【摘要】： 目的:通過腹主動脈插管灌注膠原酶消化分離胰腺星狀細(xì)胞(pancreatic stellate cell,PSC),建立簡單易行的PSC分離方法,并對PSC進(jìn)行培養(yǎng)和鑒定;初步探討PSC早期活化的機(jī)制。 方法:大鼠腹主動脈插管灌注后,經(jīng)膠原酶消化、Nycodenz密度梯度離心,分離得到PSC;通過觀察細(xì)胞形態(tài)、胞質(zhì)內(nèi)脂滴和免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測結(jié)蛋白(desmin)、神經(jīng)膠質(zhì)酸纖維蛋白(glial fibrillaryacidic protein,GFAP)、α平滑肌肌動素(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表達(dá)來鑒定PSC;RT-PCR方法及WestBlot方法測定PSC中Smad2/3表達(dá)。 結(jié)果:腹主動脈灌注法分離得到PSC,產(chǎn)率、活力和純度分別為:15.3±4.6×10~3/g體重、95.0±3.5%、＞80%;培養(yǎng)24h后大多數(shù)細(xì)胞已貼壁,呈星狀或多角形,48h后表達(dá)desmin、GFAP,并在96h后表達(dá)α-SMA;Smad2/3在PSC早期活化中顯著高表達(dá),48H后達(dá)其高峰。 結(jié)論:通過腹主動脈灌注法較容易分離得到PSC,其產(chǎn)率、活力和純度較高,經(jīng)鑒定后能夠滿足體外實(shí)驗(yàn)要求;Smad2/3的高表達(dá)是PSC早期活化過程中的中心環(huán)節(jié)。Smad2/3的高表達(dá)與Smad7無法抑制其活化從而造成兩者失去平衡是引起PSC活化的主要原因。
【圖文】：

后將I型受體磷酸化，磷酸化的I型受體誘導(dǎo)TGF一p傳導(dǎo)通路上的SmadZ、Smad3磷酸化，Smad4與磷酸化的SmadZ或Smad3形成復(fù)合物，，該復(fù)合物將信號轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)細(xì)胞核內(nèi)并發(fā)揮相應(yīng)的功能(如圖2)。Smad7由于缺乏C末段磷酸化位點(diǎn)不能被I型受體磷酸化，卻通過干擾工型受體阻礙SmadZ和Smad3磷酸化來減弱TGF一p的生物學(xué)作用[‘3一”]。衛(wèi)王~pandsxl份ds圖2:TGF一p作用下，SmadZ的活化過程 Hirohideohnishi[‘6]研究了smadZ的的作用(smasZ介導(dǎo)了TGF一pl的信號通路，與PSCS活化呈正相關(guān)，促進(jìn)PSCS產(chǎn)生EeM)，該研究與smadZ在即es中的相關(guān)研究[，7]有差異。smad7在PseS活化中的作的相關(guān)研究未見報(bào)道。2003年，Dooley等[’‘嘀腺病毒載體將Smad7一cDNA導(dǎo)入大鼠肝纖維化模型中

培養(yǎng)48h后PSC表達(dá)GEAP(x100)
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R657.5;R329

【參考文獻(xiàn)】

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1 范萍,武正炎,王水,查小明,甄林林;人外周血中樹突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)、培養(yǎng)及其表面標(biāo)記的初步研究[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2002年01期

2 陳啟龍,李國威,陳曉,林仁勇,徐新建,溫浩;轉(zhuǎn)化生長因子β_1在胰腺組織中的表達(dá):慢性胰腺炎發(fā)病機(jī)制探討[J];中國普通外科雜志;2002年10期

本文編號：2558940