【摘要】： 乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的全球性傳染病。HBV除了引起急性肝炎外,還可導(dǎo)致慢性肝炎和肝硬化,而且與肝癌的發(fā)生有著密切的關(guān)系。 曾在國內(nèi)外廣泛用于乙型肝炎預(yù)防的血源性乙肝疫苗(PDV)因血源供應(yīng)有限和潛在危險性,己經(jīng)逐步被基因工程疫苗所代替。中國倉鼠卵巢癌細(xì)胞(Chinese hamster ovary cell,CHO cell)經(jīng)基因轉(zhuǎn)染后分泌的重組乙肝表面S抗原,和乙肝病人血清來源的抗原同樣具有系統(tǒng)的抗原活性,而且在靈長類動物的實驗中發(fā)現(xiàn)CHO細(xì)胞重組乙肝抗原比血清抗原和酵母來源的抗原具有更高的免疫活性,表現(xiàn)為產(chǎn)生更多的抗體和更高的血清滴度。 本課題主要內(nèi)容是建立CHO-K1細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染乙肝表面S抗原基因的方法,并篩選出穩(wěn)定表達(dá)的CHO細(xì)胞株。首先采用分子生物學(xué)的方法制備了轉(zhuǎn)染級別的包含乙肝表面S抗原基因的兩種質(zhì)粒pS-1和pcDNA-s-1。然后,用兩種轉(zhuǎn)染方法分別轉(zhuǎn)染COS-1細(xì)胞和CHO-K1細(xì)胞,并用ELISA的方法對轉(zhuǎn)染結(jié)果進(jìn)行檢測。經(jīng)過實驗得知,磷酸鈣轉(zhuǎn)染法本身受其它很多因素影響且很大,轉(zhuǎn)染方法不穩(wěn)定;PEI轉(zhuǎn)染法可以有效的轉(zhuǎn)染細(xì)胞,實驗穩(wěn)定結(jié)果較好,并且確定了最佳的PEI/DNA的質(zhì)量比為6.7。本實驗還對PEI的毒性進(jìn)行了測定,發(fā)現(xiàn)它對CHO-K1細(xì)胞毒性不大,細(xì)胞存活最少的也有76.01%存活。最后,確定了G418的最佳篩選濃度為600ug/ml后,用PEI轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染CHO-K1細(xì)胞,經(jīng)G418加壓篩選后,用酶聯(lián)和透射電鏡檢測均得到細(xì)胞可穩(wěn)定表達(dá)乙肝表面抗原的結(jié)論。在本課題中,成功的構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)乙肝表面S抗原的CHO細(xì)胞株6H3。
【圖文】：

圖 1-1 電鏡圖片：左側(cè)是放大的兩個核衣殼 圖 1-2 電鏡圖片：乙肝表面抗原顆（箭頭所指），右側(cè)是乙肝病毒顆粒。Fig.1-1 EM pic: HB virions (right) and enlargements Fig.1-2 EM pic: HBsAg partices (twoof the two exposed cores (indicated by arrows). forms: filamentous and sphericaHBV DNA的基因組約含3200個堿基對。長鏈的長度固定，有一缺口（

圖 1-1 電鏡圖片：左側(cè)是放大的兩個核衣殼 圖 1-2 電鏡圖片：乙肝表面抗原顆（箭頭所指），右側(cè)是乙肝病毒顆粒。Fig.1-1 EM pic: HB virions (right) and enlargements Fig.1-2 EM pic: HBsAg partices (twoof the two exposed cores (indicated by arrows). forms: filamentous and sphericaHBV DNA的基因組約含3200個堿基對。長鏈的長度固定，，有一缺口（
【學(xué)位授予單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 劉水渠;;乙肝病毒抗原抗體的若干研究狀況[J];浙江臨床醫(yī)學(xué);2006年11期

2 申燁華,耿信篤;CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)研究新進(jìn)展[J];生物工程進(jìn)展;2000年04期

3 張庶民 ,馬霄 ,侯啟明 ,梁爭論 ,雷殿良 ,王安緒 ,馬玉珍 ,陳庚軍 ,魏順遠(yuǎn) ,杜恩慧 ,王鵬富 ,崔玉梅 ,于洪濤 ,裴曉春 ,劉志強(qiáng);吸附百白破乙肝(CHO)四聯(lián)疫苗接種反應(yīng)及血清學(xué)效果觀察[J];中國生物制品學(xué)雜志;2004年05期

4 要e

本文編號：2553766