【摘要】：背景 卡介苗(Bacillus Calmette Guerin,BCG)在長(zhǎng)期的臨床應(yīng)用和實(shí)驗(yàn)研究中被發(fā)現(xiàn)可以誘導(dǎo)機(jī)體的Th1免疫優(yōu)勢(shì)應(yīng)答[1],不僅如此,BCG的許多成分也可以單獨(dú)誘導(dǎo)Th1免疫優(yōu)勢(shì)。因此,我們?cè)O(shè)想將過敏原Der p2基因轉(zhuǎn)入BCG中表達(dá),經(jīng)過免疫,機(jī)體將過敏原當(dāng)作BCG的成分進(jìn)行抗原提呈,選擇適當(dāng)?shù)耐緩浇臃N,就可能誘導(dǎo)出所需要的免疫狀態(tài)。本課題組前期的工作已經(jīng)證實(shí):Der p2可以在原核表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá),且表達(dá)量可達(dá)總蛋白量的20% [2,3]。為了提高重組BCG與腸道黏膜的親和力,我們選擇空腸彎曲菌膜外蛋白PEB1為媒介,利用重組BCG技術(shù),再次克隆入Der p2-rBCG中,并進(jìn)行鑒定,以進(jìn)一步提高疫苗的免疫效能。 目的 利用重組BCG技術(shù),構(gòu)建能以胞壁形式表達(dá)屋塵螨Der p2和PEB1抗原的重組BCG口服哮喘疫苗pCW-Der p2-PEB1-rBCG。 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果 以pCW-Der p2質(zhì)粒和pUC-PEB1質(zhì)粒DNA為模板擴(kuò)增基因,構(gòu)建出重組質(zhì)粒pCW-Der p2-PEB1。將重組質(zhì)粒電穿孔轉(zhuǎn)入BCG感受態(tài)細(xì)胞,潮霉素抗性篩選rBCG陽性克隆。陽性rBCG經(jīng)PCR特異性擴(kuò)增目的基因片段,證實(shí)其中含有目的基因。用抗Der p2單克隆抗體和制備的小鼠PEB1抗血清對(duì)rBCG進(jìn)行間接免疫熒光鑒定,證實(shí)其成功。 結(jié)論 成功地構(gòu)建了胞壁表達(dá)Der p2-PEB1融合蛋白重組BCG。為基因工程疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

-21-1.1 Der p2-PEB1基因片段與pCW-Der p2-PEB1基因片段的連接與克隆流程ig.1.1 Process of ligating and coloning of Der p2-PEB1 gene fragment and pCW-D2-PEB1 gene fragment

圖 1.2 Der p2 基因的 PCR 擴(kuò)增Fig.1.2 Amplication of Der p2 gene by PCRM: DNA marker DL2000；1: Der p2 gene fragment.因擴(kuò)增結(jié)果
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 史皆然;師長(zhǎng)宏;吳昌歸;李元;戚好文;李別虎;范雄林;;分泌表達(dá)Der p2的重組BCG的構(gòu)建與鑒定[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2006年08期

2 鄭春福;重組BCG疫苗的研究進(jìn)展[J];生命科學(xué);2000年02期

3 趙寶華,張莉,石振華;基因重組卡介苗的優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用[J];生物學(xué)通報(bào);2002年01期

4 史皆然,李元,戚好文,李別虎,范雄林;Der p2重組胞壁型E.coli-BCG穿梭表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2003年02期

5 錢建飛;動(dòng)物基因工程疫苗研究進(jìn)展[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2000年S1期

，

本文編號(hào)：2558904