【摘要】： 目的:本研究組前期臨床觀測發(fā)現(xiàn)顱腦創(chuàng)傷(traumatic brain injury,TBI)患者外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)數(shù)量存在著先降低后上升的變化特征,為了進(jìn)一步研究外周血中EPCs變化機(jī)理,須建立相關(guān)的動物研究平臺。本研究目的:1.建立一種大鼠外周血中EPCs的分離、標(biāo)記方法,使用流式細(xì)胞儀(flow cytometer,FCM)雙抗體標(biāo)記技術(shù)檢測大鼠外周血中EPCs的數(shù)量;2.利用大鼠液壓顱腦創(chuàng)傷(Fluid-Percussion injury,FPI)模型,探明TBI后大鼠外周血中EPCs的變化趨勢;3.探討TBI后EPCs與白細(xì)胞、血小板的相關(guān)變化趨勢,為研究TBI后外周血中EPCs的變化機(jī)理提供參考。 方法:1.使用健康成年雄性WISTER大鼠共45只(體重300-350g,鼠齡12周),分為假手術(shù)對照組(n=10)及TBI組(n=35)。假手術(shù)對照組大鼠僅給予10%水合氯醛腹腔注射麻醉。TBI組使用液壓打擊儀及小動物立體定向儀,分別建立輕、中、重型大鼠閉合性顱腦液壓損傷模型,輕型組(n=10)液壓打擊力度為1atm,中型組(n=10)液壓打擊力度為2atm,重型組(n=15)液壓打擊力度為3atm;2.TBI后24h,按照隨機(jī)原則從各TBI組中各抽取2只大鼠分別進(jìn)行頭顱MR檢查和腦組織切片HE染色,觀察TBI的影像和病理特征。其余大鼠分別于傷前24h和傷后不同時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、48h、72h、240h、336h)使用硬質(zhì)玻璃毛細(xì)采血管(φ=1mm)取大鼠內(nèi)眥球后靜脈叢血液約1.1ml,進(jìn)行外周血EPCs測定,同時(shí)使用小動物外周血細(xì)胞檢測設(shè)備進(jìn)行白細(xì)胞和血小板測定;3.采用Ficoll密度梯度離心法分離大鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞,以CD34、CD133雙抗體陽性作為EPCs標(biāo)志,使用CD34、CD133雙抗體標(biāo)記結(jié)合流式細(xì)胞計(jì)數(shù)方法,檢測大鼠外周血中EPCs的數(shù)量。 結(jié)果:對照組10只大鼠完成了各時(shí)間點(diǎn)大鼠外周血循環(huán)中相應(yīng)指標(biāo)測定;輕型TBI組中1只大鼠因打擊后3天頭部切口感染被剔除,其余7只大鼠完成了各時(shí)間點(diǎn)大鼠外周血循環(huán)中相應(yīng)指標(biāo)測定;中型TBI組中1只大鼠于打擊后48h死亡,其余7只大鼠完成了各時(shí)間點(diǎn)大鼠外周血循環(huán)中相應(yīng)指標(biāo)測定;重型TBI組中2只于打擊后24h死亡,4只于打擊后48h死亡,其中1只因眼內(nèi)眥取血處嚴(yán)重感染被剔除,其余7只大鼠完成了各時(shí)間點(diǎn)大鼠外周血循環(huán)中相應(yīng)指標(biāo)測定;實(shí)驗(yàn)中途死亡大鼠(n=6)的相應(yīng)數(shù)據(jù)作為死亡組進(jìn)行分析。 1.大鼠外周血循環(huán)中存在表達(dá)CD34、CD133雙陽性的EPCs,本研究測定顯示:正常大鼠外周血循環(huán)中EPCs為33-61個(gè)/20萬單個(gè)核細(xì)胞,平均為47個(gè)/20萬單個(gè)核細(xì)胞; 2.TBI后大鼠外周血中EPCs數(shù)量在傷后下降至正常水平以下,于傷后3h達(dá)最低點(diǎn),至10-30個(gè)/20萬單個(gè)核細(xì)胞,各組間下降幅度無顯著差異; 3.TBI后大鼠外周血中EPCs數(shù)量在傷后3-6h漸升高至正常水平以上,于傷后6h達(dá)最高點(diǎn),輕型組平均升至80個(gè)/20萬單個(gè)核細(xì)胞,中型組平均升至68個(gè)/20萬單個(gè)核細(xì)胞,重型組平均升至51個(gè)/20萬單個(gè)核細(xì)胞,此后EPCs逐漸下降,傷后24h各組EPCs均降至正常水平;TBI后死亡的大鼠外周血中EPCs在傷后3h也下降至最低點(diǎn),在傷后3-6h雖有上升趨勢,但達(dá)不到正常水平,死亡前外周血中EPCs呈持續(xù)下降趨勢; 4.TBI后大鼠外周血中EPCs數(shù)量變化與血小板、白細(xì)胞數(shù)量均無顯著相關(guān)。 結(jié)論: 1.采用CD34、CD133雙抗體標(biāo)記技術(shù)結(jié)合使用流式細(xì)胞儀檢測、可以良好地定量測定大鼠外周血中的EPCs; 2.本實(shí)驗(yàn)顯示:與TBI患者傷后外周血中EPCs的變化特征相似,TBI后存活的大鼠外周血的EPCs水平同樣存在先降低,后增高,再逐漸降至正常的變化特征; 3.外傷越嚴(yán)重,外周血中的EPCs增高幅度越小,而傷后死亡大鼠外周血中EPCs的水平持續(xù)于正常水平以下,提示:TBI后外周血中EPCs的水平持續(xù)低下是預(yù)后不良的指征。 4.本實(shí)驗(yàn)顯示:TBI大鼠傷后外周血中的EPCs的數(shù)量變化與血小板和白細(xì)胞數(shù)量均無顯著相關(guān)。
【圖文】：

圖5.TKRZo0C型小動物呼吸機(jī)(3)將混勻后的2ml抗凝血液標(biāo)本與離液中(HISTOPAQ嚨1083一l)，在20(4)離心后標(biāo)本分層明顯，用取樣槍于離心管，加入ZmlpBS緩沖液，在20洗滌;(5)棄上清，加入lmlPBs緩沖液，

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文圖1.打擊部位圖2.液壓沖擊顱腦創(chuàng)傷儀與大鼠頭部連接圖3.MODEL01一B型液壓顱腦創(chuàng)傷儀圖4.與液壓打擊儀相連接的示波器圖5.TKRZo0C型小動物呼吸機(jī)(3)將混勻后的2ml抗凝血液標(biāo)本與PBS緩沖液緩慢加入3ml淋巴細(xì)胞分離液中(HISTOPAQ嚨1083一l)，在20oC以2400印m離心20min;(4)離心后標(biāo)本分層明顯，用取樣槍吸取中間白膜層(單個(gè)核細(xì)胞層)，置于離心管，加入ZmlpBS緩沖液，在20oC以2400印m離心10min，進(jìn)行第一次洗滌;(5)棄上清，加入lmlPBs緩沖液
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R329.25

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 唐猛;;內(nèi)皮祖細(xì)胞與心血管缺血性疾病的研究進(jìn)展[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2006年11期

2 陳劍飛;黃嵐;晉軍;武曉靜;劉蘭;崔斌;趙剛;;動脈粥樣硬化鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量和功能的變化及其意義[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年10期

3 陳劍飛;黃嵐;;年齡對內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)損傷血管內(nèi)膜的影響[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2006年04期

4 陶蕊;王一塵;段俊麗;;內(nèi)皮祖細(xì)胞對血管新生的影響及他汀的干預(yù)作用[J];國外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊);2007年06期

5 宋曉燕;姜振宇;;內(nèi)皮祖細(xì)胞在缺血性心臟病中的研究進(jìn)展[J];長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2007年06期

6 盧旺盛;田增民;;內(nèi)皮祖細(xì)胞與腦血管疾病[J];海軍總醫(yī)院學(xué)報(bào);2008年01期

7 宋顯晶;楊萍;劉斌;姜峰;;人臍靜脈血內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定[J];中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2008年04期

8 楊曉穎;談世進(jìn);;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞與冠心病的研究進(jìn)展[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2008年04期

9 吳建祥;梁春;任雨笙;吳宗貴;;麝香保心丸對內(nèi)皮祖細(xì)胞功能及分泌一氧化氮的影響[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;2009年06期

10 韓娟萍;哈小琴;呂同德;張衛(wèi)澤;尹強(qiáng);;內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖、遷移和黏附能力與端粒酶活性的關(guān)系[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年20期

相關(guān)會議論文 前10條

1 陳鵬;朱初麟;程江濤;杜廷海;;中醫(yī)藥對內(nèi)皮祖細(xì)胞的影響[A];第二屆全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病中青年論壇暨第二屆黃河心血管病防治論壇資料匯編[C];2011年

2 周音頻;黃嵐;宋耀明;武曉靜;晉軍;張坡;宋明寶;;粒細(xì)胞集落刺激因子動員骨髓促進(jìn)損傷血管內(nèi)皮修復(fù)[A];中國心臟大會（CHC）2011暨北京國際心血管病論壇論文集[C];2011年

3 蔡紹皙;陳斯佳;于文娟;;針刺,作為物理刺激對內(nèi)皮祖細(xì)胞的動員作用[A];第十一次中國生物物理學(xué)術(shù)大會暨第九屆全國會員代表大會摘要集[C];2009年

4 李巍;王航;秦浙學(xué);劉潔;黃嵐;;硫化氫對大鼠骨髓源內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及生理學(xué)特性影響[A];中國心臟大會（CHC）2011暨北京國際心血管病論壇論文集[C];2011年

5 張坡;黃嵐;朱鮮陽;韓秀敏;;辛伐他汀對大鼠平滑肌祖細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞遷移的不同影響[A];中國心臟大會（CHC）2011暨北京國際心血管病論壇論文集[C];2011年

6 趙剛;宋明寶;于學(xué)軍;朱光旭;于世勇;董紅梅;康華利;黃嵐;;肝細(xì)胞生長因子對低密度脂蛋白損傷內(nèi)皮祖細(xì)胞功能的影響[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

7 張坡;黃嵐;朱鮮陽;韓秀敏;;辛伐他汀對大鼠平滑肌祖細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞遷移的不同影響[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

8 趙剛;宋明寶;于學(xué)軍;朱光旭;于世勇;董紅梅;康華利;黃嵐;;肝細(xì)胞生長因子對低密度脂蛋白損傷內(nèi)皮祖細(xì)胞功能的影響[A];中國心臟大會（CHC）2011暨北京國際心血管病論壇論文集[C];2011年

9 李巍;王航;秦浙學(xué);劉潔;黃嵐;;硫化氫對大鼠骨髓源內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及生理學(xué)特性影響[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

10 徐小勇;廉姜芳;葛世俊;周建慶;;大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的中電導(dǎo)鈣離子激活鉀通道與容積敏感性氯離子通道[A];2011年浙江省心電生理與起搏學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前6條

1 廣聞;骨髓干細(xì)胞治療多種眼疾[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

2 通訊員 王其玲 記者 羅堅(jiān)梅;干細(xì)胞，，燃起人類絕處逢生新希望[N];杭州日報(bào);2005年

3 姚春雨 錢勇;蓋魯粵：要啃心衰“硬骨頭”[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

4 記者 馮衛(wèi)東;科學(xué)家誘使骨髓釋放額外成體干細(xì)胞[N];科技日報(bào);2009年

5 馮友根;注射用七葉皂苷鈉有不良反應(yīng)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

6 高春錦;高壓氧醫(yī)學(xué)有待進(jìn)一步挖掘[N];中國醫(yī)藥報(bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王s

本文編號：2554572