發(fā)布時間：2019-10-29 06:15

【摘要】： 為了研制一種新型的血吸蟲疫苗,本研究通過同源重組的方法成功的構(gòu)建了表達(dá)日本血吸蟲復(fù)合表位基因的重組偽狂犬病病毒和復(fù)合表位核酸疫苗,并對獲得的重組病毒和表位核酸苗進(jìn)行了小鼠和綿羊的免疫試驗(yàn)。 本研究選取包括磷酸丙糖異構(gòu)酶(TPI),脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP),副肌球蛋白(Paramyosin),鈣結(jié)合中性蛋白酶(Calpain)的幾個抗原基因的主要抗原表位,人工合成一段多表位基因序列,命名為TPC,將此基因序列插入日本血吸蟲26kDa GST基因,構(gòu)建一個融合表達(dá)基因GST-TPC,將此復(fù)合表位基因克隆入pVAX1真核表達(dá)載體,構(gòu)建復(fù)合表位核酸苗pVAX/GST-TPC,酶切獲取復(fù)合表位基因表達(dá)盒,與PRV疫苗株Bartha-K61的中間轉(zhuǎn)移載體(本室構(gòu)建)連接,再與PRV/LacZ基因組共轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞,藍(lán)白斑篩選獲得重組病毒PRV/GST-TPC,對重組病毒的PCR,RT-PCR,IFA鑒定表明融合基因GST-TPC整合入病毒基因組,并且能正常轉(zhuǎn)錄。同時為探討白細(xì)胞介素18的免疫佐劑活性,本研究克隆了小鼠的IL-18基因,亞克隆入pVAX1真核表達(dá)載體,構(gòu)建了真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX/IL-18,與多表位核酸苗和重組病毒聯(lián)合進(jìn)行了小鼠的攻蟲實(shí)驗(yàn)。體液和細(xì)胞免疫檢測結(jié)果表明,IL-18能有效增強(qiáng)復(fù)合表位核酸苗的抗血吸蟲免疫應(yīng)答,促進(jìn)免疫反應(yīng)向Th1型發(fā)展,有可能作為疫苗的候選佐劑之一。小鼠和綿羊的攻蟲保護(hù)實(shí)驗(yàn)表明復(fù)合表位核酸苗和重組病毒均能對血吸蟲的尾蚴攻擊產(chǎn)生免疫保護(hù)作用。在小鼠中復(fù)合表位基因核酸苗和重組病毒產(chǎn)生32.1%和35%的成蟲減蟲率,肝臟減卵率分別為33.3%和36.2%。綿羊的減蟲率分別為41.8%和48.6%,肝臟減卵率為26.3%和49.0%,為血吸蟲疫苗的下一步研究打下了良好基礎(chǔ)。
【圖文】：

PCR 和酶切鑒定。PCR 擴(kuò)增出 3000 的載體條帶。AX/GST 的 PCR 鑒定 PCR amplification ofX/GSTucts of pVAX/GST720bp圖 1.4 重Figure1.recomLan720bp

GST-TPC 的 PCR 和酶切鑒定。PCR 擴(kuò)增出 1000 的目的條 的目的帶和 3000 的載體條帶。組質(zhì)粒 pVAX/GST 的 PCR 鑒定3Results of PCR amplification ofpVAX/GST PCR products of pVAX/GST圖 1.4 重組質(zhì)粒 pVAX/GFigure1.4 Enzyme-digestrecombinant plasmid pLane1 blank plasLane2 pVAX/GST pM DL2000 Mar
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 何浙生;;人類防病的新希望——基因疫苗[J];健康博覽;1996年07期

2 譚德明,劉雙虎,李聰智,劉國珍,燕美玉,孫科柱;乙型肝炎病毒全S基因疫苗誘導(dǎo)小鼠的特異性免疫應(yīng)答[J];中國病毒學(xué);2001年03期

3 ;法艾滋病基因疫苗實(shí)驗(yàn)取得進(jìn)展[J];江蘇藥學(xué)與臨床研究;2001年01期

4 李文波,張修禮,姚志強(qiáng);乙型肝炎病毒基因疫苗誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生免疫應(yīng)答的效應(yīng)[J];臨床消化病雜志;2003年05期

5 李暉,李榕,鐘森,任紅,陳宣世,史小玲,王明勇,龍漢安;結(jié)核分枝桿菌含信號肽的Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗免疫保護(hù)效果研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2005年10期

6 張巧;馬千里;李琦;曾雪峰;王長征;;肺炎鏈球菌黏附素A基因疫苗的構(gòu)建及對小鼠鼻咽部肺炎鏈球菌攜帶的防御作用[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2008年08期

7 蘇卓娃,胡采青,傅義,陳偉,黃希寶;不同宿主在湖區(qū)日本血吸蟲病傳播中的作用[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1994年01期

8 時德仁,姚志強(qiáng);肝炎病毒基因疫苗研究現(xiàn)狀[J];實(shí)用肝臟病雜志;1997年02期

9 熊思東;徐薇;;基因免疫研究中的一些新動態(tài)[J];國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊);2001年01期

10 王洪軍,王繼群,殷震,胡曉芳;干擾素(IFN)與AIDS疫苗[J];生物技術(shù);2002年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 王欣之;矯矯;石耀軍;馮新港;苑純秀;金亞美;;日本血吸蟲7d童蟲消減cDNA文庫的構(gòu)建及測序分析[A];第二屆全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

2 蘇斌濤;劉文琪;;日本血吸蟲感染小鼠體內(nèi)IL-17的動態(tài)變化研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

3 付媛;張雪娟;盧福莊;石團(tuán)員;;日本血吸蟲融合蛋白2LHD-Sj23原核表達(dá)載體的構(gòu)建和表達(dá)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第六次代表大會暨第十一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

4 張艷麗;趙r嚺，

本文編號：2553405