蛋白、不編碼ＰＢ１－Ｆ２蛋白以及病毒蛋白的長度和基因非編碼區(qū)長度與Ａ型流感病毒不同等，這說明Ｂ型流感病毒的致病性分子機(jī)制可能與Ａ型流感病毒不完全相同。反向遺傳學(xué)是當(dāng)前研究流感病毒致病性機(jī)制及研發(fā)新型

圖３Ｂ－Ｌ５的電鏡照片（×４００００）Ｆｉｇｕｒｅ３ＥｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｇｒａｐｈｏｆＢ－Ｌ５（×４００００）暫下降外，基本無變化（圖５）。圖４攻毒后小鼠生存率Ｆｉｇｕｒｅ４Ｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｍｉｃｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｖｉｒｕｓｅｓ圖５攻毒后小鼠體重變化率Ｆｉｇｕｒｅ５Ｐｒｅｃｅｎｔｃｈａｎｇｅｉｎｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｏｆｍｉｃｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｖｉｒｕｓｅｓ６各組織病毒滴定結(jié)果在攻毒后第３ｄ和第６ｄ測定小鼠肺臟中的病毒滴度，以評(píng)價(jià)病毒的毒力。結(jié)果顯示，雖然兩種病毒均能在小鼠肺臟中復(fù)制，但攻毒后第３ｄ，Ｂ－Ｌ５在小鼠肺臟中的滴度要比Ｂ－Ｓ９低約７９００倍，而攻毒后第６ｄ小鼠肺臟內(nèi)已檢測不到Ｂ－Ｌ５的復(fù)制，說明ＮＳ１蛋白羧基端缺失的Ｂ－Ｌ５對(duì)小鼠的致病性要明顯低于母本株Ｂ－Ｓ９（圖６；虛線表示最低檢測線）。圖６攻毒后第３ｄ和第６ｄ小鼠肺臟中的病毒滴度Ｆｉｇｕｒｅ６Ｖｉｒａｌｔｉｔｅｒｓｉｎｌｕｎｇｓｏｆｍｉｃｅａｔ３ｄａｙｓａｎｄ６ｄａｙｓ討論流感病毒致病性分子機(jī)制研究一直是流感病毒研究的一個(gè)熱點(diǎn)，，然而，目前的研究主要集中在Ａ型流感病毒上，對(duì)Ｂ型流感病毒致病性分子機(jī)制缺乏深入的研究。Ｂ型流感病毒與Ａ型流感病毒有相似性也有其獨(dú)特的一面，包括編碼ＮＢ蛋白、不編碼ＰＢ１－Ｆ２蛋白以及病毒蛋白的長度和基因非編碼區(qū)長度與Ａ型流感病毒不同等，這說明Ｂ型流感病毒的致病性分子機(jī)制可能與Ａ型流感病毒不完全相同。反向遺傳學(xué)是當(dāng)前研究流感病毒致病性機(jī)制及研發(fā)新型

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 于玉鳳;郭曉蘭;王穎;周俊梅;方丹云;曾谷城;晏輝鈞;江麗芳;;H7N9禽流感病毒對(duì)人類致病的分子基礎(chǔ)分析[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2013年05期

2 袁華平;關(guān)鋒;李桂梅;;流感病毒及其單克隆抗體的研究進(jìn)展[J];中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2013年18期

3 郭衛(wèi)東;雷霞;劉艷芳;躍華;;內(nèi)蒙古自治區(qū)2010-2012年流感病原學(xué)及流行病學(xué)分析[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2014年19期

4 孫偉洋;于志君;李雪;陳強(qiáng);高曉龍;國嬌;張坤;李元果;王鐵成;楊松濤;黃耕;趙永坤;高玉偉;夏咸柱;;B型流感病毒B/Yamagata/16/88反向遺傳操作平臺(tái)的搭建及BALB/c小鼠感染模型的建立[J];中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào);2015年01期

5 �？☆I(lǐng);陳明寬;吳淑嫻;孟廣勛;徐存拴;盧愛靈;;NLRP3炎癥小體在流感病毒感染中的作用[J];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2015年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 程凱慧;H6N1亞型禽流感對(duì)哺乳動(dòng)物的傳播與致病機(jī)制研究[D];石河子大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 丁潔;H6N1亞型AIV在豚鼠間傳播能力及H9N2亞型AIV對(duì)小鼠致病性研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2013年

2 范俊;H9N2亞型禽流感病毒生物學(xué)特性分析及PR8八質(zhì)粒反向遺傳操作系統(tǒng)的構(gòu)建與候選疫苗株的制備[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

3 段林建;連翹提取物對(duì)甲型流感病毒核蛋白表達(dá)影響的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2013年

4 忻悅;長春地區(qū)H1N1流感病毒HA、NA基因分析及抗原性變異研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;幾乎所有流感病毒都源于鳥類——訪旅美中國學(xué)者哈亞[J];浙江林業(yè);2004年02期

2 楊濤,杜紹范,劉明;A型流感病毒NS1蛋白研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代畜牧獸醫(yī);2005年03期

3 魏宏,林鋒強(qiáng),莊向生,張步伍;A型流感病毒NS1蛋白的結(jié)構(gòu)與功能[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2005年09期

4 林u&;周倫江;莊向生;;應(yīng)用反向遺傳技術(shù)研究流感病毒[J];福建畜牧獸醫(yī);2007年06期

5 賀英;曹旺斌;;A型流感病毒的分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];中國家禽;2008年01期

6 趙樸;鄭玉姝;賈貝貝;劉興友;李海燕;;A型流感病毒PB1-F2研究進(jìn)展[J];中國人獸共患病學(xué)報(bào);2008年07期

7 葛葉;鄧國華;;A型流感病毒聚合酶研究進(jìn)展[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年02期

8 陳繼明;孫映雪;劉朔;蔣文明;陳杰;侯廣宇;李金平;;2009年新甲型H1N1流感病毒的來源和去向分析[J];科學(xué)通報(bào);2009年12期

9 楊琴;張興曉;楊靈芝;;3種細(xì)胞培養(yǎng)流感病毒的比較[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2009年11期

10 張旭;滕巧泱;閆麗萍;周潔文;徐大偉;顏丕熙;姬希文;戴曉光;王洪斌;高利;李澤君;;穩(wěn)定表達(dá)流感病毒PR8株NS1蛋白MDCK細(xì)胞系的建立[J];中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào);2011年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 楊琴;張興曉;楊靈芝;郭慶棟;;流感病毒在三種細(xì)胞中的生長對(duì)比[A];山東畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)專業(yè)委員會(huì)第一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

2 李葉;廖明;辛朝安;;A型流感病毒對(duì)小鼠致病機(jī)制的研究進(jìn)展[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

3 冉偉;孫藝學(xué);朱利塞;丁壯;叢彥龍;;流感病毒種內(nèi)與種間傳播的影響因素[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第八屆全國會(huì)員代表大會(huì)暨第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

4 高福;;流感病毒跨種傳播的結(jié)構(gòu)學(xué)基礎(chǔ)[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第十一次會(huì)員代表大會(huì)暨2014年全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文集——專題報(bào)告一[C];2014年

5 王曉杜;沈陽;陳培軍;邱亞峰;馬志永;;A型流感病毒NS1蛋白功能研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2009學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊）[C];2009年

6 王朝霞;滕巧泱;戴曉光;黃海碧;張樹梅;張旭;徐大偉;李澤君;;具有高增殖能力流感病毒突變株的制備及其在雞胚上生長特性[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

7 王曉杜;馬志永;;A型流感病毒新蛋白PB1-F2的研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)成立大會(huì)暨第一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

8 涂加鋼;郭敬;張安定;趙宗正;張文婷;陳煥春;金梅林;;甲型H1N1流感病毒NS1蛋白C末端缺失的功能研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次人獸共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第六屆第十四次教學(xué)專業(yè)委員會(huì)論文集[C];2012年

9 劉禮;曹中瑩;陳晶;朱應(yīng);;A型流感病毒通過COX2和PKA信號(hào)通路誘導(dǎo)白細(xì)胞介素27的表達(dá)[A];2013年湖北省暨武漢微生物學(xué)會(huì)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2013年

10 George F.Gao;;豬與人H1N1亞型流感病毒遺傳相關(guān)性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第二次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 本報(bào)駐英國記者 何屹;從病毒學(xué)揭秘甲型H1N1流感病毒[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

2 記者 劉國遠(yuǎn)　楊伶;世衛(wèi)調(diào)查：初步揭秘甲型流感病毒[N];新華每日電訊;2009年

3 郝成濤;甲型H1N1流感病毒檢測試劑形成配套體系[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

4 記者 張新生;巴發(fā)現(xiàn)新型流感病毒出現(xiàn)變異[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

5 凌朔;新流感病毒家族的前世今生[N];新華每日電訊;2009年

6 通訊員 李雙林　記者 佳寧 成玉;我市成功分離鑒定一株甲3流感病毒[N];承德日?qǐng)?bào);2011年

7 曹斯;廣東研制流感病毒“追蹤器”[N];廣東科技報(bào);2013年

8 記者 齊芳;給流感病毒安裝“定位追蹤器”[N];光明日?qǐng)?bào);2013年

9 記者 白毅;流感病毒有了“定位追蹤器”[N];中國醫(yī)藥報(bào);2013年

10 李學(xué)梅;此次流感病毒并未發(fā)生大變異[N];北京日?qǐng)?bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 房家立;A型流感病毒感染誘導(dǎo)COX2基因表達(dá)機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2011年

2 朱紫祥;p53在I型干擾素介導(dǎo)的先天性抗甲型流感病毒中的作用研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

3 張守平;p-STAT1蛋白參與調(diào)節(jié)A型流感病毒的復(fù)制及炎性反應(yīng)的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 李青;流感病毒神經(jīng)氨酸酶的結(jié)構(gòu)、耐藥及新型抑制劑作用的機(jī)制研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2012年

5 崔巍;基于生物信息學(xué)方法研究流感病毒及療法[D];南開大學(xué);2014年

6 賈雷立;禽流感病毒分離、復(fù)合多表位重組體構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];吉林大學(xué);2006年

7 王佳;基于機(jī)器學(xué)習(xí)的A型流感病毒跨種傳播和抗原關(guān)系預(yù)測研究[D];華中科技大學(xué);2012年

8 圣亞軍;復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)度分布估計(jì)方法在預(yù)測流感病毒發(fā)生上的應(yīng)用[D];南開大學(xué);2014年

9 牟旭鵬;流感病毒M2e蛋白的制備及其抗甲型流感病毒研究[D];吉林大學(xué);2010年

10 高慧杰;PA-X基因影響A型流感病毒致病性的分子機(jī)制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 朱云;新甲型H1N1流感病毒小鼠致死模型的建立及初步研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2011年

2 邢曉會(huì);2008-2012年我國B型流感病毒耐藥毒株的流行狀況及生物學(xué)特性研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2013年

3 秦萌;流感病毒檢測新技術(shù)的建立及初步應(yīng)用研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2010年

4 馮安林;火雞的流感病毒唾液酸受體分布特點(diǎn)及其在流感病毒生態(tài)系統(tǒng)中的位置和作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

5 常瑾;山西省2004～2005年流感病毒的流行株基因變異及抗體水平研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2006年

6 劉敏;流感病毒多重序列比對(duì)數(shù)據(jù)庫構(gòu)建與重配規(guī)律分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

7 范群平;豬源新甲型H1N1流感病毒的分離鑒定及其對(duì)小鼠的致病性[D];揚(yáng)州大學(xué);2011年

8 王斗;常見流感病毒分型基因芯片檢測方法的建立和應(yīng)用[D];北京工業(yè)大學(xué);2013年

9 晏文君;流感病毒核蛋白NP激活p53生物學(xué)意義及p53抗流感病毒機(jī)制解析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

10 曾旭健;犬流感病毒江蘇分離株致病生物學(xué)特性研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2561818